中药㕮咀历史与现代研发

中药饮片的传承创新是中医药发展的动力源泉,随着中医药现代化推进及人民健康用药的需求,亟需推动中药饮片的传承创新发展。㕮咀作为传统炮制方法,应用历史悠久,通过其加工制备的饮片提取利用率高、质量均一、疗效稳定,便于临床调剂,且仍保留传统饮片鉴别特征,具有广阔开发前景。本文系统梳理关于㕮咀历代古籍及文献资料,总结㕮咀饮片的临床应用及发展优势。在此基础上,提出建立㕮咀饮片的文献考证、炮制加工、工业化生产、质量与安全评价的研究体系,实现㕮咀饮片的研究及开发利用,以促进中药炮制的传承创新与中药饮片产业高质量的发展。

蟾蜍油炮制工艺及质量评价方法研究

目的:优化蟾蜍油干燥工艺,并建立以高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱及氨基酸含量测定为主的质量评价方法。方法:以氨基酸和浸出物为指标,进行蟾蜍油热风干燥、自然阴干、冷冻干燥及真空干燥工艺的优选,分别考察了热风干燥的加热温度、加热时间、物料厚度,冷冻干燥的预冻时间、冷冻干燥时间,真空干燥的温度及时间对蟾蜍油的影响。采用HPLC建立15批蟾蜍油的指纹图谱,确定共有峰并进行相似度评价;同时,采用柱前衍生化法测定氨基酸含量。结果:蟾蜍油最佳工艺为不叠加样本,50℃热风干燥11 h。HPLC指纹图谱中共确定7个共有峰,相似度均大于0.99;异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸质量分数分别为0.40%~0.57%、0.57%~0.78%、0.54%~0.75%、0.26%~0.86%。结论:所确定的工艺及质量评价方法简便、重复性好,可为蟾蜍油的加工炮制及质量评价提供参考。

酒大黄(唐古特大黄)配方颗粒超高效液相色谱指纹图谱及化学模式识别研究

目的为酒大黄(唐古特大黄)配方颗粒的质量评价提供参考。方法采用超高效液相色谱(UPLC)法,色谱柱为CORTECS UPLC T3柱(100 mm×2.1 mm,1.6μm),流动相为甲醇-0.05%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为0.25 mL/min,检测波长为265 nm,柱温为35℃,进样量为1μL。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)建立21批样品的UPLC指纹图谱,并进行相似度评价。采用聚类分析(CA)法、主成分分析(PCA)法、正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)法评价样品质量,并筛查标志性成分。结果共标定并指认出18个共有峰。21批样品的指纹图谱相似度均大于0.950,3种分析方法均将样品分为3类,OPLS-DA法分析显示,异莲花掌苷、白藜芦醇-4'-O-β-D-(6''-O-没食子酰)葡萄糖苷、儿茶素、大黄酚、没食子酸、番泻苷A、莲花掌苷和大黄酚-1-O-β-D-葡萄糖苷为制剂的标志性成分。结论该方法简单可行,可为酒大黄(唐古特大黄)配方颗粒的质量评价提供参考。

南瓜子饮片标准汤剂的制备及质量标准的研究

目的 制备南瓜子饮片标准汤剂,建立其质量评价方法,为制定南瓜子配方颗粒质量标准提供参考依据。方法 按照传统煎煮方法制备15批南瓜子饮片标准汤剂,测定其出膏率范围,并建立了饮片标准汤剂质量标准,包括采用薄层色谱法(TLC)以丙氨酸为对照进行定性鉴别,采用高效液相色谱法(HPLC)建立特征图谱及质量分数测定方法,并计算其转移率。结果 15批南瓜子饮片标准汤剂出膏率范围为10.4%~18.3%,均值为15.1%;薄层色谱斑点清晰,分离度好,比移值适当;苯丙氨酸质量分数范围为0.56~1.99 mg/g,均值为1.43 mg/g,转移率范围为42.7%~86.1%,均值为69.7%,所建立的特征图谱呈现13个特征峰,相似度均大于0.9。结论 建立了南瓜子饮片标准汤剂的质量标准,测定方法全面、准确,可为南瓜子配方颗粒的标准制定提供参考。

十大功劳叶UPLC特征图谱及多指标成分含量测定研究

目的建立十大功劳叶特征图谱,采用相似度、系统聚类分析和主成分因子分析,对不同产地药材质量差异进行对比分析,并评价其质量水平。方法以Waters CORTECS shield RP 18(100 mm×2.1 mm,1.6μm)为色谱柱,以乙腈-0.05 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液为流动相,进行梯度洗脱,柱温为30℃,流速为0.3 mL·min^(-1);检测波长为326 nm,对15批十大功劳叶样品进行检测。结果共确定特征峰10个,指认了其中3个成分为4-O-咖啡酰基奎宁酸甲酯、绿原酸甲酯和咖啡酸甲酯。15批样品的相似度在0.913~0.987。系统聚类分析结果显示,15批不同产地药材可聚为3类,共提取两大主成分,累积方差贡献率高达87.842%。15批药材4-O-咖啡酰基奎宁酸甲酯含量为0.015%~0.038%,绿原酸甲酯含量为0.145%~0.380%,咖啡酸甲酯含量为0.014%~0.166%,3种成分总含量为0.189%~0.575%。结论本试验建立了十大功劳叶特征图谱及多指标成分含量测定方法,可用于鉴别十大功劳叶的真伪以及评估十大功劳叶的质量。

芡实配方颗粒高效液相色谱特征图谱和4个成分含量测定

目的建立芡实配方颗粒高效液相色谱特征图谱,并测定其中腺苷、没食子酸、鸟苷和鞣花酸的含量。方法以Shim-pack GIST C18-AQ(4.6 mm×150 mm,3.0μm)为色谱柱,以乙腈-0.5%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱,柱温20℃,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长258 nm。建立芡实配方颗粒特征图谱,并借助中药色谱指纹图谱相似度系统评价其相似度。结果芡实配方颗粒特征图谱共确定了9个共有峰,并指认了7个共有峰成分,其中峰2为腺苷、峰3为没食子酸、峰4为鸟苷、峰6为短叶苏木酚酸、峰7为柯里拉京、峰8为尿石素M5、峰9为鞣花酸。样品相似度均在0.96以上。含量测定结果显示,腺苷含量为0.169~0.344 mg·g^(-1),没食子酸含量为0.469~1.956 mg·g^(-1),鸟苷含量为0.162~0.439 mg·g^(-1),鞣花酸含量为0.101~0.617 mg·g^(-1)。结论建立的芡实配方颗粒特征图谱及主成分含量测定方法重现性好、适用范围广,可为芡实配方颗粒的质量控制提供参考。

苍耳子标准汤剂的质量标准研究

目的建立苍耳子标准汤剂的质量标准。方法按照传统煎煮方法制备12批苍耳子标准汤剂,测定其出膏率范围;采用高效液相色谱法(HPLC法)建立苍耳子标准汤剂的特征图谱;采用薄层色谱法(TLC法)以绿原酸对照品、苍耳子对照药材为参照进行定性鉴别。结果12批苍耳子标准汤剂的出膏率波动范围为6.0%~9.9%,均值为8.1%。共标定10个共有峰,指认8种成分,分别为新绿原酸(峰2)、绿原酸(峰3)、隐绿原酸(峰4)、咖啡酸(峰5)、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸(峰6)、异绿原酸B(峰7)、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸(峰8)、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸(峰10)。薄层鉴别色谱斑点清晰,分离度好,比移值适当。结论建立了苍耳子标准汤剂的质量标准,测定方法全面、准确,可为苍耳子配方颗粒的质量标准制定提供参考。

一测多评法同时测定酒续断配方颗粒中6种成分的含量

目的采用UPLC法对酒续断配方颗粒的6个含量指标马钱苷酸、川续断皂苷Ⅵ、绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C进行含量测定,并应用一测多评法同时测定6个指标的含量,为其质量控制提供依据。方法采用超高效液相UPLC-UV,以ACQUITYHSST3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)为色谱柱,以乙腈-0.05%磷酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长为220 nm,流速0.3 ml/min,进样体积2μl,柱温30℃。同时测定酒续断配方颗粒中马钱苷酸、川续断皂苷Ⅵ、绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C 6种成分的含量,采用一测多评法,以绿原酸为内参物,通过相对校正因子测定马钱苷酸、川续断皂苷Ⅵ、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C含量,同时采用外标法测定多批酒续断配方颗粒中这6个指标成分的含量,比较计算值与实测值的差异,验证一测多评法的准确性。结果建立相对校正因子重现性良好,采用相对校正因子计算的含量值与实测值之间无明显差异。结论本研究建立的测定方法鉴别快捷、准确、重复性良好,可为酒续断配方颗粒质量控制的评价提供数据依据。

清半夏工业化大生产炮制工艺优化研究

目的:比较浸泡法和煎煮法对清半夏饮片质量的影响,并优选清半夏的最佳生产工艺。方法:采用浸泡法和煎煮法分别对不同大小的半夏药材进行炮制加工,并对制得的清半夏饮片的外观性状、水分、总灰分、白矾限量、浸出物、出膏率和总酸含量进行比较;以浸出物、出膏率及总酸含量为评价指标,采用正交试验设计优选清半夏的最佳煎煮工艺。结果:煎煮工艺在制备不同规格清半夏饮片外观性状、水分、总灰分、浸出物、提率、白矾限量及总酸含量均优于浸泡法,且在生产效率和时长上远优于浸泡法。正交试验得到清半夏饮片的最佳煎煮工艺为浸泡24 h,煎煮8 h,70℃干燥5 h,3次平行试验证实该工艺稳定可行。结论:煎煮法炮制清半夏工艺简便,能够在较短时间内使半夏达到透心状态,饮片的外观性状、水分、总灰分、白矾限量、浸出物、提率及总酸含量均较佳,且生产效率高,能够较好地实现生产自动化,使工业化大生产过程中的质量进一步提高、稳定和可控。

HPLC测定蜈蚣配方颗粒中3,8-二羟基喹啉的含量

目的建立HPLC法测定蜈蚣配方颗粒中3,8-二羟基喹啉的含量。方法采用Kromasil 100-5 C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以10 mmol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇(68∶32)为流动相,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,检测波长为252 nm。结果HPLC色谱图中阴性对照无干扰;3,8-二羟基喹啉在0.01163~1.395 mg/ml(r=0.9997)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为99.4%(RSD=2.7%)。结论该方法准确、稳定、可行,本文建立的方法经方法学验证可用于评价蜈蚣配方颗粒的质量。

不同蒸、炖工艺的酒女贞子外观性状和主成分比较

为了研究蒸法和炖法对酒女贞子的外观性状及主成分影响的变化规律,探究蒸、炖工艺对酒女贞子的质量影响。按照2020年版《中华人民共和国药典》方法制备蒸、炖酒女贞子样品,结合中式传统色片比较蒸、炖工艺对酒女贞子外观性状的影响,采用高效液相色谱(HPLC)法及药典浸出物测定法测定蒸、炖酒女贞子的主成分及浸出物,比较蒸、炖工艺对酒女贞子的浸出物、特女贞苷及红景天苷含量的影响。结果表明,蒸法和炖法对酒女贞子的外观性状有较大影响,相同的炮制时间炖法酒女贞子颜色为黑色,蒸法颜色为褐色,分别在蒸制10 h、炖制12 h后的饮片性状才能符合2020年版《中华人民共和国药典》标准;蒸法和炖法对酒女贞子浸出物无明显差异;在蒸、炖过程中特女贞苷含量呈降低趋势,在相同时间内蒸法的降低速度快于炖法;红景天苷含量呈上升趋势,相同时间内蒸法的升高速度快于炖法。由此可知,蒸法和炖法对酒女贞子外观性状、内在成分的变化规律影响较大,2种方法的炮制原理虽然相同,但主成分变化率差异较大,结合酒女贞子外观性状及内在成分含量变化,酒女贞子采用蒸法需蒸制10 h以上,采用炖法需炖制12 h以上。

响应曲面法优化醋三棱最佳炮制工艺

目的优选醋三棱最佳炮制工艺。方法利用UPLC超高效液相色谱法定量分析醋三棱中4-香豆酸含量,以醋三棱醇溶性浸出物和4-香豆酸含量综合评分为评价指标,采用响应曲面法考察醋三棱炮制过程中炒制温度、炒制时间及闷润时间三种因素及其交互作用对炮制工艺的影响,寻求最佳炮制工艺。结果醋三棱最佳炮制工艺为:炒制温度151.3℃,炒制时间15.6min,闷润时间41.5min。结论采用响应面法建立的模型预测性良好,优选出的炮制工艺稳定可行,可为醋三棱大生产提供依据。

优质黄芪的外观性状与内在质量特征分析

通过外观性状比对和药效成分含量测定,探究优质黄芪的整体质量特征。采用2020年版《中华人民共和国药典》黄芪项下的含量测定方法分别测定黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量,结合外观性状、规格等级综合分析评价黄芪质量。结果表明,商品规格等级越高,黄芪甲苷含量越低,黄芪皮部黄芪甲苷含量是木质部的7.6~13.8倍;黄芪枯朽空心部位黄芪甲苷含量较低;毛蕊异黄酮葡萄糖苷在黄芪中分布较均匀,不随等级和规格变化而变化。由此可知,黄芪商品等级的优质与药效指标成分优质不统一,单以黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄苷2个指标成分代表黄芪质量存在一定局限性,黄芪质量应综合考虑栽植方式、生长年限、产地加工和规格等级;直播多年生黄芪在外观性状上更符合优质黄芪特征。

正交试验结合多指标权重分析法优选金银花喷雾干燥工艺

目的:优选金银花配方颗粒喷雾干燥工艺。方法:以流膏密度、进风温度、出风温度3个因素设计正交试验方案,通过对干燥收率、指标成分转移率、特征图谱相似度、水分、溶化性多指标权重综合分析评分,选择最优工艺。结果:根据综合评分结果,最终优选工艺参数:流膏密度1.06 g/mL(60℃),喷雾干燥进口温度200℃±5℃,出口温度105℃±5℃。结论:本研究可为金银花配方颗粒的喷雾干燥工艺提供一定的参考。

附子加工炮制技术及质量评价沿革与研究进展

本文通过对附子炮制技术历史沿革和现代研究的总结,梳理附子炮制技术的变化。以附子炮制品黑顺片、蒸附片为例,总结附子炮制技术优化研究,以《中国药典》2020年版规定的附子炮制品为例进行质量评价分析,以期为附子的加工炮制和质量控制提供参考依据。

五倍子配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的:为保障临床用药的安全性和有效性,建立五倍子药材及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法。方法:根据五倍子细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列设计引物,筛选出五倍子的稳定引物区间,并在区间内筛选获得五倍子的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,根据SNP位点设计五倍子特异性鉴别引物WBZ-F、WBZ-R,分别收集五倍子及其混伪品,建立五倍子配方颗粒特异性PCR鉴别方法并优化PCR体系,对该方法进行耐受性和适用性考察。结果:退火温度为53℃,循环36次,五倍子及其配方颗粒经PCR及凝胶电泳后,可在约138 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,伪品倍蛋蚜虫虫瘿无条带。结论:建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别五倍子药材、标准汤剂冻干粉、配方颗粒中的五倍子蚜虫源性成分,也可为其他中药配方颗粒的质量标准研究提供参考。

HS⁃SPME⁃GC⁃MS结合主观嗅觉评价研究不同批次地龙腥臭气特征性物质基础

目的采用志愿者感官评价结合挥发性成分分析,研究地龙腥臭气共有性与特征性物质基础。方法收集不同产地的多批地龙药材,采用HS-SPME-GC-MS对地龙挥发性成分进行分析与鉴定,结合ROAV分析地龙腥臭气关键物质。将腥臭气成分相对质量分数与感官评价进行Pearson相关性分析,明确地龙腥臭气差异的特征性物质。结果地龙共有腥臭气关键物质为间甲基苯酚、2-甲氧基-3-异丁基吡嗪、二甲基三硫、正己醛、4-甲基苯酚、2-甲基异冰片、愈创木酚、仲辛酮、庚酸、2-茨醇、反式-2-壬醛。相关性分析结果显示地龙中鱼腥味、烟熏味、发霉味、泥土味的特征性物质基础为二甲基三硫、间甲基苯酚、4-甲基苯酚、2-甲氧基-3-异丁基吡嗪。结论该研究阐明了多批次地龙药材腥臭气共性物质基础及腥臭气差异的特征物质,揭示了腥臭气差异可能与不同品种来源、饲养环境与加工方式有关,为地龙的去腥矫臭研究提供了基础数据支撑。

基于特征蛋白的僵蚕配方颗粒鉴定方法

目的:为保障临床用药的安全性和有效性,建立僵蚕配方颗粒的鉴定方法。方法:采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),分离不同加工方式的僵蚕样品蛋白,对提取方法、缓冲液pH、料液比、反应温度、反应时间、专属性、适应性进行考察。同时利用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)分析寻找稳定且丰度较高的蛋白作为鉴定僵蚕配方颗粒的蛋白标志物。结果:SDS-PAGE最佳提取条件为取僵蚕样品适量,按料液比1∶10加入0.1 mol·L^(–1) NaAc缓冲液(pH=5),30℃振荡提取1.5 h。可分离出特征性条带约40~50 kDa,该条带主要为僵蚕基原动物家蚕Bombyx mori Linnaeus的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白、抗糜蛋白和抗胰蛋白等,可作为僵蚕鉴别的蛋白标记。根据SDS-PAGE分析条带的相对分子质量大小、蛋白在僵蚕药材和提取物中的特异性和稳定性,确定Serpin类丝氨酸蛋白酶抑制剂为鉴定僵蚕配方颗粒的特异性蛋白。结论:基于差异蛋白建立了可用于僵蚕配方颗粒生成过程的质量控制、僵蚕配方颗粒的SDS-PAGE蛋白鉴定的指纹图谱方法。

烫水蛭(蚂蟥)配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的:为保障临床用药的安全性和有效性,建立烫水蛭(蚂蟥)及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法。方法:根据烫水蛭(蚂蟥)细胞色素C氧化酶Ⅰ(COⅠ)基因序列设计引物,筛选出烫水蛭(蚂蟥)的稳定引物区间;在区间内筛选获得烫水蛭(蚂蟥)的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,并设计烫水蛭(蚂蟥)特异性鉴别引物TSZ-F、TSZ-R;分别收集烫水蛭(蚂蟥)及其阴性样品,建立烫水蛭(蚂蟥)配方颗粒特异性PCR鉴别方法,并对PCR体系进行优化,对该方法的耐受性和适用性进行考察。结果:当退火温度为54℃、循环数为34次,烫水蛭(蚂蟥)及其配方颗粒经PCR和凝胶电泳后,可在约133bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,伪品无条带。结论:建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别烫水蛭(蚂蟥)饮片、标准汤剂冻干粉、配方颗粒,也为可其中药配方颗粒的质量标准研究提供参考。

基于全基因组的穿心莲NRAMP基因家族鉴定与生物信息学分析

自然抗性相关巨噬细胞蛋白(Natural resistance associated macrophage protein,NRAMP)是一类广泛存在于动植物及微生物中重要的膜转运蛋白,在植物重金属离子转运和重新利用中起着重要作用。为探究穿心莲Andrographis paniculata的NRAMP基因家族生物学特性,本研究根据拟南芥NRAMP家族的蛋白序列,从穿心莲全基因组中筛选鉴定了7个NRAMP家族成员,命名为ApNRAMP1~ApNRAMP7,并分析其基因结构和编码蛋白的理化性质等相关信息。结果表明,ApNRAMPs基因编码蛋白的长度为513~553 aa,分子量在56.00~60.54 kD之间,所有成员均定位于细胞膜上。系统进化分析表明,NRAMP基因家族分为2个亚家族。基因结构分析发现,属于GroupⅡ的ApNRAMP3~ApNRAMP6含有3个内含子,而属于GroupⅠ的ApNRAMP1、ApNRAMP2、ApNRAMP7则含有12个内含子;保守基序分析发现,Motif1~8保守基序存在于所有的ApNRAMPs编码的蛋白序列。蛋白结构预测分析发现,Ap NRAMPs蛋白二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,三维结构较为相似。该研究结果为进一步解析ApNRAMPs基因参与镉胁迫响应的分子机制提供参考。