肝细胞癌人源抗c-Met抗体Fab的筛选及鉴定

目的从大容量人源Fab抗体库中筛选全人源抗c-Met抗体，并对抗体与肝癌细胞的结合活性进行初步鉴定。方法利用Met-Fc融合蛋白对大容量人源Fab抗体库进行固相筛选，经过5轮固相筛选，随机挑选30个克隆经酶联免疫吸附法差减鉴定，阳性克隆进行可溶性表达；用c-Met表达阳性的人肝癌细胞株鉴定抗c-Met抗体Fab的结合活性。结果Western blot、免疫荧光结果显示，c-Met分子表达于SMMC721、BEL7402人肝癌细胞膜上；从大容量人源Fab抗体库中筛选出1株抗c-Met抗体Fab（AM2-26），经免疫共沉淀、荧光激活细胞分类术、免疫荧光分析，结果显示AM2-26与人肝癌细胞表面c-Met分子有较好的结合活性。结论从人源Fab抗体库中筛选的AM2-26能够与肝癌细胞表面c-Met分子特异性结合，为研制用于肝癌生物治疗的靶向药物，提供了候选分子。