HPLC及LC-MS测定榛子中氯吡苯脲和多菌灵残留

本文采用高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱-质谱法(LC-MS)对干果榛子中氯吡苯脲和多菌灵残留量进行含量测定.HPLC和LC-MS均使用C18色谱柱,含量测定采取等度洗脱,流动相:甲醇-水(55∶45,体积比);体积流量:1.0 mL·min-1;测定波长:260 nm;柱温:30℃.LC-MS采取电喷雾离子源,梯度洗脱,体积流量:0.6 mL·min-1,柱温:30℃.结果表明,榛子中氯吡苯脲与多菌灵存在残留,氯吡苯脲质量浓度在1.00~10.00μg·mL-1范围内线性关系良好,加样回收率在95.58%~100.58%;多菌灵质量浓度在1.005~15.075μg·mL-1范围内具有良好的线性关系,加样回收率在95.61%~104.39%.实验证明,HPLC与LC-MS相结合的方法具有操作简便、灵敏度高、检出限低等优点,能有效地检测到榛子样品中膨大剂氯吡苯脲及杀菌剂多菌灵的残留,并确定其残留量,线性关系和回收率结果均令人满意.根据被检测的8批样品中氯吡苯脲和多菌灵两项农药残留量推断,作为一般干果食用榛子是安全的.

威灵仙栽培品和野生品的齐墩果酸含量测定及指纹图谱研究

目的 考察人工栽培的威灵仙能否达到2020版《中华人民共和国药典》(一部)对齐墩果酸含量不得低于干燥品0.3%的要求,同时比较栽培品和野生品中齐墩果酸的含量差别。建立威灵仙的指纹图谱,分析栽培品和野生品的差异性。方法 参照2020版《中华人民共和国药典》(一部)测定样品的齐墩果酸含量,通过聚类分析和非配对样本t检验比较栽培品和野生品的含量差别。基于HPLC(DAD)建立威灵仙75%乙醇-水提取物的指纹图谱,通过相似度评价、主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)确定样品之间的差异性。结果 含量测定结果显示,栽培品能达到2020版《中华人民共和国药典》(一部)关于其含量的要求,且栽培品与野生品齐墩果酸含量差异无统计学意义(P>0.05)。剔除特殊样品后建立的指纹图谱共匹配出9个共有峰,通过相似度评价发现产自辽宁省西南部的样品和产自辽宁省东北部的样品化学成分差异较大。通过PCA和OPLS-DA发现建立指纹图谱的方法能够对栽培品和野生品进行区分,并确定出保留时间(RT)为13.984、55.772、70.646、84.891 min的峰为差异性色谱峰。差异性色谱峰峰面积比较结果显示栽培品RT为13.984 min的差异性色谱峰峰面积明显高于野生品(P<0.05),其余3个差异性色谱峰峰面积均明显低于野生品(P<0.05)。结论 研究发现从齐墩果酸含量的角度无法区分威灵仙的植物基源。建立的指纹图谱能够方便快速地区分威灵仙的植物基源,为威灵仙的质控和高效利用提供参考。

基于近红外光谱结合化学计量学的复方感冒灵颗粒浸膏中蒙花苷的检测研究

目的:本研究旨在建立近红外光谱法快速检测复方感冒灵颗粒浸膏中蒙花苷的方法。方法:通过近红外光谱仪对复方感冒灵颗粒浸膏进行扫描,通过对比不同预处理方法,使用SNV的预处理方法,结合PLS方法建立浸膏中蒙花苷定量模型。结果:相关系数R为0.9044,预测值和实际值之间没有明显的差异(P > 0.05)。结论所建立的模型准确度高,适用于复方感冒灵颗粒浸膏的蒙花苷的快速检测。本研究旨在建立近红外光谱法快速检测复方感冒灵颗粒浸膏中蒙花苷的方法。

基于近红外光谱结合化学计量学的复方感冒灵颗粒原药材南板蓝根中水分的检测研究

目的:本研究旨在建立近红外光谱法快速检测复方感冒灵颗粒原药材南板蓝根中水分的方法。方法:通过近红外光谱仪对复方感冒灵颗粒原药材南板蓝根药材粉末进行扫描,使用一阶导数的预处理方法,结合PLS方法建立南板蓝根水分定量模型。结果:相关系数R为0.9022,RMSEC = 0.1683,预测值和实际值之间没有明显的差异(P > 0.05)。结论:该方法建立的水分定量模型,适用于复方感冒灵颗粒原药材南板蓝根的水分的快速检测。

复方感冒灵颗粒质量标准提升研究

目的:提升复方感冒灵颗粒质量标准。方法:采用薄层色谱法,以灰毡毛忍冬皂苷乙、五指柑、异牡荆苷、蒙花苷和三叉苦作为对照进行定性鉴别;采用高效液相色谱法,以对乙酰氨基酚、咖啡因和蒙花苷作为指标成分进行定量测定。结果:薄层色谱斑点清晰且分离度好;对乙酰氨基酚、咖啡因和蒙花苷分别在1.011~2.359 mg/mL(r=0.9999)、0.073~0.171 mg/mL(r=0.9999)和5.03~160.9μg/mL(r=0.9999)的范围内与峰面积呈良好的线性关系;对乙酰氨基酚、咖啡因和蒙花苷的平均加样回收率分别为100.46%、101.13%和100.10%。结论:从10批产品数据综合分析,建议本品每袋(14 g)含对乙酰氨基酚(C_(8)H_(9)NO_(2))应为标示量的85.0%~115.0%,含咖啡因(C_(8)H_(10)N_(4)O_(2)·H_(2)O)应为标示量的85.0%~115.0%,含野菊花以蒙花苷(C_(28)H_(32)O_(14))计且不得少于0.4 mg。所建立的方法可为复方感冒灵颗粒质量评价及控制提供科学依据。

左归降糖益肾方HPLC指纹图谱及4种成分的含量测定研究

目的采用HPLC建立左归降糖益肾方指纹图谱,并对4个主要成分进行含量测定。方法对色谱柱型号、流动相系统、梯度洗脱条件、检测波长以及供试品处理方法等条件进行优化,最终确定了最佳液相条件:选用色谱柱为Welch ultimate AQ-C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相系统为甲醇-0.1%甲酸溶液;紫外检测波长为254 nm;供试品溶液提取溶剂为甲醇溶液。并对8批次左归降糖益肾方HPLC指纹图谱进行相似性分析判断批次间稳定性。结果利用HPLC指纹图谱确定了左归降糖益肾方21个共有峰,并指认了9个色谱峰;8批次左归降糖益肾方指纹图谱的相似度均大于0.920;4个有效成分马钱苷、盐酸药根碱、盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的平均含量分别为(183.93±9.55)、(42.64±4.77)、(198.01±9.49)、(96.36±9.00)μg·mL-1。结论建立的左归降糖益肾HPLC方指纹图谱方法简便,准确、重现性好,可为左归降糖益肾方的质量控制体系提供参考。

HPLC法测定复方感冒灵颗粒中9种成分的含量

目的:建立复方感冒灵颗粒中9种成分的同时含量测定方法。方法:采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;检测波长为327 nm;柱温为30℃。结果:对乙酰氨基酚、新绿原酸、绿原酸、咖啡因、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、蒙花苷分别在相应的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为102.49%、97.64%、98.99%、100.37%、99.31%、98.46%、97.99%、98.89%、98.18%;10批样品中9种成分的含量范围分别为11.06~12.93 mg/g、0.22~0.37 mg/g、0.24~0.43 mg/g、0.68~0.81 mg/g、0.30~0.52 mg/g、0.17~0.30 mg/g、0.06~0.13 mg/g、0.15~0.28 mg/g、0.51~0.80 mg/g。结论:该方法可为复方感冒灵颗粒多指标质量评价及控制提供科学依据。

HPLC法测定复方感冒灵流膏中7种成分的含量

目的建立同时测定复方感冒灵流膏中7种成分含量的高效液相色谱法。方法采用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.4%磷酸水溶液(梯度洗脱)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长327 nm,柱温为30℃。结果新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸C、异绿原酸B、异绿原酸A、蒙花苷质量浓度分别在5.681~113.62μg/mL(r=0.9996)、6.42~128.4μg/mL(r=0.9995)、6.806~136.12μg/mL(r=0.9996)、3.924~78.48μg/mL(r=0.9996)、4.863~97.26μg/mL(r=0.9994)、2.273~45.46μg/mL(r=0.9991)、43.08~861.6μg/mL(r=0.9993)范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率(n=6)分别为97.79%、98.24%、96.92%、97.84%、99.23%、99.00%、100.04%。结论所建立的高效液相色谱法能为复方感冒灵流膏的质量控制提供依据。

HPLC法同时测定五指柑中9种成分

目的建立HPLC法同时测定五指柑中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异荭草苷、荭草苷、异牡荆素、木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷、木犀草素-3′-葡萄糖醛酸苷的含量。方法五指柑60%甲醇提取物的分析采用Welch ultimate C18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相乙腈-0.5%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长340 nm。结果 9种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.999 5),平均加样回收率97.21%~98.39%, RSD 1.21%~1.87%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于五指柑的质量控制。

复方板蓝根颗粒标准研究与产品评价

目的:对变更工艺后的复方板蓝根颗粒质量标准进行研究,并对市售产品进行评价。方法:采用薄层色谱法,以L-脯氨酸、精氨酸、亮氨酸和靛玉红作为指标成分进行定性鉴别;采用高效液相色谱法,以尿苷、鸟苷、(R,S)-告依春和腺苷作为指标成分进行定量测定,并对32批市售复方板蓝根颗粒样品进行质量分析评估。结果:薄层色谱斑点清晰,分离度好;尿苷、鸟苷、(R,S)-告依春和腺苷分别在0.004~0.209μg/mL(r=1.000)、0.002~0.102μg/mL(r=1.000)、0.0008~0.0420μg/mL(r=1.000)和0.001~0.061μg/mL(r=1.000)的范围内与峰面积呈良好的线性;尿苷、鸟苷、(R,S)-告依春和腺苷的平均回收率(n=6)分别为105.84%、101.13%、104.04%和107.29%。结论:建立的质量标准能够控制产品质量。对市售复方板蓝根颗粒32批样品数据综合分析,尿苷、鸟苷、腺苷的总含量差异较大,故建立可控、合理的质量标准对其质量控制很有必要。

狭山野豌豆总黄酮富集工艺研究

目的:对狭山野豌豆总黄酮的富集工艺进行研究.方法:实验以静态吸附和静态解吸附为考察指标,对10种不同型号的大孔树脂进行筛选,优选出对狭山野豌豆总黄酮具有较好吸附和分离性能的树脂,并进一步对该树脂进行纯化工艺考察.结果:优选出的大孔树脂型号是HPD-826,上样质量浓度为0.1 g/mL,用1 mol/mL HCl将样品水溶液的pH调节为5~6,上样体积为5倍树脂柱床体积,当调节流速为2 mL/min时进行动态吸附,洗脱剂为70%乙醇水溶液,以3 mL/min流速进行洗脱,洗脱体积为10倍树脂床体积数.通过HPD-826型大孔树脂对狭山野豌豆总黄酮富集,结果为3.28960 mg/g.结论:HPD-826型大孔树脂适于对狭山野豌豆总黄酮的富集,富集量好于乙酸乙酯萃取的方法.

复方感冒灵颗粒HPLC指纹图谱建立及化学成分鉴定

目的建立复方感冒灵颗粒(山银花、五指柑、对乙酰氨基酚等)HPLC指纹图谱,并鉴定其化学成分。方法该药物50%甲醇提取液的分析采用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长290 nm;柱温30℃。然后,通过HPLC-Q-TOF-MS/MS法进行定性鉴定。结果 10批样品指纹图谱中有11个共有峰,相似度大于0.9。颗粒中鉴定出17种化学成分,分别为奎尼酸、丁香酸、对乙酰氨基酚、原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸、咖啡因、隐绿原酸、松柏醛、咖啡酸、二咖啡酰奎尼酸、断氧化马钱子苷、毛冬青酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、蒙花苷。结论该方法稳定可靠,可用于复方感冒灵颗粒的质量评价。

五指柑药材质量标准研究

目的建立五指柑药材的质量标准。方法以隐绿原酸、异牡荆苷和木犀草素-3’-葡萄糖醛酸苷为对照,建立五指柑薄层鉴别方法;建立异荭草苷和木犀草素-3’-葡萄糖醛酸苷含量的HPLC测定方法,采用Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长:340 nm;流速:1.0 mL·min^-1;柱温:30℃。结果五指柑在薄层色谱中检出隐绿原酸、异牡荆苷和木犀草素-3’-葡萄糖醛酸苷,且分离效果较好;含量测定结果表明,异荭草苷在11.64~116.4μg·mL^-1,木犀草素-3’-葡萄糖醛酸苷在21.2~212.0μg·mL^-1质量浓度范围内具有良好的线性关系,回归方程分别为Y=52 474X+35 233,r=0.999 6;Y=82 694X-1 199.4,r=0.999 9,平均回收率分别为97.19%、97.06%,RSD为1.92%、1.35%。10批五指柑异荭草苷的含量为0.24~0.80 mg·g^-1,木犀草素-3’-葡萄糖醛酸苷的含量为0.26~1.57mg·g^-1。结论所建立的方法具有良好的专属性和准确性,可用于五指柑药材的质量控制。

复方感冒灵流膏的HPLC指纹图谱研究

目的建立复方感冒灵流膏HPLC指纹图谱的分析方法,并测定7种成分的含量。方法采用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.4%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长290 nm,柱温为30℃。绿原酸对照品用作参照。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012年版软件,对10批复方感冒灵流膏样品进行指纹图谱分析及相似度计算。结果 10批复方感冒灵流膏指纹图谱与对照指纹图谱的相似度值均>0.99,相似度良好。结论所建立的HPLC指纹图谱能表达复方感冒灵流膏中多组分的整体特征,为复方感冒灵颗粒的质量控制提供了方法依据。

复方感冒灵颗粒抗流感相关药效作用研究

目的:建立复方感冒灵颗粒(CGG)全方、化学药(CM)组、中药(TCM)组的抗病毒、抑菌、解热、抗炎等实验,以期综合评价复方感冒灵颗粒治疗流行性感冒的药效作用,为临床用药提供参考。方法:分别采用甲型流感病毒制备小鼠病毒感染模型,金黄色葡萄球菌制备小鼠细菌感染模型,酵母菌致大鼠发热模型及巴豆油致小鼠耳肿胀模型,对CGG、CM、TCM的抗病毒、体内体外抑菌、解热和抗炎的作用效果进行研究。结果:小鼠感染流感病毒后,给药组肺组织中病毒载量较模型组明显降低(P<0.05);CGG、CM、TCM组小鼠的肺指数抑制率分别为19.68%、8.30%、8.54%;各组存活时间较模型组明显延长(P<0.05),延长率分别为29.6%、5.4%、12.9%;病毒感染致小鼠死亡抑制率分别为26.7%、0、10.0%。在体内注射金黄色葡萄球菌感染小鼠致死实验中发现,CGG、CM、TCM对小鼠的死亡抑制率分别为10.0%、15.0%、0;体外抑菌和杀菌实验发现CGG、TCM对金黄色葡萄球菌等标准株均显示出抑制和杀灭作用。解热实验中发现CGG、CM可在给药后1、2 h显著抑制酵母致大鼠发热反应(P<0.01)。抗炎实验中发现给药组耳肿胀值明显低于模型组(P<0.05),CGG、CM、TCM组抑制率分别为31.7%、22.6%、26.8%。结论:CGG具有抗病毒、抑菌、解热、抗炎等功效,且CGG效果优于TCM、CM,提示TCM和CM发挥了协同作用,可用于治疗感冒引起的头痛、发热、鼻塞、流涕、咽痛等上呼吸道感染疾病。

基于超高效液相色谱法-串联质谱技术和网络药理学的复方感冒灵成分及作用机制验证

目的:采用超高效液相色谱法-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术系统研究复方感冒灵颗粒药效物质成分及体内代谢谱,并结合网络药理学探讨发挥药效的作用机制。方法:采用UPLC-MS/MS法对复方感冒灵颗粒主要化学成分以及入血成分进行鉴定。采用网络药理学的方法构建“成分-靶点-功效-疾病”网络,通过蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络筛选核心靶点,进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:从复方感冒灵颗粒醇提物中共鉴别出170个化合物和21个入血成分,构建了复方感冒灵颗粒成分谱及代谢谱。预测核心靶点为肿瘤坏死因子(TNF)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、表皮生长因子受体(EGFR)、胱天蛋白酶3(CASP3)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、促分裂原活化的蛋白激酶1(MAPK1)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、白细胞介素-2(IL-2)以及促分裂原活化的蛋白激酶14(MAPK14),与解热、抗炎与抗病毒功效对应。结论:本研究采用UPLC-MS/MS技术构建了复方感冒灵颗粒的物质成分谱及体内代谢谱,从网络药理学角度阐明复方感冒灵多成分、多靶点的整体调节特点,初步揭示解热、抗炎与抗病毒的物质基础和作用机制,为复方感冒灵的深入研究奠定了基础。

复方板蓝根颗粒HPLC指纹图谱研究

目的:建立复方板蓝根颗粒的HPLC指纹图谱的分析方法,用于复方板蓝根颗粒的质量控制。方法:采用Kromasil C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.8 mL·min^(-1),检测波长254 nm,柱温为25℃,对指纹图谱进行共有峰标定,以R,S-告依春为参照峰计算各共有峰的相对保留时间和峰面积比值,采用2012年版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件对10批复方板蓝根颗粒进行相似度评价。结果:复方板蓝根颗粒HPLC指纹图谱分析方法的专属性、精密度、重现性和稳定性均良好;10批复方板蓝根颗粒指纹图谱与对照指纹图谱的相似度值均>0.90,相似度良好。结论:所建立的HPLC指纹图谱能够表达复方板蓝根颗粒中多组分的整体特征,为复方板蓝根颗粒的质量控制提供了方法依据。

近红外光谱法快速测定复方感冒灵颗粒中对乙酰氨基酚的含量

建立了近红外光谱(NIRS)法快速测定复方感冒灵待分装颗粒中对乙酰氨基酚(1)的含量。本研究共收集了232个复方感冒灵颗粒样品,采用高效液相色谱(HPLC)法测定其中1的含量,并通过积分球漫反射方式收集颗粒的NIRS,运用偏最小二乘法(PLS)建立了1含量的NIRS定量分析模型。随后,采用不同的光谱波段、主因子数及预处理方法对模型进行优化。结果显示,在建立的优化模型中,交叉验证均方根误差(RMSECV)及R2分别为0.259、0.9658;预测集的验证集均方根误差(RMSEP)及R分别为0.253、0.9992。上述试验证实了NIRS与PLS结合能够成功用于监测复方感冒灵待分装颗粒中1的含量。所建立的近红外光谱快速检测方法具有模型性能好、预测精度高、快速分析、无损的优点。该方法的应用能够大幅提高复方感冒灵颗粒的生产流转效率。

南板蓝根化学成分及其体外抗肿瘤活性研究

目的研究药材南板蓝根的化学成分及其抗肿瘤活性。方法采用硅胶柱色谱法、葡聚糖凝胶柱色谱法、高效液相色谱法.等多种色谱手段进行分离纯化得到单体化合物,经核磁共振技术确定化合物的结构,并对化合物进行了抗肿瘤活性的筛选。结果从该药材乙醇提取物中分离鉴定了24个化合物,分别为3-羧基吲哚(1),吲哚-3-乙酸(2),吲哚-3-甲酯(3),色胺酮(4),老鼠簕碱A(5),2(3H)-苯并噁唑啉酮(6),白桦脂醇(7),山香酸A(8),2α-羟基齐墩果酸(9),β-香树脂醇(10),川陈皮素(11),橘皮素(12),胭木二酮(13),(+)-楝叶吴茱萸素B(14),两面针宁(15),(7'S,8'S)-双棱扁担杆素(16),(+)-南烛木树脂酚(17),(+)-丁香脂素(18),啤酒甾醇(19),β-胡萝卜苷(20),1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-3-羟基丙烷-1-酮(21),O-邻苯二甲酸二-(2-乙基癸)-酯(22),1-亚油酰甘油(23)和10,12-十八碳二烯酸-9-羟基甲酯(24)。对所有化合物进行了两种人类肿瘤细胞(HCT116和MGC803)增殖抑制活性的筛选,结果显示化合物3和4对胃癌细胞MGC803的增殖抑制活性的IC_(50)分别为5.53和4.26μmol·L^(-1);对结直肠癌细胞HCT116的增殖抑制活性的IC_(50)分别为23.96和18.86μmol·L^(-1)。结论化合物2,3,5,8~17,19和21~24为首次从该植物中分离得到;化合物3和4对MGC803细胞有较强的增殖抑制活性,对HCT116细胞有一定的增殖抑制活性。

不同剂量^(60)Co辐照复方感冒灵颗粒安全性比较研究

目的:对复方感冒灵颗粒经不同剂量强度的^(60)Co辐照灭菌前后的安全性进行评价。方法:急性毒性试验以动物最大耐受剂量灌胃给药,观察急性毒性反应和死亡情况;30 d喂养试验观察大鼠的一般行为情况、体质量、血液学指标、血清生化指标、各脏器质量及脏器系数(脏器与体重的比值)。结果:急性毒性试验结果为未发现毒性反应。30 d喂养试验结果,与对照组相比,不同剂量强度辐照后各组大鼠一般情况、体质量无显著性差异,但血液学指标、血液生化指标、脏器质量及脏器系数、病理组织学检查均出现不同程度的改变,尤其集中在10 kGy辐照后雄性大鼠肝脏及生殖系统方面,但该变化可逆。结论:高剂量;Co辐照可能造成雄性大鼠肝损伤及生殖系统改变。