抗人血管内皮生长因子单链抗体的构建和表达及其活性鉴定

目的 对能与人血管内皮生长因子 (VEGF)特异结合 ,并对体内有抑瘤活性的单克隆抗体 (E11)进行基因工程改造 ,构建小分子的单链抗体 (ScFv) ,为临床应用奠定基础。方法 通过逆转录及多聚酶链式反应 ,扩增并克隆E11的可变区基因片段。用一编码亲水性多肽接头的DNA片段将E11轻、重链可变区基因连接 ,构建表达载体PET 15YV ,并导入大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行表达。表达产物经变性及复性后 ,用免疫组化方法检测其活性。结果 经测序表明 ,VL基因全长 333bp ,编码111个氨基酸 ,归属小鼠轻链可变区基因第Ⅲ亚组。VH基因全长 36 9bp ,编码 12 3个氨基酸 ,归属小鼠重链可变区基因Ⅱ (A)亚组。对颊癌组织进行检测的结果表明 ,基因工程抗体ScFv与原代抗体一样 ,具有较高的组织特异性。结论 抗人血管内皮生长因子单链抗体可作为生物导向药物 。