骨科聚乳酸内固定物应用研究

目前 ,骨科可吸收内固定物的基础和临床研究日益增多。本文综述了聚乳酸材料的一般理化特性、生物降解吸收性能、机械性能、对骨折愈合影响及临床应用研究 。

生物衍生骨支架材料的体外细胞相容性实验研究

目的 评价不同处理方法制备的生物衍生骨支架材料的细胞相容性。方法 将支架材料 ,即复合型完全脱蛋白骨 (CFDB)、部分脱蛋白骨 (PDPB)和部分脱钙骨 (PDCB)与人胚骨膜来源的成骨细胞体外复合培养 ,采用倒置相差显微镜、激光共聚焦显微镜、扫描电镜、流式细胞仪及碱性磷酸酶 (AL P)活性检测 ,观察支架材料的细胞相容性。结果 三种材料上皆有细胞附着生长 ,三种材料对细胞增殖影响大小为 PDCB>PDPB>CFDB;三种材料对成骨细胞的细胞周期影响较小 ,未见异倍体细胞 ;三种材料对成骨细胞 AL P活性的影响大小依次为PDCB>PDPB>CFDB。结论 CFDB、PDPB及 PDCB无细胞毒性、无致瘤性 ,皆有良好的细胞相容性 ,以 CFDB为最好。

组织工程肋骨移植修复胸壁巨大缺损

目的 应用组织工程技术构建的肋骨和带蒂皮瓣移位修复 1例 2 5岁女性患者胸壁巨大韧带样纤维瘤切除后 ,合并软组织、肋骨缺损的早期效果。方法 经髂骨穿刺抽取骨髓组织 ,按 Houghton法分离培养骨髓基质干细胞 ,经定向诱导分化为成骨样细胞 ;用同种异体肋骨经去细胞、去抗原、部分脱钙和冻干处理 ,制成保存天然框架的生物衍生骨支架 ,将 5× 10 6 /ml骨髓基质干细胞与骨支架材料联合培养 6天 ;待完整切除肿瘤后 ,用膈肌瓣修复胸膜腔 ,组织工程肋骨修复 3根肋骨 ,同侧带蒂侧腹壁皮瓣移位修复胸壁软组织缺损。结果 手术经过顺利 ,伤口 期愈合。术后 3个月随访 ,植入组织工程肋骨在体内逐渐发育成成熟肋骨 ,心肺功能显著改善。结论 应用自体骨髓基质干细胞构建的组织工程肋骨在个体化治疗中显示了优越性。

转化人胚肌腱细胞的体外培养及生物学特性研究

目的研究经ｐｔｓＡ５８Ｈ质粒转化的人胚肌腱细胞的生物学特性，探讨细胞生长特性与体外培养条件改变的关系。方法取人胚肌腱细胞和经ｐｔｓＡ５８Ｈ质粒转化的人胚肌腱细胞，进行体外培养。对细胞进行形态学、超微结构及一般特征的观察。在不同培养条件下进行生长曲线绘制，平板克隆实验和软琼脂培养以及免疫组织化学法胶原染色。结果在正常培养条件下，人胚肌腱细胞和转化人胚肌腱细胞的生长性状几乎无差异，且冻存复苏并不改变其生长特性。在３９．５℃及３５℃进行条件培养，转化细胞的生长特性发生改变。转化细胞能长期传代，增殖能力强，并存在接触抑制现象和血清营养依赖性，在软琼脂中不能生长，具有分泌Ⅰ型胶原的能力。结论经ｐｔｓＡ５８Ｈ质粒转化的人胚肌腱细胞可长期连续传代。通过改变培养条件可控制其生长。无肿瘤细胞的生物学特点。

组织工程中细胞与材料的粘附作用

目的探讨组织工程中细胞与材料粘附作用及其影响因素。方法广泛查阅近期有关细胞与材料粘附作用的文献，综述了组织细胞与材料作用方面的研究工作。结果细胞对材料的粘附特性不仅取决于材料本身，包括材料及其表面性质、表面修饰、表面形态、净电荷、孔隙率及降解速率，而且与细胞表面的分子表达及其材料的相互作用有关。结论定量测定细胞与材料的粘附作用并了解其生物物理机制在组织工程学研究中十分重要。

外源性Ⅰ型胶原对人胚骨膜成骨细胞生物学特性的影响

目的 研究 型胶原对人胚骨膜来源成骨细胞生物学特性的影响 ,为 型胶原在组织工程人工骨中的应用提供依据。方法 在不同浓度 型胶原涂层上培养成骨细胞 ,用细胞计数法研究成骨细胞粘附情况 ,3 H- Td R掺入实验观察成骨细胞增殖能力 ,通过检测成骨细胞胶原、骨钙素和碱性磷酸酶的合成情况 ,以不涂层 型胶原为对照组 ,比较骨膜来源成骨细胞成骨能力的改变。结果 型胶原对成骨细胞发挥以下作用 :1增加粘附细胞数量 ,且在 2 5 μg/ m l浓度达最大效应 ;2减弱成骨细胞增殖能力 ,且以 12 .5 μg/ ml以上浓度作用显著 ( P<0 .0 5 ) ;3轻度减弱成骨细胞 型胶原合成能力 ,以 2 5 μg/ ml以上浓度作用显著 ( P<0 .0 5 ) ;4增加骨钙素合成 ,以6 .2 5 μg/ m l以上浓度作用显著 ( P<0 .0 5 ) ,2 5 μg/ m l浓度达最大效应 ;5增加成骨细胞碱性磷酸酶活性 ,以 12 .5 μg/ml以上浓度作用显著 ( P<0 .0 5 )。结论 型胶原能促进成骨细胞的粘附与分化 ;支架材料上复合 型胶原涂层可增强成骨细胞的成骨能力 ; 型胶原最佳复合浓度为 2 5 μg/

带蒂髂腹股沟皮瓣一期修复手部皮肤缺损65例

采用带蒂髂腹股沟皮瓣一期修复手部皮肤缺损６５例。断蒂时间１４～２８天（平均１６天）。断蒂后皮瓣全部成活，仅５例皮瓣边缘坏死，６例有轻度感染。随访６个月～５年，皮瓣的质地及弹性均好。讨论了带蒂髂腹股沟皮瓣一期修复手外伤的优点。

聚乳酸螺钉对骨折愈合影响的实验研究

本实验旨在研究一种自制PDLLA螺钉对骨折愈合的影响。用自制粘均分子量达 43× 10 4 的PDLLA螺钉内固定治疗 8只犬股骨外髁骨折 ,并以金属螺钉固定为对照。动物术后 2、4、8、12周处死 ,观察骨组织愈合影响的光镜和扫描电镜表现。光镜示两组骨折 2周时形成大量纤维性骨痂 ,12周时都已顺利愈合 ,实验组成骨过程明显较对照组缓慢 ,但成骨活动正常。扫描电镜示两组胶原纤维都排列规则 ,12周时顺利钙化成骨 ,实验组 12周时见大小不等 ,高电子密度颗粒。因而临床上应当适用于血供丰富部位骨折。

转化人胚腱细胞在PLA和PLGA表面上的粘附特性研究

为了定量研究转化人胚腱细胞（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍ ｅｄ ｈｕｍ ａｎ ｅｍ ｂｒｙｏｎｉｃ ｔｅｎｄｏｎ ｃｅｌｌｓ， ＴＨＥＴＣｓ）在聚乳酸（Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ， ＰＬＡ）和聚乳酸与羟基乙酸共聚物 ８５／１５（Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃｃｏｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ， ＰＬＧＡ ８５／１５）表面上的粘附特性，我们采用微管吸吮技术测定了单个ＴＨＥＴＣ与ＰＬＡ 膜（平均厚度１８．６ μｍ ）和ＰＬＧＡ８５／１５ 膜（平均厚度１７．３ μｍ ）表面的粘附力学特性。结果显示，ＴＨＥＴＣ与ＰＬＡ 膜和ＰＬＧＡ８５／１５膜表面的粘附率和粘附力明显大于膜表面裱衬牛血清白蛋白（Ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍ ｉｎ， ＢＳＡ）实验组，同时小于膜表面裱衬聚赖氨酸（ＰｏｌｙＤｌｙｓｉｎｅ， ＰＤＬ）实验组，而且ＰＬＧＡ８５／１５ 膜更易于ＴＨＥＴＣ粘附。表明ＢＳＡ 能抑制ＴＨＥＴＣ在聚合物膜表面的粘附，而ＰＤＬ能增强其粘附。提示ＰＬＧＡ８５／１５ 预涂ＰＤＬ是一种新型的ＴＨＥＴＣ贴附基。

组织工程化肌腱对T淋巴细胞亚群及其受体的影响

目的 探讨组织工程化肌腱对 T淋巴细胞亚群及受体的影响 ,明确其组织相容性。方法 采用3月龄法国罗曼鸡 75只 ,随机分成五组 ,每组 15只。手术造成右足第 3趾屈趾深肌腱 2 .5 cm缺损后 ,分组。A组 :未手术组 ;B组 :自体肌腱移植组 ;C组 :新鲜同种异体肌腱移植组 ;D组 :梯度降解材料复合腱细胞移植组 ;E组 :衍生肌腱材料复合腱细胞移植组。检测 CD4+ 、CD8+ 、CD2 8细胞阳性率及 T淋巴细胞相关抗原受体 (TCR)密度变化。通过刀豆蛋白 (Con A)诱导的淋巴细胞转化试验、直接淋巴细胞混合培养试验及间接淋巴细胞混合培养试验 ,了解机体对肌腱细胞的免疫反应水平。结果 D、E组与 B组比较 ,早期 CD4+ 、CD8+ 及 TCR轻度增高 ,2周后下降 ,无显著性差异 (P>0 .0 5 )。C组 CD4+ 、CD8+ 、CD2 8及 TCR阳性率与 D、E组比较 ,有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 肌腱细胞为弱抗原细胞 ,抗原脱落或可溶性抗原分泌较少。

吻合血管同种异体肱骨干移植20年随访结果

目的 回顾总结吻合血管同种异体肱骨干移植的临床效果 ,并评价其临床意义。方法 1979年9月～ 11月 ,采用吻合血管的同种异体肱骨干移植修复 1例肱骨干 10 cm缺损 ,2例胫骨干 12 cm缺损 ,术后使用硫唑嘌呤、强地松等免疫抑制剂 3个月 ,进行连续 2 0年随访。结果 例 1修复肱骨干骨折术后恢复顺利 ,骨愈合 ,重塑良好 ,能胜任原工作。例 2术后 3年内发生 5次慢性排斥反应 ,经治疗好转 ;术后 2年发生移植骨骨折 ,经取自体髂骨植骨愈合 ,能胜任原工作。例 3术后 3年 10个月发生骨折 ,取自体髂骨植骨愈合 ;术后 2 0年随访 ,移植骨中段不愈合 ,仍能从事农业劳动。结论 用现代移植免疫学原理 ,进行良好的组织配型 ,在一段时间内使用有效免疫抑制剂 ,有可能提高同种异体长管状骨移植的临床效果。

原代人胚成肌细胞体外培养增殖及分化特性

目的 分离培养人胚胎成肌细胞 ,观察原代细胞体外增殖与分化特性。方法 选择健康妇女捐赠的胎儿骨骼肌标本 ,参照 Blau等的胰蛋白酶与胶原酶混合、多步消化法分离成肌细胞。经差速贴壁法纯化后 ,在含 2 0 %胎牛血清的生长培养基中培养 ,以生长曲线评价其增殖情况 ;含 5 %胎牛血清的融合培养基中培养 ,以磷酸肌酸激酶 - MM型合成量及成肌细胞融合率评价其分化能力。通过光镜、透射电镜、免疫细胞化学方法 (小鼠抗人肌球蛋白单克隆抗体 )鉴定所得细胞。结果 电镜下可见所得细胞含大量游离核糖体 ,肌球蛋白免疫细胞化学染色强阳性 ,能合成磷酸肌酸激酶 ,能融合形成肌小管 ,证明其为骨骼肌成肌细胞。在生长培养基中原代细胞倍增时间为4.8天 ,在融合培养基作用下 ,肌小管融合率及磷酸肌酸激酶合成量明显增加。结论 多步酶消化法与差速贴壁法能获得足量、纯净成肌细胞 ,所得细胞增殖能力强 ,能表达骨骼肌特异的收缩蛋白 ;

周围神经组织工程材料的预构

目的 研究具有雪旺细胞 (SC)活性的组织工程周围神经修复材料的构建方法。方法 1采用干 /湿相转化纺丝法 ,将分子量为 730 k D的聚乳酸 (PL A)制成外径为 2 .3m m、内径为 1.9m m、壁厚 0 .4mm、长4cm、孔隙率为 70 %、孔径为 2 0～ 40 μm的中空纤维管和孔径为 10 0～ 2 0 0 μm、孔隙率为 85 %的 PL A无纺纤维布。2将 SC置入细胞外基质 (ECM)凝胶中 ,观察 SC在 ECM凝胶中的生长。 3SC/ ECM悬液浸入 PL A无纺纤维布中 ,观察 SC在 PL A支架材料中的生长。 4将 SC、SC/ ECM和 SC/ ECM/ PL A置入 PL A中空纤维管中 ,桥接大鼠坐骨神经长 10 mm缺损 ,观察 SC移植后存活情况。结果 1SC在 ECM凝胶中 ,细胞生长良好 ,1天后开始有细胞伸出两极 ,形态开始展开 ,3天后几乎全部细胞恢复成双极梭形状细胞 ,并开始分裂、增殖 ,直到 14天后随着凝胶的溃解 ,SC开始死亡 ,降解成碎片 ;当 ECM凝胶溃解后 ,加入 DMEM培养基 ,SC游出 ,贴壁生长。2 SC/ ECM悬液浸入 PL A无纺纤维布后 ,大部分细胞随 ECM凝胶状态的形成 ,滞留于 PL A纤维网孔中 ,1天后开始伸出两极 ,3天后可见网孔中大量双极梭形细胞 ,部分细胞沿着纤维生长 ,仅少数细胞脱落于培养瓶底贴壁生长。 3SC移植术后2 1天 ,Brd U免疫组织化学染色发现大量

类胰岛素生长因子-1作用下肌腱细胞的周期改变

为了明确类胰岛素生长因子－１（ＩＧＦ－１）促进肌腱细胞生长的作用机制，以便进一步探索调控肌腱细胞生长的手段，采用体外培养的第６代肌腱细胞，加入ＩＧＦ－１共同培养后，与对照组一起，用流式细胞技术进行细胞周期亚时相的定量分析。结果表明，实验组的ＤＮＡ合成前期（Ｇ１期）时间、ＤＮＡ合成期（Ｓ期）时间和分裂前期及分裂期（Ｇ２Ｍ期）时间分别为１１．８，２１．４和６．８小时；而对照组的时间分别为２５．６，２２．６和２１．８小时。ＩＧＦ－１使肌腱细胞的Ｇ１期和Ｇ２Ｍ期所需要的时间大大缩短。

类胰岛素生长因子-1及其受体mRNA在培养肌腱细胞内的表达

为了进一步探讨类胰岛素生长因子－１（ＩＧＦ－１）受体系统在培养肌腱细胞群体生命活动中的变化，采用地高辛标记的ＩＧＦ－１及其受体基因的寡核苷酸探针，对原代、第６代及第１３代肌腱细胞ＲＮＡ进行杂交，探测ＩＧＦ－１及其受体在上述细胞中的ｍＲＮＡ表达。结果发现，上述三种细胞均表达ＩＧＦ－１受体ｍＲＮＡ；只有原代和第６代细胞表达ＩＧＦ－１ｍＲＮＡ，而第１３代细胞不表达ＩＧＦ－１ｍＲＮＡ。提示，ＩＧＦ－１ｍＲＮＡ不表达可能是导致第１３代肌腱细胞增殖能力下降的原因之一。

酸性成纤维细胞生长因子促进引导性骨再生的实验研究

目的 研究酸性成纤维细胞生长因子（α Ｆ Ｇ Ｆ）对引导性骨再生（ Ｇ Ｂ Ｒ）的作用，增强 Ｇ Ｂ Ｒ 修复骨缺损的能力。方法 １６ 只新西兰白兔分为四组，每组 ４ 只，造成兔双侧桡骨干１０ ｍ ｍ 节段性骨缺损，以硅胶管桥接骨缺损，实验侧管内置入人基因重组酸性成纤维细胞生长因子（ｈｒａ Ｆ Ｇ Ｆ）２４ μｇ，对侧管内注入生理盐水作对照。于术后２、４、６ 及８ 周各处死一组兔，作 Ｘ 线、大体、组织学观察。结果 实验侧术后２ 周即在骨断端髓腔、骨内膜及皮质断面处有新骨形成，并长入管内血肿，术后４ 周新骨长入血肿中心，８ 周完全骨愈合。对照侧在各阶段新骨形成均不如实验侧，８ 周时仅出现部分骨愈合。结论 酸性成纤维细胞生长因子（ａ Ｆ Ｇ Ｆ）可促进 Ｇ Ｂ Ｒ，增强其修复骨缺损的能力。

培养软骨移植修复兔生长板缺损

目的 将体外培养软骨移植修复兔生长板缺损 ,防止生长板缺损早闭造成的肢体发育畸形。方法分离收集 1月龄兔关节软骨细胞 ,经离心管内培养形成软骨。将培养 2周软骨植入 6周龄兔胫骨上端生长板缺损区 ,于 4、16周时对术肢行 X线摄片、组织学及免疫组织化学等检查。结果 兔胫骨上端生长板缺损区移植培养软骨 4周时 ,胫骨无明显畸形发生 ,组织学检查显示生长板缺损由软骨充填 , 型胶原免疫组织化学染色阳性。 16周时移植侧胫骨仍无明显畸形 ,组织学检查显示生长板已近闭合。而对照侧胫骨发生严重畸形 ,生长板闭合。结论培养软骨异体植入兔生长板缺损 ,可替代缺损的生长板软骨组织 ,维持肢体正常生长 ,防止肢体发育畸形。

组织工程化软骨的应力-应变研究

为研究组织工程化软骨的应力 -应变特性 ,采用生物力学方法对体外培养离心管软骨和裸鼠皮下培养胶原海绵构建的软骨在 5 %变形时的压缩模量进行了测试。结果表明 ,体外离心管培养软骨在 4、8、12、16周时的压缩模量分别为 0 .35 18、 0 .6 5 3、 0 .2 33、0 .2 6 2 MPa。其中在 8周时达最高 ,低于天然人胎关节软骨压缩模量 2个数量级。体内皮下培养的胶原海绵软骨 16周时的压缩模量为 10 .6 6 8MPa,与天然人胎关节软骨的压缩模量在同一数量级 ,但仍低于天然软骨的压缩模量。离心管软骨压缩模量的动态变化提示它与软骨细胞分泌 GAG的活性变化一致 ,都在 8周时达高峰。离心管软骨压缩模量总体偏低的现象提示可能是由于培养液与人工软骨大分子之间缺乏屏障保护 ,细胞分泌的 PGs分子易于流失到培养液中的结果。而体内皮下培养的软骨压缩模量低于天然软骨的原因可能是软骨发育过程中缺乏负荷刺激。因此 ,从生物力学角度看 。

陶瓷样异种骨的制备及复合骨髓移植成骨的实验研究

为寻找理想的骨移植替代材料，将市售新鲜猪肋骨经物理、化学方法处理后，制得类似人骨的具有天然网状孔隙系统的陶瓷样异种骨（ＣＸＢ）。用ＣＸＢ与兔骨髓基质细胞体外混合培养；用ＣＸＢ与自体红骨髓（ＢＭ）复合移植于兔的骶棘肌内，经相差显微镜、组织学和扫描电镜观察。结果表明，ＣＸＢ对兔骨髓基质细胞的生长、附着及增殖无不良影响，显示了良好的组织相容性。ＣＸＢ加ＢＭ植入肌内后第２周开始成骨，并随时间而增加。至２４周时有明显的新骨形成，其新骨生成过程与羟基磷灰石（ＨＡ）加ＢＭ复合移植相似，但其降解快，形成典型的松质骨结构早，而单纯植入ＣＸＢ则无新骨形成。探讨了复合移植的成骨机理及临床意义。

椎板切除术后预防硬膜外瘢痕粘连的实验研究

为了寻找预防椎板切除后硬膜粘连的材料，选用家兔３０只，随机分为三组，每组１０只。每只作Ｌ３、Ｌ５椎板切除，形成两个大小１ｃｍ×０．５ｃｍ的缺损，一个缺损无任何覆盖，作空白对照；另一个缺损分别在硬膜外覆盖几丁糖、聚乳酸（ＰＬＡ）膜及明胶海绵，即为几丁糖组、ＰＬＡ膜组及明胶海绵组。术后２，４，６，８及１０周处死动物，通过肉眼、光镜及透射电镜，观察瘢痕生长及硬膜外粘连情况。结果表明，几丁糖组和ＰＬＡ膜组硬膜外均光滑、无增厚，硬膜外腔隙未见纤维组织增生或粘连；几丁糖具有明显抑制成纤维细胞生长和促进表皮细胞生长的作用，切口愈合快。而各组空白对照和明胶海绵组硬膜外纤维组织增生或粘连明显，硬膜外腔隙基本消失。认为，可生物降解吸收的几丁糖、ＰＬＡ膜能有效地预防椎板切除术后瘢痕粘连。