以病例为基础的讨论──生理学与临床结合的契机

在基础阶段的学习中引入以病例为基础的讨论为学生将生理学知识与临床问题结合提供了一相楔机，为此我们在五年制临床医学的生理学教学中，精心设计了４个能突出生理学知识重点的病例，即：凝血功能障碍所致出血性疾病，高血压病，呼吸衰竭，慢性肾功能衰竭，同时，针对每一个病例设计了相应的讨论题，目的是引导学生通过查阅资料及小组讨论理解有关手理学知识，并提高学生理学的兴趣，学生的反馈信息表明以病例为基础的讨论不失为生理学教学改革的一项成功举措。

炎性细胞因子及脂多糖诱导产生的一氧化氮对人血管内皮细胞的损伤作用

目的 :探讨炎症过程诱生的一氧化氮 (NO)对内皮细胞的损伤及其作用机制。方法 :黄递酶法及Griess法检测可诱导性NO合酶 (iNOS)活性、NO-2 /NO-3 水平 ,RT -PCR技术分析iNOSmRNA的表达 ;同时观察NO产生后对内皮细胞的损伤作用。结果 :IL - 1β 2× 10 5U/L、TNF -α 5× 10 5U/L、γ -INF 2× 10 5U/L联用LPS(10mg/L)可诱导出高浓度NOS合成及NO产生 ,比单用这些细胞因子或LPS诱导的量高两倍多 ,iNOSmRNA的表达水平也显著增加 ;同时MDA及LDH释放率明显增加 ,细胞存活率下降 ,并伴随细胞受损的形态学改变。而单用上述细胞因子或LPS ,以及降低剂量或缩短处理时间 ,其诱生的NOS及NO与正常对照相比P >0 0 5 ;但MDA及LDH释放率仍增加明显。使用 2倍剂量的这些炎性细胞因子或延长处理时间到 48h ,与标准剂量及 2 4h组相比NOS和NO的增加虽不显著 ,但细胞生长受限更明显。NOS抑制剂能阻止NO的产生及其对细胞的损伤作用。结论 :炎性细胞因子及脂多糖可激活iNOS大量表达诱生高浓度的NO 。

同型半胱氨酸对内皮细胞及脂质过氧化的影响

为观察同型半胱氨酸对内皮细胞、内皮细胞一氧化氮系统及脂质过氧化的影响，在培养兔主动脉内皮细胞中加入兔天然低密度脂蛋白后分为七组；对照组不加任何药物；叶酸组；四氢喋呤（ＢＨ４）组，一氧化氮供体药ＳＩＮ－１组；同型半胱氨酸组；同型半胱氨酸加叶酸组和同型半胱氨酸加四氢喋呤组。共孵育２４ｈ后结果发现，同型半胱氨酸组内皮细胞逐渐漂浮起来，部分内皮细胞发生死亡，显示脂质过氧化程度的丙二醛含量明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），一氧化氮合酶的活性及一氧化氮生成量明显低于叶酸组和四氢喋呤组（Ｐ＜０．０５），提示同型半胱氨酸对内皮细胞具有强大的毒性作用及明显的促脂质过氧化作用，同型半胱氨酸的上述作用可能部分与其对一氧化氮系统的损伤有关。同型半胱氨酸加叶酸组和同型半胱氨酸加四氢喋呤组各项检测指标相似，较同型半胱氨酸组有所好转，提示叶酸和四氢喋呤可在一定程度上逆转同型半胱氨酸对内皮细胞的上述损伤作用。

输精管注射高分子聚合物HFMC的非堵塞性化学避孕及其生育可复性的动物实验研究

本实验利用兔、SD大鼠及昆明种小鼠进行输精管注入高分子聚合物HFMC,起到有效杀精子避孕作用。通过精子质量检测,判断避孕有效性及避孕时程,并证实与注入的浓度和剂量相关。应用雄雌配对实验,观察到自然复孕,而且复孕率与注入浓度成负相关。在兔50％实验组,观察到复孕过程的20个月中有三个时相,其复孕率为40％,人工复孕与对照组无显著差异(P>0.05)。

中国强毒力赖型钩端螺旋体外膜蛋白基因的克隆表达及对大肠杆菌活力的影响

目的 :构建表达致病性赖型 0 17株钩端螺旋体OmpL1外膜蛋白的真核 -原核穿梭表达载体 ,并在原核细胞中表达出目的蛋白。方法 :用PCR方法从 0 17株钩体基因组中钓出OmpL1蛋白基因 ,酶切纯化后与质粒pBK -CMV连接 ,通过电泳、限制性内切酶分析及PCR鉴定筛选出正确重组质粒。重组质粒在大肠杆菌中诱导表达后提取总蛋白以SDS -PAGE检测表达情况 ,同时监测目的蛋白表达前后各时段宿主菌OD6 0 0值的变化。结果 :筛选出 5株带重组质粒菌 ,其中有 4株能在大肠杆菌中表达 37kD的特异蛋白 ,而且随着该外源蛋白的表达 ,宿主菌生长各时段的OD6 0 0值下降。结论 :成功地构建了钩体OmpL1蛋白的穿梭表达质粒 ,并在大肠杆菌中表达出OmpL1融合蛋白 ,该异源蛋白的表达导致宿主菌的活力降低。本工作为OmpL1蛋白用于钩体病诊断。

正常老中青少年1468例和慢阻肺患者168例用力呼气弦线时间常数的初步探讨

本文在正常老青少年1486例和慢阻肺(COPD)患者168例的最大呼气流量—容积(MFFV)曲线上,用Knudson的弦线法于高中低肺容积处的弦线时间常数,τch75、τch50、τch25和本文采用的容积校正的比时间常数(Sτ) 1/75、1/50、1/25进行了系统探讨。在IBM-PC/XT计算机上建立青少年组和成年组各指标的回归方程。应用COPD患者各指标实测值占预计值的百分数和t检验,以估计疾病改变的程度。结果表明,各τch均随年龄而延长;青少年τch随肺内容积的衰减而缩短,老年人则随其衰减而延长。1/在青少年中随年龄而缩短,成年以后则随年龄而延长,1/在老中青少年中均随肺内容积的衰减而延长。COPD患者τch和1/的改变为:肺心病>300％,肺气为170～280％,慢支为110～180％。较MEFV曲线更为敏感,具有临床应用前景。本文讨论了上述指标的生理及临床意义。

中性粒细胞防御素对牙周可疑致病菌抗菌活性的观察

采用琼脂糖弥散抗菌实验检测人中性粒细胞防御素（ＨＮＰ）和两种兔中性粒细胞防御素（ＮＰ１，ＮＰ２）对放线共生放线杆菌（ＦＤＣＹ４）、牙龈卟啉菌（４７Ａ－１）、中间普氏菌（ＡＴＣＣ２５２６１）、产黑色素普氏菌（ＡＴＣＣ１３０４０）、生痰二氧化碳噬纤维菌（ＡＴＣＣ３３６１２）的抗菌活性。结果表明，中性粒细胞防御素对上述牙周可疑致病菌均有较强的抗菌活性，且随着浓度增高，抗菌活性增大。除产黑色素普氏菌和中间普氏菌外，兔中性粒细胞防御素的抗菌活性均超过人中性粒细胞防御素，而且ＮＰ２均大于ＮＰ１的活性。

建立大白鼠视皮层脑片膜片钳全细胞记录技术

目的 建立大白鼠视皮层脑片膜片钳全细胞记录技术。方法 利用盲法获得膜片记录 ,即根据电极进入溶液中到获得全细胞膜片的过程中 ,测试方波脉冲的变化来寻找细胞。结果 能成功地进行视皮层全细胞记录。结论 本法操作简便 ,所需仪器简单 ,易于推广应用。

谷氨酸、γ-氨基丁酸对大鼠前包氏复合体神经元自发放电的影响

用多管微电极技术，在麻醉、自主呼吸的成年大鼠观察了微电泳谷氨酸（L-GLu）、γ-氨基丁酸（GABA）及其拮抗剂DL－2－氨基－5－磷酸戊酸（AP-5）、荷包牡丹碱（BIC）对前包氏复合体（pre－Botzingercomplex，preBotc）区神经元自发放电的影响，并测试了AP-5、BIC分别对L－Glu、GABA效应的阻断作用。结果显示，大多数被测试神经元（37／41个）被L－Glu兴奋，少数（4／41个）无反应：GABA使大多数被测试神经元（34／40个）抑制，对少数神经元（6／40个）无影响。AP-5对神经元放电无影响（19／34个）或产生抑制作用（15／34个）。BIC使神经元兴奋（10／30个）或无反应（20／30个）。L－Glu的兴奋作用和GABA的抑制作用呈量效依赖关系。9／21个受试神经元对L-Glu的兴奋反应被AP-5部分或完全阻断，大多数受试神经元（20／25个）对GABA的抑制反应被BIC部分或完全阻断。上述结果提示，成年大鼠pre－Botc区可能存在着内源性的Glu和GABA，它们分别通过NMDA受体和GABAA受体参与该区的神经信息传递过程。

人中性粒细胞防御素的分离纯化

从人中性粒细胞分离胞浆颗粒,以5%乙酸从中提取酸溶性组分,经SephadexG100及Bio-gel P10凝胶过滤层析后获得纯化的人中性粒细胞防御素(HNP)。纯化的HNP经AU-PAGE分析不含杂质蛋白区带,SDS—PAGE分析为一条分子量约3 000的带。氨基酸组成分析表明,在被检测的17种氨基酸中,HNP含12种,各种氨基酸残基的推算数与文献报道氨基酸序列分析结果一致。HNP在体外实验中表现较强杀白色念珠菌活性,在浓度为100μg/ml时,白色珠菌死亡率近90%。

硝苯吡啶对马桑内酯致癫痫大鼠脑内c-fos基因表达的影响

用地高辛c-fosRNA探针作原位杂交，对马桑内酯致癫痫大鼠脑内c-fosmRNA表达及硝苯吡啶对其影响的研究发现，马桑内酯注射后，从潜伏期至癫痫大发作后2h，大鼠脑内可见明显的杂交信号。随着发作程度的加重，脑内杂交信号相应增多。硝苯吡啶能有效地抑制马桑内酯所致的c-fosmRNA表达增加。提示马桑内酯致癫痫大鼠脑内c-fosmRNA表达增加可能与神经细胞Ca2＋超载有关。

大鼠前包氏复合体区神经元的放电类型和对甘氨酸的反应

采用多管微电极细胞外记录和微电泳技术，分析了成年大鼠前包氏复合体（ｐｒｅ－Ｂｏｔｃ）区自发放电神经元的放电类型及它们对微电泳甘氨酸（Ｇｌｙ）及其拮抗剂士的宁（Ｓｔｒｙ）的反应。在４３只麻醉、自主呼吸大鼠的ｐｒｅ－Ｂｏｔｃ区共记录到１０４个自发放电神经元。其中呼吸相关神经元（ＲＲＮｓ）５４个，非呼吸相关神经元（ＮＲ－ＲＮｓ）５０个；ＲＲＮｓ包括吸气神经元（ＩＮｓ，ｎ＝２５）、呼气神经元（ＥＮｓ，ｎ＝１７）和跨时相神经元（ＰＳＮｓ，ｎ＝１２）三类。ＩＮｓ包括早吸气型（ｅａｒｌｙ－Ｉ，１１／２５个）神经元，全时程吸气型（Ｉ－ａｌ，１０／２５个）神经元和晚吸气型（ｌａｔｅ－Ｉ，４／２５个）神经元；ＥＮｓ包括全时程呼气型（Ｅ－ａｌ，７／１７个）神经元，早呼气型（ｅａｒｌｙ－Ｅ，６／１７个）神经元，晚呼气型（ｌａｔｅ－Ｅ，４／１７个）神经元；ＰＳＮｓ包括前吸气（ｐｒｅ－Ⅰ，８／１２个）神经元和吸气－呼气跨时相（Ｉ－Ｅ，４／１２个）神经元。微电泳Ｇｌｙ，使受试的２７个神经元中的２２个抑制，少数无反应（ｎ＝３）或兴奋（ｎ＝２），反应呈量效依赖关系。Ｓｔｒｙ使受试的２２个神经元中的８个兴奋，其余１４个无反应，兴奋反应呈量效依?

成都地区557例青少年部分呼气流量一容积曲线探讨

利用部分呼气流量—容积(PEFV)曲线对557例6～19岁青少年进行肺功能测试,其中200例加测最大呼气流量—容积(MEFV)曲线。同时建立青少年V_(FRC)与年龄、身高、体重的回归方程。测定结果:青少年肺功能各指标随年龄增长而增加,同年龄组内14岁前男女无差异,14～16岁呈双交叉,16岁后男性各指标明显高于女性,两者间有差异。作者认为V_(FRC)由于是在平静呼吸基础上测试,消除了容积史的影啊,可能在反映肺功能改变的敏感性上有一定优越性。

高分子聚合物HFMC注入兔输精管后抗精子自身免疫的研究

对有生育能力的雄性兔,分别用10%和20%HFMC加生理盐水(实验1组和2组)及二甲基亚砜加生理盐水(实验对照组)作输精管内注射,于注射后2～8月每月取血,用ELISA检测血清中抗体。结果实验组和实验对照组在第2个月均检出低水平的抗精子抗体,第3～8个月均未检出其抗体。组织学观察,睾丸和附睾均未见明显病理改变。提示兔输精管内注射10％和20％HFMC节育,不引起明显持久的免疫反应,作为节育的方法是安全、可行的。

口腔链球菌摄取生物素与口内白色念珠菌生长的关系

为了探讨口腔细菌生态平衡机制，本文体外检测了４株口腔链球菌（Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ，Ｓ．ｓａｎｇｕｉｓ，Ｓ．ｍｕｔａｎｓ和Ｓ．ｍｉｔｉｏｒ）和白色念珠菌生长对生物素的依赖性。结果显示白色念珠菌和口腔链球菌的生长绝对依赖生物素，前者最大半数生长需要生物素约１０ｐＭｏｌ／Ｌ，其最大生长率所需生物素约为１００ｐＭｏｌ／Ｌ；而后者最大半数生长需生物素为５２５ｐＭｏｌ／Ｌ。正常人血清和唾液中生物素的含量约为２１２２９４ｐＭｏｌ／Ｌ。生物素饥饿状态下的白色念珠菌和口腔链球菌，以及唾液离心沉淀物（绝大多数为细菌）摄取生物素具温度依赖性，而代谢抑制剂（叠氮化合物、氰化物和醋酸碘）和某些抗生素（杆菌肽、短杆菌肽、万古霉素和二性霉素）具选择性抑制效应，提示生物素的摄取和跨膜转运是一依赖能量的主动过程。用唾液沉淀物和口腔链球菌吸收培养基中的生物素或与白色念珠菌共同培养，显著抑制白色念珠菌的生长。本文首次提供实验证据显示口腔优势菌可能通过竞争生物素等营养成份，抑制白色念珠菌生长，以维持口腔微生物之生态平衡。

兔中性粒细胞防御素对HL-60细胞毒性及对病毒的直接灭活作用

本研究从新西兰家兔腹腔渗出中性粒细胞溶酶体内提取酸溶性组分,经制备性AU-PAGE获得纯化的防御素(NP_1和NP_2),SDS-PAGE测定分子量为3kd左右。以HL-60细胞作靶细胞,当NP_1或NP_2在100μg/ml浓度时,可杀死60%以上的HL-60细胞。NP_1(26μg/ml)还可直接灭活单纯疱疹病毒Ⅰ型和乙型流感病毒,分别使病毒感染滴度降度98.2%和90%。本研究结果提示,中性粒细胞可合成和分泌肿瘤细胞毒性和抗病毒活性肽。

中性粒细胞防御素体外杀钩端螺旋体活性观察

从人中性粒细胞胞浆颗粒提取防御素(HNP)粗品,经Sephadex G-100和BlogelP10柱层析得到纯化的HNP。从家兔中性粒细胞胞浆颗粒提取防御素粗品,经制备性AU-PAGE获得NP_1。HNP和NP_1都能杀灭黄疸出血群赖型017株钩体,在NP_1浓度为1μg/ml时,017株钩体死亡率达99％以上,HNP浓度为50μg/ml时,017株钩体死亡率达90％以上,HNP杀钩体作用还需有葡萄糖存在的条件。本文结果提示吞噬细胞不依赖氧杀菌作用参与了机体抗钩体免疫。

家兔延髓吻端腹外侧区在“人中”穴加压效应中的作用

延髓吻端腹外测区(Rostral ventrolateral medulla,RVL)微量注射红藻氨酸(Kainic acid,KA)前,分别用弱、强电刺激“人中”穴时可引起动脉血压(BP)显著升高,心率(HR)明显增快。一侧或双侧RVL注射KA后,再用弱、强电刺激“人中”穴时,BP、HR的反应基本消失。结果表明,RVL在“人中”穴加压效应中起关键性作用。

大鼠延髓旁巨细胞外侧核微量注射利多卡因对呼吸和血压的影响

用在体的方法研究了大鼠旁巨细胞外侧核在呼吸和血压调控中的作用，在旁巨细胞外侧核内微量注射２００ｎｌ的利多卡因可使７／９大鼠的呼气时程（Ｔｅ）缩短（Ｐ＜０．０５），呼吸频率增加（Ｐ＜０．０５），隔肌肌电积分幅度（Ａ）降低（Ｐ＜０．０５）；７／９大鼠的动脉血压下降（Ｐ＜０．０５）。结果表明，大鼠的旁巨细胞外侧核参与呼吸活动和血压活动的调控。

损毁猫延髓吻侧腹外侧区对电刺激下丘脑室旁核增压反应效应的研究

作者用经氯醛糖、乌拉坦麻醉,肌肉麻痹,人工呼吸的成年家猫20只,电刺激探查其延髓吻侧腹外侧区(RVL),观察到闩前3～5mm,中线旁开3～4mm,离腹面0～1mm的局限区域,对电刺激最为敏感,刺激此区引起最大增压反应。电解或微量注射红藻氨酸损毁双侧RVL上述敏感区,除引起血压大幅度降低外,还几乎去除了电刺激下丘脑室旁核(PA)引起的增压反应。此结果提示RVL可介导PA增压反应。