牛病毒性腹泻病毒生物学特性、危害及防控

本文主要综述了牛病毒性腹泻毒的生物学特性、危害及其造成的经济损失,并介绍了国外BVDV免疫防控与根除情况,提出我国BVDV防制对策与建议。

牛病毒性腹泻病毒生物型的遗传基础

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是黄病毒科、瘟病毒属成员,主要引起牛免疫抑制、腹泻及繁殖障碍,是影响全球养牛业的重要致病原。根据BVDV在体内对细胞的致病性,目前普遍将其分为2种生物型。不同生物型的基因结构及分子致病学机制明显不同,病毒基因变异可能产生新的生物型致病。我们简要综述BVDV生物型与基因结构及疾病发生之间的关系。

猪繁殖与呼吸综合征病毒蛋白质研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种折叠的正义RNA病毒,属于动脉炎病毒科(Arteriviridae),尼多病毒目(Nidovirales)。除了动脉炎病毒科,尼多病毒目还包括冠状病毒科(Coronaviruses)。15.1～15.2kb长的PRRSV基因组通过互相重叠的开放性阅读框编码蛋白质。ORF1a翻译过程中产生pp1a多聚蛋白。ORF1b表达产生了pp1ab多聚蛋白。pp1a和pp1ab经病毒蛋白酶处理后又生成了14个非结构蛋白。一些非结构蛋白为蛋白酶(NSP1、NSP1β、NSP2和NSP4)、RNA-依赖性RNA聚合酶(NSP9)、解旋酶(NSP10)和核酸内切酶(NSP11)。ORFs2-5编码GP2-GP5,ORF6编码M,ORF7编码N蛋白。ORF2b完全包括在ORF2内,表达小的非糖基化E或2b蛋白。相当一部分的囊膜蛋白是nidoviruses所特有的,所有的结构蛋白都是感染所必需的。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的变异分析

从天津和内蒙古猪场中分离到2株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（TJ和NM1）,将TJ株经Marc-145细胞连续传代92代,得到致弱疫苗株TJM株。采用RT-PCR方法扩增TJ、NM1和TJM完整的ORF5基因片段,进行序列测定,并与其他国内外毒株的ORF5基因序列进行了比较和变异分析。结果表明：TJ株和NM1株ORF5基因与国内分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）具有较高的同源性,均为99.5%~99.8%,与欧洲型PRRSV同源性最低,分别为63.3%和63.5%。致弱疫苗株TJM与其原始毒株TJ相比有4个氨基酸发生突变（F23S,G80V,R151K,Q196R）,这些突变可能与TJ株毒力的降低有关。

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白2的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是一种由PRRS病毒（PRRSV）引起的猪的接触性传染病,主要引起母猪流产、死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔猪呼吸困难、败血症等。该病传播快、传染性强,被OIE列入93种法定报告动物疫病之一。2006年,我国暴发了高致病性PRRS（HP-PRRS）,具有更高的发病率和死亡率，给我国的养猪业带来了严重的经济损失。目前，许多研究主要集中于揭示PRRSV引发疾病的途径和机理以及影响毒力的相关蛋白，本文对PRRSV的非结构蛋白2（Non-structural protein 2，Nsp2）的研究近况进行综述。

北方三省(区)牛副流感病毒3型的血清学调查

为了解我国北方三省(区)牛副流感病毒3型(BPIV3)的感染状况,从内蒙古、吉林、山西3个省采集牛血清样品482份。采用病毒中和试验方法进行BPIV3抗体检测。结果显示,482份血清中BPIV3阳性共439份,阳性率为91.08%。吉林、内蒙、山西3省区中血清BPIV3阳性率分别97.35%、84.31%、95.15%。研究表明,中国北方三省(区)牛群中普遍存在BPIV3的感染。

利用SUMO表达系统高效表达猪O型口蹄疫病毒VP0、VP1、VP3基因

根据GenBank中公布的猪O型口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)全基因合成了FMDV结构蛋白前体蛋白P1基因,同时设计了扩增FMDV结构蛋白VP0、VP1和VP3基因的引物。以P1基因为模板,分别经PCR扩增获得FMDV VP0、VP1和VP3基因。扩增产物克隆于Blunt载体中,酶切后将目的片段连接到原核表达载体SUMO中,构建重组表达质粒SUMO-VP0、SUMO-VP1和SUMO-VP3,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS进行诱导表达。经SDS-PAGE电泳可见融合蛋白均获得高效表达,融合蛋白表观分子质量分别约为55、48和40 ku。在IPTG浓度为1.0 mmol/L,温度为37℃,诱导5 h时融合蛋白表达量最大。Western blotting结果表明,融合蛋白均可被FMDV阳性血清识别,反应原性良好。

高剂量高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒TJM-F92疫苗株对低剂量伪狂犬病毒Bartha-K61疫苗株的免疫干扰研究

为研究高剂量高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJM-F92疫苗株对低剂量伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61疫苗株是否存在免疫干扰作用,本研究对其从体液免疫水平、免疫攻毒保护水平及病理学变化等方面进行评价。结果表明,二联免疫组抗体消长规律与低剂量PRV Bartha-K61株免疫对照组抗体消长规律相一致,二联免疫组中高剂量PRRSV TJM-F92株未抑制低剂量PRV Bartha-K61株抗体生成;二联免疫组与低剂量PRV Bartha-K61免疫对照组对PRV JL1株强毒攻击保护率均为5/5;免疫病理学研究结果表明,两组免疫组攻击PRV JL1株强毒后各组织器官病理变化轻微;二联免疫组与低剂量PRV Bartha-K61免疫对照组均可对PRV强毒攻击产生良好的保护效果。综上,高剂量PRRSV TJM-F92株对低剂量PRV Bartha-K61株无免疫干扰作用。

猪O型口蹄疫病毒重组结构蛋白的纯化及间接ELISA方法的建立

将猪O型口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)的VP0、VP1、VP3基因,通过SUMO融合表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,获得大小为55、48和40ku的融合蛋白,Western blotting检测结果表明,表达的蛋白质具有良好的生物学活性。采用亲和层析法纯化表达产物,分别以纯化的SUMO-VP0、SUMO-VP1、SUMO-VP3蛋白为抗原建立了FMDV的间接ELISA检测方法。200份田间血清样品的检测结果表明建立的SUMO-VP0-ELISA、SUMO-VP1-ELISA、SUMO-VP3-ELISA检测方法均具有良好的特异性和敏感性。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(TJM-F92株)安全性和免疫保护效果研究

为进一步研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征（HP-PRRS）活疫苗（TJM-F92株）的安全性和免疫保护效果，本研究将HP-PRRS弱毒株TJM-F92与耐热保护剂混合制备疫苗，将该疫苗以每头猪2mL（10^6.4TCID50／mL）的剂量接种4周龄～5周龄仔猪进行安全性试验；并以每头猪1mL（10^5.0TCID50/mL）的剂量免疫仔猪28d后，利用同源强毒株（TJ株）攻毒进行保护效力检测。此外，分别采用10^3.5TCID50mL、10^4.0TCID50/mL、10^4.5TCID50/mL和10^5.0TCID50/mL的剂量，每头猪接种1mL，通过攻毒试验确定疫苗最小免疫剂量。结果表明：疫苗接种后，试验猪无不良反应，免疫组攻毒保护率为80％～100％，每头份疫苗病毒含量为10^4.5TCID50时对强毒攻击的保护率可达100％。本研究表明，该疫苗对猪安全，免疫保护效果良好，对HP-PRRS的防控将起到较大的推动作用。

我国牛副流感病毒3型血清学调查

为了解我国牛副流感病毒3型(BPIV3)的流行情况,本研究从黑龙江、辽宁、新疆、云南、贵州、广西、河北、山东、河南、江西、湖南和福建12个省份采集牛血清样品2 489份,并采用血清中和试验进行BPIV3抗体检测,结果显示除江西省血清样品阳性率为27.8%之外,其他省份阳性率均高于50%;2 489份血清样品中阳性样品数为1 932份,总体阳性率为77.6%。结果表明BPIV3在我国流行比较广泛,本研究的调查数据为我国BPIV3的防制提供重要的依据。

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染与免疫过程中猪细胞因子的应答及意义

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是猪的一种严重的传染性疾病,其长年流行给养猪业造成重大经济损失。接种弱毒疫苗或灭活疫苗是控制PRRS的首选策略,但在现有技术水平下,由于疫苗毒株存在免疫抑制等因素,预防效果不理想。因而,深入研究PRRSV感染和/或接种疫苗后的免疫学应答机理是研究开发新型高效疫苗的必然基础。作者回顾性地综述感染PRRSV或接种PRRSV疫苗后宿主产生细胞因子的动态规律,探讨猪体防御PRRS的机制及开发新型高效疫苗的新思路。

鉴别PRRSV野毒感染与弱毒活疫苗TJM-F92免疫d120-ELISA方法的应用

本实验研究了免疫后攻毒的GST-d120特异性抗体血清动力学变化特点,d120-ELISA和IDEXX检测不同免疫状态临床样品S/P值之间的区别与联系,并根据结果判断免疫动物是否发生野毒感染或存在弱毒疫苗的母源抗体。血清动力学实验中,免疫组6头实验动物免疫弱毒活疫苗TJM-F92(简称TJM-F92),对照组4头实验动物注射等体积PBS,第28天2组分别注射强毒TJ F3,采集血清,绘制血清动力学曲线。d120-ELISA检测结果显示,免疫组中5头免疫及攻毒后均为阴性,1头免疫1d^28d为阴性,攻毒后血清抗体水平上升并在第14天转为阳性;对照组4头动物攻毒后17d左右出现抗体阳性转化。IDEXX检测结果显示,免疫组均在第10天左右出现血清阳性转化,抗体水平逐渐上升并维持较高水平,攻毒后血清抗体无较大变化;对照组在攻毒后7d左右出现阳性转化。结果表明,d120-ELISA检出抗体阳性的时间要晚于IDEXX试剂盒10d左右,但d120-ELISA能够检测出IDEXX试剂盒无法检出的免疫TJM-F92后发生强毒感染的动物。临床应用试验中,采集并检测HP-PRRSV的TJM-F92和弱毒活疫苗JXA1-R(简称JXA1-R)免疫14d和28d后的临床血清样品,以及疑似发生PRRSV感染和未发生感染的灭活疫苗免疫猪场的样品。试验结果显示,d120-ELISA检测TJMF92免疫阳性血清为阴性;在免疫14d和28d后,d120-ELISA检出JXA1-R临床免疫血清阳性率为0%(0/15)和86.7%(13/15),相应IDEXX检出阳性率为86.7%(13/15)和100%(15/15)。d120-ELISA和IDEXX检测免疫灭活疫苗并疑似发生PRRSV感染的猪群样品的阳性率分别为45.0%(9/20)和100%(20/20),而检测未感染猪场样品的阳性率分别为0%(0/30)和40%(12/30)。综上所述,血清动力学试验和和临床应用试验结果证明,d120-ELISA可以鉴别野毒感染与TJM-F92或灭活疫苗免疫动物,为组装ELISA试剂盒、筛选并剔除TJM-F92免疫动物中发生野毒感染的动物、净化猪群奠定了基础。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒TJM-F92疫苗株对猪瘟兔化弱毒株的间隔免疫干扰研究

为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJM-F92疫苗株对猪瘟病毒(CSFV)C株的间隔免疫干扰情况,本实验设计在免疫高剂量PRRSV TJM-F92株疫苗毒后第7 d和第14 d分别免疫低剂量CSFV C株疫苗毒,并于CSFV C株疫苗毒免疫后第14 d用CSFV石门系血毒攻击实验动物,通过体液免疫水平、免疫攻毒保护水平及病理学变化等方面进行评价。结果表明,间隔7 d免疫组与间隔14 d免疫组CSFV ELISA抗体水平与CSFV C株单独免疫对照组抗体水平无显著差异;攻击CSFV石门系血毒后,间隔7 d免疫组与间隔14 d免疫组均未出现猪瘟临床症状,组织器官病理变化轻微,对CSFV石门系血毒攻击可产生良好的保护效果。CSF阴性对照组实验动物5/5表现出猪瘟明显临床症状并全部死亡。以上结果表明,高剂量PRRSV TJM-F92疫苗株与低剂量CSFV C株间隔7 d或14 d免疫,PRRSV TJM-F92株对CSFV C株无免疫干扰作用。

高剂量高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒TJM-F92疫苗株对低剂量猪瘟兔化弱毒株的免疫干扰研究

为研究高剂量高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJM-F92疫苗株对低剂量猪瘟病毒(CSFV)C株是否存在免疫干扰作用,本研究对不同方式免疫动物从体液免疫水平、免疫攻毒保护水平及病理学变化等方面进行免疫干扰评价。结果表明,高剂量PRRSV TJM-F92疫苗株与低剂量CSFV C株联合免疫组CSFV抗体水平与低剂量CSFV C株单独免疫对照组CSFV抗体水平无显著差异,联合免疫组中高剂量PRRSV TJM-F92株未抑制低剂量CSFV C株抗体生成;攻击CSFV石门血毒后,联合免疫组与低剂量CSFV C株单独免疫对照组均未出现猪瘟临床症状,组织器官病理变化轻微,两组免疫组均可对CSFV石门系血毒攻击产生良好的保护效果。阴性对照组实验动物均表现出猪瘟明显临床症状并全部死亡。本研究表明,高剂量PRRSV TJM-F92株对低剂量CSFV C株无免疫干扰作用。本研究为PRRSV免疫防制措施的制定提供了实验依据。

猪繁殖与呼吸综合征病毒TJM株5′和3′非翻译区克隆与测序

为了获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJM株5′非翻译区(5′UTR)和3′非翻译区(3′UTR)的准确序列,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术进行克隆测序。结果表明,5′和3′末端快速扩增技术(5′RACE和3′RACE)能很好地扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒的末端序列,分别获得长度为493bp和750bp的片段。与NCBI中已发表的原野毒株TJ株序列(EU860248.1)及其他毒株比对分析发现,TJM株5′UTR较TJ株有4处突变,突变后与XJu-1株序列完全一致,其中,前3处突变与许多亚洲毒株相同,3′UTR序列没有改变。通过预测RNA二级结构发现,TJM株5′UTR核苷酸序列的改变能够影响RNA二级结构,而该二级结构是病毒复制和拯救的关键。TJM株5′和3′末端序列的获得,为病毒基因组功能结构分析和全长感染性克隆的构建奠定了基础。

口服疫苗背后的真相

最近有公司推出＂含疫苗的教槽料＂新产品,实现＂不打针也可免疫＂的功能,使得教槽料具有营养、免疫、保健功能,我们追踪该公司,被告知是使用乳酸菌作为抗原递送载体,在三种乳酸菌质粒中分别插入传染性胃肠炎、流行性腹泻和圆环病毒的抗原,并在体外表达产物后,与一些酶和肽制剂添加入教槽料中,原理就是口服了含乳酸菌、

牛呼吸道合胞体病毒检测方法研究进展

牛呼吸道合胞体病毒是引起牛呼吸道疾病的主要病原之一。进行牛呼吸道合胞体病诊断时,首先通过临床症状观察以及病理剖检变化进行初诊,然后再进行实验室诊断。其实验室检测主要依赖于病原学诊断和血清学诊断,病原学诊断方法主要包括细胞分离培养鉴定、聚合酶链反应。血清学方法包括中和试验、免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验等。近年来聚合酶链反应﹑酶联免疫吸附试验等方法得到快速发展,凭借其高效、快速、灵敏性高的特点成为牛呼吸道合胞体病毒检测的常用方法。牛呼吸道合胞体病在全球范围内流行,对各国养牛业造成极大危害。论文综述了牛呼吸道合胞体病毒检测方法的研究进展,为牛呼吸道合胞体病的诊断和预防提供参考。

内蒙古牛病毒性腹泻病毒血清学调查

为了解内蒙古自治区集约化养牛场病毒性腹泻的感染情况。用致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒毒株制备中和抗原,通过中和实验对采自乌兰浩特、巴彦淖尔和呼和浩特地区6个集约化奶牛场的509份血清进行了牛病毒性腹泻病毒抗体检测。结果表明:共检出阳性血清297份,6个牛场的牛病毒性腹泻病毒血清阳性率分别为55.10%、38.80%、45.50%、50.00%、77.80%、33.33%;乌兰浩特、巴彦淖尔、呼和浩特这3个地区的平均阳性率分别为77.80%、48.70%、33.33%,总血清阳性率为58.35%。说明内蒙古地区存在牛病毒性腹泻病毒的感染,应采取相应的措施净化牛场。

副流感病毒对不同宿主致病性研究进展

副流感病毒(PIV)广泛地存在于自然界,其基因型较多,宿主范围广泛,不仅引起人的呼吸道疾病,而且使牛,羊,犬等动物感染发病,给畜牧业生产造成较大的经济损失。论文就副流感病毒的病毒学基础、致病机制、引起不同宿主动物特别是牛、羊、犬等的广泛感染流行情况进行综述,为副流感病毒致病机制的研究以及诊断和预防策略的提出提供理论依据。