程序型细胞死亡的生物化学基础

现已发现从低等生物如线虫到哺乳动物乃至人体细胞均存在细胞凋亡。生理的或有害的介导物可诱导正常组织、肿瘤组织、胚胎组织和成熟组织等各种组织发生细胞凋亡。在细胞凋亡过程中,细胞内主要生物化学变化:胞装Ca^(2+)浓度迅速升高、激活蛋白激酶A和酪氨酸蛋白激酶、抑制蛋白激酶C、某些基因表达改变和激活依赖Ca^(2+)核酸内切酶。转谷氨酰胺酶催化多肽链间共价交联和染色质特异降解可能是程序型细胞死亡的关键步骤。

去势兔骨质疏松模型建立的初探

选用兔作模型进行探索，以期证明兔原发性骨质疏松动物模型建立的可行性。通过切除双侧卵巢的方法诱发兔骨质疏松动物模型的建立，术后5～8个月内观察其骨密度、体重、毛色及生长状况，处死后取骨作生物力学测定，病理组织学检查，烧灰测灰重及灰的钙、磷含量，观察其子宫重．结果表明：骨密度、弯曲强度、灰重及灰的钙、磷含量、子宫重均明显降低（P＜0．05），骨小梁数目减少，皮质变薄．综合以上各项指标，兔骨质疏松模型已初步建立。本研究为探明原发性骨质疏松发病机理及评价防治药物疗效的研究提供重要的基础．

缺锌抑制体外培养大鼠成骨细胞的增殖及分化

为了研究缺锌对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化的影响，从大鼠颅骨分离出成骨细胞，并于ＤＭＥＭ培养基中进行传代培养。锌特异性络合剂ＴＰＥＮ络合掉培养基中的锌建立细胞体外培养的缺锌模型。采用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法确定成骨细胞在不同时点ＤＮＡ的合成状况，同时应用流式细胞仪进行细胞周期的分析；采用组织学方法观察细胞骨架的变化、３Ｈ－脯氨酸掺入法确定胶原蛋白的合成；采用酶动力学和放免方法分别测定碱性磷酸酶活性和骨钙素含量。结果表明，缺锌组成骨细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入量在各个时点明显低于对照组，细胞被阻滞于细胞周期中Ｇ２／Ｍ期，这与细胞骨架受损密切相关。缺锌组胶原蛋白合成、骨钙素含量及碱性磷酸酶活性明显低于对照组。但缺锌补锌组的各个指标与对照组相比无统计学差异。因此，缺锌能够抑制体外培养大鼠成骨细胞的增殖和分化。

去势兔骨质疏松动物血清TRAP及BALP水平的观察

破骨细胞生成的抗滴石酸盐酸性磷酸酶（ｔａｒｔｒａｔｅ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔａｃｉｄｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＴＲＡＰ）及成骨细胞生成的骨碱性磷酸酶（ｂｏｎｅａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＢＡＬＰ）均可分泌入血。因此，血中ＴＲＡＰ及ＢＡＬＰ水平可分别反映破骨细胞及成骨细胞的功能。本文在以往工作的基础上，观察了经双侧卵巢切除法诱导五月龄新西兰纯种大白兔形成骨质疏松动物的血清ＴＲＡＰ（采用对硝基酚磷酸盐法）及ＢＡＬＰ（热失活法）水平，结果显示：术后兔血清ＴＲＡＰ及ＢＡＬＰ活性均较术前升高，ＴＲＡＰ的变化先于ＢＡＬＰ。术后１月ＴＲＡＰ活性升至最高，然后逐渐降低，至术后２．２月左右基本降至术前水平；ＢＡＬＰ活性在术后２．２月左右升至最高，并在此水平上保持约半个月，其后很快下降，于术后３．７月左右基本降至手术前水平。对照兔血清ＴＲＡＰ及ＢＡＬＰ活性的变化趋势基本一致。结果说明：手术去势后首先刺激破骨细胞的骨吸收作用，然后刺激成骨细胞的骨形成作用。这可能是女性绝经后头几年内骨质快速丢失的一个原因。有关骨质疏松动物模型血中ＴＲＡＰ及ＢＡＩ．Ｐ变化规律的研究，目前国内外尚未见报道。本文研究结果为原发性骨质疏松的病因学、

生长因子、癌基因与动脉平滑肌细胞增殖

动脉平滑肌细胞增殖及转化在动脉粥样硬化的形成过程中发挥重要作用。生长因子和癌基因是影响平滑肌细胞增殖的主要因素。本文介绍平滑肌细胞来源的生长因子和ｓｉｓ、ｆｏｓ、ｍｙｃ等癌基因表达与平滑肌细胞增殖的密切关系以及它们相互作用的分子与细胞的可能机制。

酶联免疫吸附分析法测定土壤试样中的阿特拉津

报道一种高灵敏度、高重现性的酶联免疫吸附分析法(ELLSA)对土壤试样中阿特拉津(Atrazine)的测定.测定的线性范围为 0.05～5.0μg/L,由14条标准曲线求得的最低检出限在0.018～0.24μg/L之间,线性相关系数r=0.9922.加标土样分别用含水甲醇和含水乙腈提取的效率都接近100%,提取液用重蒸水1:200稀释后可消除基质效应和溶剂效应的影响,加标平均回收率为99.6%.

人脑髓鞘碱性蛋白cDNA体外扩增、克隆和鉴定

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）从人脑ｃＤＮＡ文库中扩增出６００ｂｐ的髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）ｃＤＮＡ片段，与载体ｐＧＥＭ－３Ｚｆ（＋）平端连接．重组质粒ＤＮＡ转化宿主菌ＪＭ１０９，在含Ｘ－ｇａｌ和ＩＰＴＧ的平板上直接筛选阳性克隆．限制性内切酶分析和成套引物扩增鉴定证明，该克隆含有７个外显子的２１．５ｋＤ人脑ＭＢＰ全长编码序列．

胆囊收缩素8对大鼠大脑皮质细胞钙调素和蛋白激酶C活性的影响

为阐明中枢神经系统中胆囊收缩素 8(CCK8)受体的信号传递机制 ,以分离的大鼠大脑皮质神经细胞为材料 ,观察了CCK8对细胞内钙调素 (CaM)、3′ ,5′ 环腺苷酸 (cAMP)、蛋白激酶C(PKC)活性的影响 研究结果表明 ,CCK8可刺激大脑皮质细胞CaM、PKC活性的增加 ,并有剂量依赖关系 但CCK8在 10 -12 ～ 10 -6mol L范围内 ,细胞内cAMP含量无显著变化 利用受体亚型L 364,718和L 365,2 60的研究表明 ,两种拮抗剂均可抑制CCK8引起的CaM和PKC活性变化 ,但两者IC50 不同 对于CaM ,CCKB 受体拮抗剂L 365,2 60的IC50 比CCKA 受体拮抗剂L 364,718低 4 0倍 ;而对于PKC ,L 365,2 60的IC50 比L 364,718低 60倍 因此认为 ,CCK8主要是通过CCKB

肝脂酶及其在血浆脂蛋白代谢中的作用

肝脂酶是一种糖蛋白，由肝实质细胞合成，在内质网中糖化后转移至高尔基体，形成具有催化活性的成熟酶并转运到窦状隙内皮细胞表面发挥作用。肝素可将结合在肝窦状隙内皮细胞表面的肝脂酶释放入血，选择性测定肝素化血浆脂肪酶活性可了解体内肝脂酶的活性。基因及蛋白质结构分析均表明肝脂酶是脂肪酶家族的成员之一，能水解乳糜微粒、中间密度脂蛋白及高密度脂蛋白中的甘油三酯和磷脂，在乳糜微粒残骸的清除、低密度脂蛋白的形成及胆固醇逆向转运过程中起着十分重要的作用。肝脂酶活性的改变会引起脂蛋白代谢变化、特别是血浆高密度脂蛋白胆固醇浓度的改变；肝脂酶基因变异是血浆高密度脂蛋白胆固醇水平的重要遗传决定因素之一，与动脉粥样硬化及冠心病关系密切。

异黄酮哌嗪衍生物的合成

异黄酮类化合物广泛存在于植物中 ,具有多种生理活性 .以苯乙酸和间苯二酚为原料 ,合成了 9个异黄酮哌嗪衍生物 ,均未见文献报道 .其结构经过IR ,MS和1H NMR确证 .

血清髓鞘碱性蛋白放射免疫测定

本文报道以人脑髓鞘碱性蛋白(MBP)为抗原制备抗血清,利用国产Na^(125)I建立了人血清MBP放射免疫分析法。经方法学鉴定,该法灵敏可靠,其最小检测量为0.5ng/ml。采用该方法初步测定30例各种神经系统疾病患者血清中的MBP含量表明,血清MBP水平高低可作为中枢神经系统破坏性病损程度的可靠指标,具有重要的临床应用价值。

硝苯吡啶对马桑内酯致癫痫大鼠脑内c-fos基因表达的影响

用地高辛c-fosRNA探针作原位杂交，对马桑内酯致癫痫大鼠脑内c-fosmRNA表达及硝苯吡啶对其影响的研究发现，马桑内酯注射后，从潜伏期至癫痫大发作后2h，大鼠脑内可见明显的杂交信号。随着发作程度的加重，脑内杂交信号相应增多。硝苯吡啶能有效地抑制马桑内酯所致的c-fosmRNA表达增加。提示马桑内酯致癫痫大鼠脑内c-fosmRNA表达增加可能与神经细胞Ca2＋超载有关。

肿瘤转移抑制基因nm23-H1和nm23-H2特异性片段的体外扩增、克隆和鉴定

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ），从人基因组ＤＮＡ中扩增出ｎｍ２３－Ｈ１（１８５ｂｐ）和ｎｍ２３－Ｈ２（１４５ｂｐ）特异性ＤＮＡ片段，与载体ｐＧＥＭ－３ｚｆ（＋）平端连接，重组质粒分别转化宿主菌ＪＭ１０９，在含Ｘ－ｇａｌ和ＩＰＴＧ的平板上直接筛选阳性克隆，限制性内切酶谱分析及ＰＣＲ扩增鉴定，确定ｐＧＥＭ－Ｈ１和ｐＧＥＭ－Ｈ２重组体。为ｎｍ２３基因与肿瘤转移研究打下基础。

八肽胆囊收缩素对大鼠大脑皮质细胞钙调素活性的影响

为了探讨胆囊收缩素 (CCK)受体在中枢神经系统中的信号传递机制 ,观察了CCK8和CCKA 受体拮抗剂L 36 4,718、CCKB 受体拮抗剂L 36 5 ,2 6 0对大鼠大脑皮质钙调素 (CaM )活性的影响 .结果表明 :a CCK8对CaM活性的影响具有时间依赖性 ,15min达到最高点后逐渐下降 ;b CCK8在 10 -12 ～ 10 -7mol/L范围内可刺激CaM活性的增加 ,超过 10 -7mol/L后 ,逐渐趋于饱和 .c CCKA 受体拮抗剂L 36 4,718、CCKB 受体拮抗剂L 36 5 ,2 6 0均可抑制 10 -7mol/LCCK8引起的CaM活性的增加 ,但两者IC50 相差 40倍 ,L 36 5 ,2 6 0在较低浓度时即能明显拮抗CCK8引起的CaM活性变化 .研究结果提示CCK8可能通过CCKB 受体引起CaM活性变化 ,而CaM可能是CCKB

上皮性肿瘤标记物桥粒的提取

本文报道一种简单易行的桥粒提取方法。取新鲜牛鼻表皮棘层,以pH2.3含0.5mmol/L苯甲基磺酰氟、0.1mol/L枸椽酸-枸椽酸钠缓冲液浸泡,匀浆,经蔗糖密度梯度离心,得到纯桥粒。电镜证实桥粒结构保存完好,附在桥粒斑上的中丝部分消失。209牛鼻表皮棘层可提取桥粒约100mg。

人脑原发性肿瘤癌基因转录表达研究

作者以c-myc、L-myc、N-myc、Ha-ras、c-fos、v-erbB基因为探针,对5例正常人脑组织及29例人脑原发性肿瘤组织总RNA进行斑点杂交分析。结果表明:c-erbB和c-fos基因表达增强的百分率最高,分别为88.2％和82.4％;其次是c-myc,为46.1％;L-myc和N-myc仅在少数样品中表达增强,分别为29.3％和31.6％,而Ha-ras基因在正常人脑及脑瘤中表达无显著差异。此外,还观察到在同一脑瘤样品中有2种或2种以上癌基因表达增强现象。上述结果提示c—erbB和c—fos基因在人脑原发性肿瘤发病中起重要作用,以及在人脑瘤发生中可能涉及多个癌基因的变化。

锌激活体外培养大鼠成骨细胞肌醇磷脂信号转导系统

目的： 研究锌对体外培养大鼠成骨细胞肌醇磷脂信号转导系统的影响。方法： 从大鼠颅骨分离出成骨细胞，于 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ 培养基中进行传代培养。实验分为对照组、１０μｍｏｌ／ Ｌ、２５μｍｏｌ／ Ｌ 及５０μｍｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋ 剂量组：分别测定了 Ｚｎ２ ＋ 对成骨细胞长期或短期作用后蛋白激酶 Ｃ（ Ｐ Ｋ Ｃ） 活性及三磷酸肌醇（ Ｉ Ｐ３） 含量的变化。根据被磷酸化多肽底物的量测定 Ｐ Ｋ Ｃ 活性，按照３ Ｈｍ ｙｏ肌醇掺入及层析分离法测定 Ｉ Ｐ３ 含量。结果： （１） 三个不同剂量的 Ｚｎ２ ＋ 作用于大鼠成骨细胞３ 天后， Ｉ Ｐ３ 含量及 Ｐ Ｋ Ｃ 活性均显著高于对照组；且随着 Ｚｎ２ ＋ 剂量的增加， Ｉ Ｐ３ 含量及 Ｐ Ｋ Ｃ 活性有相应增加的趋势；（２） 在短期实验中，２５μｍｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋ 对成骨细胞的作用比较明显，仅作用１５ 分钟， Ｉ Ｐ３ 含量即明显提高，且在以后的各个作用时点均明显高于对照组，但时间效应曲线平坦；５０μｍ ｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋ 组 Ｉ Ｐ３ 含量在各个时点略低于２５μｍｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋组；１０μｍ ｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋ 组略高于对照组。２５μｍｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋ 、５０μｍ ｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋ 组 Ｐ

缺氧性肺动脉高压患者红细胞浆钙调素活性的变化

采用磷酸二酯酶法现察了12例慢性阻塞性肺病（COPD）肺动脉高压患者红细胞浆钙调素（CaM）活性的变化。结果显示缺氧性肺动脉高压患者红细胞浆CaM活性较正常人增高，并有显著性差异（P＜0．01）。红细胞浆CaM活性与红细胞浆游离Ca2＋含量呈明显正相关，r=0．84，P＜0．01。表明Ca2＋－CaM系统在COPD肺动脉高压的发生发展中起一定的作用。

肝靶向药物研究——模型化合物NGA-去甲替林的合成及其趋肝性

肝细胞膜上的肝结合蛋白(HBP)是无唾液酸糖蛋白的受体。作者合成了无唾液酸糖蛋白的类似物—半乳糖新糖白蛋白(NGA)并用其作为肝靶向药物的载体,采用琥珀酸酐法与药物去甲替林(NT)偶联得NGA-NT。以此作模型化合物,经^(99m)Tc标记后的动物放射显像及HPLC检测结果,说明NGA-NT在血中稳定,在肝脏降解释出NT,具有显著的趋肝性。

γ-氨基丁酸受体及其基因研究进展

γ-氮基丁酸(GABA)是脊椎动物脑内一种重要的神经递质.它与其特异性受体(即 GABAR)分子的相互作用,可引起该受体偶联的 Cl^-,K^+和 Ca^(2+)通道传导的改变并产生神经元抑制效应.近年 GABA_AR 基因及其表达的研究,已为不同的种属、不同脑区域和细胞类型中 GABA_AR 的亚基组成、生理功能及其对很多中枢神经系统药物反应的多样性提供了令人信服的依据,可以预见不久这方面深入的探索也必将为有关该受体的神经精神病发病的分子机理研究及其治疗性药物的设计提出新的线索.