有和无甘油的聚丙烯酰胺胶在检测突变时的差别

有文献报道在非变性的聚丙烯酰胺中加入甘油可提高SSCP检测的灵敏度。我们的实验结果建议研究者在进行SSCP筛查未知突变时最好采用不加甘油的非变性的聚丙烯酰胺胶 ,这既省力省钱 ,又灵敏。在判读SSCP胶时 ,千万不要看到在双链带位置有一条比正常迁移率慢的带就判定为插入突变。此时要判定突变的性质 ,最好测序。

有和无甘油的聚丙烯酰胺胶在检测突变时的差别

有文献报道 ,在非变性的聚丙烯酰胺中加入甘油可提高SSCP检测的灵敏度 .作者采用PCR SSCP、加 5%的甘油或未加甘油的 10 %非变性聚丙烯酰胺胶和DNA测序技术 ,来检测常染色体显性多囊肾病致病基因PKD1的突变 .结果发现 ,同一个病人在未加甘油的10 %非变性聚丙烯酰胺胶中 ,有 4条单链带 ,而在加 5%的甘油的 10 %非变性聚丙烯酰胺胶中仅有两条单链带 ;两种胶上均有迁移率较正常双链带慢一条的双链带 .测序结果显示 ,在有异常迁移率带的个体的 1条DNA分子中缺失 1个G .我们的实验提示 ,加入甘油后检测灵敏度不及不加甘油的非变性聚丙烯酰胺 ;并且证实 ,仅有一个碱基的缺失会导致在SSCP胶上双链带位置出现一条迁移率比正常双链带迁移率慢的带 .这是由于缺失一个碱基的DNA链与正常的DNA链间会形成有一个碱基突出来的杂合分子 ,导致其迁移率比完全碱基互补的分子迁移率慢 .因此作者建议在进行SSCP筛查未知突变时 ,最好采用不加甘油的非变性的聚丙烯酰胺胶 ,这既省力省钱 ,又灵敏 .在判读SSCP胶时 ,不可将在双链带位置有 1条比正常迁移率慢的带就判定为插入突变 .此时要判定突变的性质 ,最好测序 .

精子发生障碍患者精蛋白基因5′端及3′端核基质结合区的研究

运用PCR、PCR -SSCP、PCR产物直接测序等方法对 6 1例少精子症及无精子症患者的精蛋白基因 5′端及 3′端核基质结合区 (Matrixattachmentregion ,MAR)进行了突变筛查。结果发现 2例少精子患者在 5′端核基质结合区存在PCR -SSCP带型变异 。