鼠白细胞介素-33真核质粒的构建及其在GL261中的稳定表达

目的构建鼠白细胞介素．33（IL-33）真核表达质粒，建正并检测稳定表达IL-33的细胞株GL261。方法从Genebank找出鼠IL-33基冈全长序列（801bp），人一合成、装载于表达载体pEZ—M03，扩增后酶切鉴定。将鉴定正确的质粒转染的小鼠胶质瘤细胞G1261，并用浓度为200mg／L的G4l8筛选出阳性克隆，采用实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）检测目的基因表达量；Westernblot法检测目的蛋白的表达量，并观察转染后的G1261细胞体外生长状况。结果成功构建鼠IL-33真核质粒pEZ—M03-raiL33，经过浓度为20mg／L的G418T作液筛选mr稳定高表达鼠IL-33的细胞株GL261，且其生长状态未受到转染基凶的影响（P〉0．05）。Real—timePCR检测目的基因在瞬转、稳转细胞株中皆为高表达（P〈0．01）。Westernblot检测到稳转细胞株中目的蛋门明显商表达（P〈0．01）。结论本研究构建的鼠IL-33真干玄质粒能于GL261111获得稳定高表达。