16S rRNA基因多变区序列对不同种属钩端螺旋体的PCR扩增

从问号状钩体16S rRNA基因多变区V2和V4序列中设计了一对引物:PⅠ 5’GGGAAC CTA ATA CTG GAT GG;PⅡ 5’ACA TAG TTT CAA GTG GAG GC,并对不同种属钩体DNA进行了扩增。在55℃退火条件下,问号状钩体各群型具有相同大小的扩增产物(473bp)和KpnⅠ酶谱,双曲钩体有约280bp的扩增带,但不被KpnⅠ酶消化,而细丝体属钩体和其它对照DNA未见扩增。以^(32)P标记的lai型Lai株(强毒)扩增产物作探针行Southern杂交发现,问号状钩体各株扩增带均可被杂交,而双曲钩体扩增物无杂交。研究表明,该对引物可用于钩体的分类和检测。

PCR扩增52株钩体23S rRNA基因及其临床应用55例分析

采用犬型钩端螺旋体(以下简称钩体)Moulton株23SrRNA基因273-293位点和376—396位点的引物A和B,即5＇GATCTAATTCGCTGTAGCAGG^(3＇)及^(5＇)ACTTTCACCCTCTAT-GGTCGG^(3＇),对52株钩体进行PCR扩增。结果表明49型50株问号状钩体均发生特异性扩增,而双曲钩体patoc型PatocⅠ株及细螺旋illini型3055株钩体不出现特异性扩增。用引物A和B对1992年从井研、西昌两地收集的早期钩体病患者的早晚期血清进行PCR扩增,结果第一次血清55份(发病后1～5天),PCR阳性51例(92.72％),第二次血清55份(发病后6～60天),PCR阳性41例(74.55％)。由此表明PCR不仅可广泛用于钩体病的临床早期诊断,而且可用于检测不同病程患者血中钩体DNA。

兔膀胱粘膜抗菌蛋白研究

作者以1％乙酸冲洗雌性新西兰白兔膀胱粘膜获得其酸溶性提取物。经AU-PAGE分析表明,膀胱粘膜酸溶性提取物有十余条主蛋白带,不含已知的内源性抗菌多肽溶菌酶和防御素。琼脂糖弥散法杀菌试验显示,膀胱粘膜酸溶性提取物对致病性大肠杆菌ML-35P耐药株具杀菌活性。电泳凝胶琼脂糖弥散法杀菌试验进一步分析表明,杀菌活性与两条主蛋白带相关,命名为Rab BP-1和Rab BP-2。它们分别占膀胱粘膜提取物蛋白质总量的2.5％和1.2％。本实验的研究结果首次提示,兔膀胱粘膜存在抗菌性蛋白,这可能是膀胱粘膜杀菌这一重要防御机理的分子基础。