家兔中性粒细胞防御素的纯化及其对念珠菌抗菌活性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化兔中性粒细胞防御素，兔中性粒细胞防御素ＮＰ２具有抗白念珠菌Ｍ１０１２Ｒ，ＮＩＨ Ａ－２０７，乳酒念珠菌，热带念珠菌和高里氏念珠菌等菌的活性，且抗菌活性随防御素浓度的升高而增强．

新型结核病疫苗研究进展

本文从蛋白质亚单位疫苗、DNA疫苗、重组卡介苗、新型减毒活疫苗和以非致病性分枝杆菌为载体的重组疫苗几方面概括地介绍了目前新型结核病疫苗研制的现状。

阻断类胰岛素生长因子-1-受体系统对肌腱细胞生长的影响

为了进一步探索调控肌腱细胞生长的方法，在肌腱细胞体外培养条件下，采用多种手段阻断类胰岛素生长因子１（ＩＧＦ１）受体系统的不同环节，观察其对肌腱细胞生长的负调节作用。结果发现，ＩＧＦ１受体的抗体（ＩＧＦ１Ｒα）和合成的ＩＧＦ１受体的ｍＲＮＡ的反义寡核苷酸链，对肌腱细胞的增殖有负调节作用。认为，在人工肌腱的构建或防止肌腱粘连的实践中，可以考虑使用上述两种物质。

卡介苗诱导人肺腺上皮细胞hBD-1mRNA的增强表达

使用热灭活的卡介苗刺激培养的人肺腺上皮细胞(SPC－A－1)，利用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）法和Northern杂交分析，证实了卡介苗能诱导SPC－A－1细胞β－防御素－1基因(hBD－1)的增强表达。卡介苗菌量和刺激时间与SPC－A－1细胞hBD－1基因表达量的关系曲线显示，hBD－1 mRNA 在人肺腺上皮细胞的增强表达在一定范围内表现为具刺激剂量和时间依赖关系。实验为开发增强粘膜抗菌肽基因表达的免疫增强剂以防治粘膜感染的研究打下了基础。

大鼠β-防御素rBD-2的分子克隆及其在皮肤组织的诱导表达

从大鼠皮肤提取总 RNA,以 P1 5′→ 3′TTCAGTCATGAGGATCCATTAC和 P2 5′→ 3′GGTTCTTGGTCTTTTTATCTAC引物 ,采用 RT- PCR技术扩增得到一 c DNA片段 ,经核苷酸序列测定 ,并根据其推导的氨基酸序列与人 β-防御素 - 2和大鼠 β-防御素 - 1进行同源性比较 ,结果显示 ,该 c DNA片段编码的氨基酸序列具高度同源性 (其成熟肽与 h BD- 2的同一性为 5 0 % ,相似性为 32 % ) ,均含 6个典型的半胱氨酸 ,这表明所克隆的 c DNA为大鼠 β-防御素 - 2亚类 ,因此命名为 r BD- 2。大鼠 β-防御素 - 2基因在大肠杆菌感染性损伤皮肤组织中的表达明显增强 ,与人 h BD- 2的表达相似 ,能够被诱导表达。以上结果提示 ,β-防御素 - 2可能是皮肤组织对感染性损伤的防御反应所产生的重要免疫介质。

原发性肝细胞癌不同部位肿瘤浸润性淋巴细胞得率及成活率

目的探讨原发性肝细胞癌（ｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｏｃｅｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＰＨＣＣ）肿瘤组织不同部位肿瘤浸润性淋巴细胞（ｔｕｍｏｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ＴＩＬ）的得率和成活率，以便制备ＴＩＬ用于过继免疫治疗时正确切取标本。方法本实验对１２例ＰＨＣＣ肿瘤组织不同部位ＴＩＬ的得率和成活率进行了比较。结果肿瘤周围组织和肿瘤边缘组织ＴＩＬ得率和成活率最高，肿瘤实质组织次之，肿瘤中心坏死组织最低，正常肝脏组织、腹水、胆管癌栓内几乎无ＴＩＬ。结论制备ＰＨＣＣ组织ＴＩＬ时，切取肿瘤周围组织和肿瘤边缘组织效果较好。

脐血输注对儿童急淋白血病患者白细胞、IL-2、SIL-2R和IL-6的作用

脐血输注对儿童急淋白血病患者白细胞、ＩＬ－２、ＳＩＬ－２Ｒ和ＩＬ－６的作用＊汪成孝１符仁义２王霞１王晓阳２贾苍松２章崇杰１赵宗蓉１张平１魏大鹏１＊四川省应用基础研究基金资助项目（９７－９－１５）；１（６１００４１）华西医科大学基础医学院免疫学研究室；...

肿瘤浸润淋巴细胞及重组白细胞介素2治疗原发性肝细胞癌

目的探讨联合应用肿瘤浸润性淋巴细胞（ｔｕｍｏｒｉｎｆｉｔｒａｔｉｎｇｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ＴＩＬ）和重组白细胞介素２（ｒＩＬ２）治疗对原发性肝细胞癌（ｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｏｃｅｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＰＨＣＣ）术后患者细胞免疫功能的影响和其临床疗效。方法对１６例ＰＨＣＣ术后患者进行了ＴＩＬ和ｒＩＬ２治疗，１２例从肝动脉插管输入，４例从门静脉插管输入。结果ＴＩＬ治疗后１６例患者外周血白细胞介素２（ＩＬ２），Ｔ细胞亚群及比率均有不同程度上升；肿瘤坏死因子（ＴＮＦ），白细胞介素６（ＩＬ６）多有不同程度下降。随访６～２４个月，１４例肝癌根治性切除术患者，肿瘤无复发迹象，１例肝癌根治切除术患者ＴＮＦ上升了８ＩＵ，该患者治疗８个月后死于肝功能衰竭；１例肝癌姑息性切除，残癌无水酒精注射病人，ＴＩＬ治疗１８个月后肿瘤直径扩大２ｃｍ。结论ＴＩＬ治疗对提高ＰＨＣＣ术后患者抗肿瘤细胞免疫功能，防止肿瘤复发，抑制残瘤生长，延长患者生存期具有一定作用。

海洛因依赖者脱毒后白细胞介素-6及肿瘤坏死因子-α水平的变化

目的 观察海洛因依赖者脱毒后白细胞介素６ 和肿瘤坏死因子α的变化。方法 采用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法检测１８ 例未给予任何治疗药物且停用阿片类药物４８ ～７２ 小时、１８ 例脱毒３３ ～５８ 天、１５ 例脱毒１１７ ～１２０ 天的海洛因依赖者的白细胞介素６ 和肿瘤坏死因子α水平，并同时对稽延性戒断症状或急性戒断症状进行评定。结果 与正常对照组相比，海洛因依赖者脱毒后的白细胞介素６ 和肿瘤坏死因子α显著高于正常对照组。白细胞介素６ 和肿瘤坏死因子α随着脱毒时间的延长逐步向正常恢复。结论 白细胞介素６ 和肿瘤坏死因子α可考虑作为海洛因依赖者脱毒后机体恢复的指标。

大鼠β-防御素rBD-1cDNA克隆

为开展β－防御素基因表达调控分子机制及其转基因防治粘膜感染的研究，作者克隆了大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ ｃＤＮＡ。从大鼠肾脏组织提取ＲＮＡ，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ｃＤＮＡ，并重组到ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ 载体，经限制性内切酶谱分析和ＤＮＡ序列测定，证实所克隆的ｃＤＮＡ片段为大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ ｃＤＮＡ。

钩端螺旋体赖型017株外膜脂蛋白LipL41基因的克隆及原核表达

目的 构建钩端螺旋体外膜脂蛋白 L ip L41基因的重组原核表达质粒 ,为进一步制备以 L ip L41为目的基因的亚单位疫苗提供实验依据。方法 根据钩端螺旋体 L.kirscneri RM5 2株外膜脂蛋白 L ip L41基因序列设计引物 ,以赖型钩端螺旋体 0 17株基因组 DNA为模板 ,进行 PCR扩增并 DNA测序 ,以质粒 p GEX1λT为载体 ,插入 L ip L41基因片段构建重组原核表达质粒 ,并检测 L ip L41的表达。结果 测序结果示所得片段为 L ip L41的编码序列 ,酶切及 PCR分析证实重组质粒构建成功 ,SDS- PAGE和 Western blotting分析重组质粒可高效表达蛋白质 L ip L41。结论 L ip L41基因的重组原核表达质粒构建成功 。

炎症信号受体Toll基因在人肺腺上皮细胞和血管内皮细胞的表达

目的 研究炎症信号受体 Toll m RNA在人单核吞噬细胞系 (THP- 1)、脐静脉血管内皮细胞(UVECs)和肺腺上皮细胞系 (SPC- A- 1)的表达情况。方法 分别设计人 TL R2 和 TL R4两对特异引物 ,从 THP- 1、UVECs和 SPC- A- 1提取总 RNA,采用一步法 RT- PCR和地高辛标记的 Northern杂交技术检测 TL R2 和 TL R4在 3种细胞的表达。结果 RT- PCR和 Northern杂交显示 ,3种细胞均表达 TL R4受体 ,但仅 THP- 1和人 U VECs表达 TL R2 受体。结论 本实验结果表明除单核吞噬细胞外 ,大血管内皮细胞和肺腺上皮细胞亦表达 Toll受体基因 ,提示在炎症反应中 Toll信号受体可能介导这些细胞效应分子基因转录激活的信号传导。

莱姆病螺旋体83kd抗原蛋白基因特异性区段真核及原核表达型载体的构建

从莱姆病螺旋体染色体编码８３ｋｄ抗原蛋白（Ｐ８３）基因序列中选择编码近Ｃ端１５９个氨基酸的基因序列作为扩增的靶序列，自行设计并合成一对寡核苷酸引物，以莱姆病螺旋体Ｂ３１株基因组ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增得到约４７７ｂｐ的扩增片段，再把该片段与质粒载体ｐＢＫ－ＣＭＶ进行重组，经鉴定得到重组质粒ｐＢＸ１。重组质粒ｐＢＸ１可同时在真核和原核细胞中表达，其表达产物可用来制备莱姆病血清学诊断用的标准抗原；该重组质粒也可用来制备用于对莱姆病螺旋体进行分类鉴定的核酸探针。

RT-PCR法检测HNP_1基因在气管上皮细胞转染后的表达

采用脂质体转染法将人中性粒细胞防御素（ Ｈ Ｎ Ｐ１ ）的 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 重组真核表达质粒ｐ Ｂａｂｅ Ｎｅｏ Ｈ Ｎ Ｐ１导入无血清培养的人和兔的气管粘膜上皮细胞，利用逆转录聚合酶链反应（ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ）法，在核酸水平检测 Ｈ Ｎ Ｐ１ 在气管上皮细胞的表达。结果：在人和兔的转染上皮细胞中均可检测到 Ｈ Ｎ Ｐ１ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的表达，而在未转染的上皮细胞中 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ检测结果呈阴性。这一结果与作者先前用免疫组化法在蛋白质水平上检测的结果一致，并证明ｐ Ｂａｂｅ Ｎｅｏ Ｈ Ｎ Ｐ１ 转染至气管粘膜上皮细胞后能得到有效表达。

诱导人肺腺上皮细胞hBD-1基因表达的BCG胞壁蛋白

目的：分离和鉴定增强人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)抗菌活性核β-防御素-1(hBD-1)基因表达的菌种及其有效成份，为开发增强粘膜抗菌肽基因表达的免疫增强剂以防治粘膜感染的研究打下基础。方法：采用超声波破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、Sephadex G-150柱层析等方法分离卡介苗胞壁蛋白质组份；采用琼脂糖弥散杀菌法检测SPC-A-1细胞培养上清的抗菌活性；

人中性粒细胞防御素对念珠菌的抗菌活性研究

目的 探讨防御素在机体抗念珠菌中的作用及其抗菌机制。方法 用 5％乙酸提取人中性粒细胞中的酸溶性成分，采用凝胶过滤层析获得人中性粒细胞防御素（ human neutrophil peptide， HNP），检测 HNP对白念珠菌 M1012R、白念珠菌 NIH A－ 207、乳酒念珠菌、热带念珠菌、季也蒙念珠菌等 5株念珠菌的抗菌活性。同时用电镜观察防御素作用后念珠菌的超微结构变化。结果 采用 Sephadex G100及 Biogel P10凝胶过滤层析可获得纯化的 HNP。 HNP对白念珠菌 M1012R、 NIH A－ 207、乳酒念珠菌、热带念珠菌、季也蒙念珠菌等菌有抗菌活性，其活性随防御素浓度升高而增强。电镜观察见防御素作用后的念珠菌表面有明显的凹陷和穿孔，胞膜与胞壁分离及空泡形成等改变。结论 HNP对念珠菌有较强的抗菌活性。

结合偶联半乳糖抗CD_3单抗肿瘤浸润性淋巴细胞趋肝性研究

目的探讨结合偶联半乳糖(Gal)抗CD_3单抗(Anti-CD_3-McAb)肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)趋肝性。方法将大鼠抗小鼠CD_3单抗和半乳糖(Gal)偶联在一起,与~3H-TdR标记TIL结合后,从尾静脉注入小鼠体内,在注射后不同时间抠眼取血0.5ml,处死切除肝、脾、肺分别称重后进行放射性强度测定。结果注射Gal-anti-CD_3-McAb-TIL小鼠肝脏比注射单纯TIL的小鼠肝脏具有较高的放射性(P<0.001),且该放射性持续较长一段时间,而脾、肺、血组织内放射性强度无明显差异(P>0.5,P>0.5,P>0.2)。结论 Gal-anti-CD_3-McAb-TIL较单纯TIL具有更好的趋肝性。