体外诱导成熟树突状细胞的研究

目的 :探讨在体外从干细胞中诱导出成熟DC的适宜环境。方法 :分别将人胎肝、骨髓和脾细胞以及小鼠骨髓和脾细胞在体外用GM CSF和TNF α诱导 ,观察了第 3、5、7天DC的收获情况。进一步用S P免疫细胞化学染色检测了mBmDC和fLDC有关分子表达。结果 :在体外通过GM CSF和TNF α的作用 ,小鼠骨髓、人胎肝、骨髓细胞呈典型的毛刺状胞浆突起 ,第5天的收获率分别为 :39 5 %、6 7 2 %、12 9% ,而基本不能从脾细胞中诱导出成熟DC ,获得的DC能与MAbCD80、MAbCD40呈强阳性反应。结论 :在GM CSF和TNF α的共同作用下 ,能在体外从人胎肝、骨髓和小鼠骨髓干细胞中获得成熟DC ,其DC能表达高水平的B7 1和CD40分子 ,这为大量获取DC提供了一种简便可行的手段 ,为研究DC的生物学特征及其抗原提呈功能提供了丰富的材料 。

肺癌组织端粒酶活性的定量研究及其临床意义

目的 研究肺癌组织中端粒酶活性的表达及其临床意义。方法 采用定量放射端粒重复序列扩增法 (TRAP)检测 74例肺组织中 ( 4 5例为NSCLC ,15例SCLC ,结核 7例 ,炎性假瘤 7例 )端粒酶的活性。结果 NSCLC端粒酶阳性率为 73 .3 % ,且活性较弱 ( 172TPG) ,SCLC端粒酶的阳性率为 93 .3 % ,且活性较强 ( 2 88TPG)。结核与炎性假瘤端粒酶活性全为阴性。SCLC端粒酶活性显著高于NSCLC(P <0 .0 5 ) ,且酶的活性水平与肺癌组织分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移及临床分期有密切关系 (P <0 .0 5 )。结论 端粒酶可能是判断肺癌预后不良的指标之一。

毫米波辐照诱导鼻咽癌细胞凋亡及分子机制的实验研究

采用细胞计数、光镜和 FCM等方法检测毫米波对人鼻咽癌 CNE1 细胞增殖、细胞凋亡及相关基因表达的影响 ,结果发现 :波长为 7.1mm,频率为 42 .2 GHz,功率密度为 1m W/ cm2 的毫米波辐照 ,1次 /日 ,30 min/次 ,照射 4次 ,能显著抑制 CNE1 细胞增殖和克隆形成 ;并诱导细胞凋亡 ,光镜下可见到明显的凋亡细胞 ,FCM示凋亡百分比显著增加 .FCM结果表明其增殖抑制作用与 P2 1表达上调及 Cyclin D1 表达下调有关 ,其凋亡诱导机制可能是非P5 3依赖的途径 ,而主要通过上调 c- Myc、下调 Bcl- 2和

小鼠肺癌细胞与树突状细胞融合的研究

目的使肺癌细胞表达共刺激分子,探讨其作为疫苗的可能性。方法小鼠骨髓细胞在体外经GM-CSF和TNF-α诱导,使之成为成熟树突状细胞(BmDC)。将其与小鼠Lewis肺癌细胞系AL9901融合,并以S-P免疫细胞化学染色法检测融合细胞和BmDC上有关分子的表达。结果通过GM-CSF和TNF-α诱导获得BmDC,以诱导5d时收获为佳。获得的BmDC能高表达B7-1和CD40分子,与肺癌细胞融合后,获得的融合细胞仍能高表达B7-1和CD40分子。结论通过将小鼠肺癌细胞与树突状细胞融合,使肺癌细胞获得了BmDC表达的B7-1和CD40分子,从而提高了其免疫原性,为制备肺癌疫苗奠定了基础。

5Fu-聚乳酸微球的体外释药及其抗癌效应研究

目的 研究生物可降解抗癌药 5Fu PLA微球的释药特点 ,鉴定其体外杀伤肿瘤细胞的活性。方法 采用恒温振荡透析法和一阶导数紫外分光光度法测定了 5Fu PLA微球的药物释放特性 ;MTT法测定了不同时相 5Fu PLA微球对 5种肿瘤细胞株的杀伤活性。结果 5Fu PLA微球具有良好的缓释功能 ,半量释放期t1/2 为 10 .4天。 5Fu PLA微球对 5种肿瘤细胞株均有较强的杀伤活性 ,且杀伤活性与作用时间和释药量呈正相关关系。结论 5Fu PLA微球中药物分布均匀 ;微球制备和溶蚀过程对5Fu的药效无影响。 5Fu PLA微球具有良好的缓释功能 ,能在较长时间内维持有效的杀伤活性。

5-FU-PLA微球的肺癌杀伤效应研究

目的 研究生物可降解抗癌药 5 FU PLA微球的释药特点 ,鉴定其体外杀伤肿瘤细胞的活性。方法 采用恒温振荡透析法和一阶导数紫外分光光度法测定 5 FU PLA微球的药物释放特性 ;MTT比色法测定不同时相 5 FU PLA微球对人和小鼠肺癌、胃癌、肝癌等细胞株的杀伤活性。结果 5 FU PLA微球的半数释放期 (t 1/ 2 )为 10 .4天 ,释放过程未表现出爆破效应 ( 2 4小时释放 19.4% )。 5 FU PLA微球对肺癌等细胞株有较强杀伤活性 ,其中肺癌和胃癌较肝癌更为敏感 ;5 FU PLA微球的肿瘤杀伤活性与作用时间和释药量呈正相关关系。结论 5 FU PLA微球的抗癌药物分布均匀 ,具有良好的缓释功能 ,微球制备和释放过程对 5 FU的药效无影响。 5 FU PLA微球能在较长时间内维持有效的杀瘤活性。本研究为 5 FU PLA微球用于肺癌等肿瘤的介入治疗提供了实验依据。

鼻咽癌染色体端粒长度变化的研究

为探讨人鼻咽癌染色体端粒行为异常与癌变的关系，应用 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 印迹杂交对 ３０ 例鼻咽癌和３０例与之年龄、性别配对的正常对照进行了分析。结果：鼻咽癌的端粒长度与对照相比显著缩短。在鼻咽癌中，１６１７％ 显示端粒伸长，７６．６７％ 显示端粒缩短，而６．６７％ 显示与对照相同的端粒长度。分析了 ３０ 例正常人外周血淋巴细胞端粒长度的变化，可见染色体端粒的长度随年龄增长而逐渐缩短（ｒ＝ － ０．３９１３， Ｐ＜ ０．０５），并且端粒每年平均缩短 ３９ｂｐ 的核苷酸。结果提示：人鼻咽癌染色体不稳定可能与端粒长度缩短有关。

咖啡因与苯巴比妥联合对顺铂的体外抗癌增效作用

目的 研究咖啡因 (CAF)对顺铂 (DDP)的抗癌增效作用及苯巴比妥 (PBT)是否抑制咖啡因的抗癌增效作用。方法 以SPC A 1细胞为对象 ,采用MTT法研究甲基黄嘌呤类药物———CAF及其与PBT联合应用对DDP的体外细胞毒作用的影响。结果 12 0 μg/ml的CAF及 10 μg/mlPBT对细胞生长无明显的细胞毒作用。 12 0 μg/ml的CAF可明显增强DDP对SPC A 1细胞的细胞毒作用 (P <0 .0 5 ) ,10 μg/mlPBT对DDP无增效作用 (P >0 .0 5 )。 12 0 μg/mlCAF与 10 μg/mlPBT的混合物也能增强DDP的细胞毒作用 (P <0 .0 1) ,其增效作用与单纯CAF的增效作用比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 咖啡因可明显增强DDP对SPC A 1细胞的体外抗癌效应 ,而苯巴比妥对咖啡因的体外抗癌增效作用无拮抗作用。提示苯巴比妥作为降低咖啡因副反应的成分 ,有可能与咖啡因联合使用作为化疗增效剂用于肺癌治疗。

人肺癌染色体端粒联合的比较观察

目的 探讨人肺癌细胞染色体端粒联合异常的规律。方法 应用染色体制备法检测人肺腺癌细胞株A5 49细胞、15例肺癌患者外周血淋巴细胞的端粒联合率 ,并以 15例良性疾病和正常人作对照。结果 肺癌组和非癌对照组的端粒联合率存在显著差异 (P <0 .0 0 5 ) ,人肺腺癌细胞株A5 49中端粒联合率显著高于肺癌组和非癌对照组 (P <0 .0 0 5 ) ;肺癌组细胞染色体中B、C、D组的端粒联合率明显高于非癌对照组 (B组P <0 .0 5 ,C、D组P <0 .0 0 5 )。结论 与非癌对照组比较 ,人肺腺癌细胞株A5 49及肺癌患者外周血淋巴细胞染色体存在着更显著的端粒联合现象 ,且多发于染色体的B、C、D组 ,可为肺癌诊断和预后的进一步研究提供有价值的细胞遗传学资料。

小鼠肺癌B_(7)融合细胞的制备及生物学性质

目的 改善肿瘤细胞共刺激分子B7的表达。方法 将ALA970 2 肺癌细胞与活化的B淋巴细胞用聚乙二醇进行细胞融合 ,经ELISA及免疫细胞化学筛选后 ,用S P免疫细胞化学染色观察融合细胞的肺癌抗原及B7分子的表达 ,并观察融合细胞的体内外生长情况。结果 经筛选获得一株融合细胞FLB2C。融合细胞既表达肺癌抗原 ,又表达B7分子。体外培养显示其贴壁性较ALA970 2 肺癌细胞减弱 ,生长明显变缓 ,细胞倍增时间延长 ,不能在软琼脂中形成集落。接种融合细胞亦不能在小鼠体内成瘤 ,而接种ALA970 2 细胞的 10只小鼠中 6例腋下出现肿瘤生长 ,3例还发生肺转移。结论 通过细胞融合方法可以有效改善肿瘤细胞的B7分子表达 ,从而提高肿瘤细胞的抗原性。融合细胞FLB2C的致瘤性明显减弱 ,为制备更有效的肺癌疫苗奠定了基础。

抗8-氮鸟嘌呤小鼠肺癌细胞株ALA_(9702)的建立

目的 为了通过细胞融合研制肺癌疫苗，需要建立有适合细胞融合的肺癌抗原细胞。方法 用８氮鸟嘌呤（８ａｚａｇｕａｎｉｎｅ，８ Ａ Ｇ）从小鼠肺癌细胞 Ｌ Ａ７９５ 诱导抗８ Ａ Ｇ 细胞株 Ａ Ｌ Ａ９７０２ ，并鉴定其生物学特性及成瘤性。结果 Ａ Ｌ Ａ９７０２ 细胞在１．３１×１０－ ４ｍ ｏｌ／ Ｌ ８ Ａ Ｇ 培养液中生长了１ 年，在 Ｈ Ａ Ｔ培养液中不能形成集落，并保持了来源细胞 Ｌ Ａ７９５ 的生长特性、染色体数目、成瘤性及肺转移性。 结论 Ａ Ｌ Ａ９７０２细胞保持了来源细胞的生物学性质及成瘤性质，是一株稳定的抗８ Ａ Ｇ的小鼠肺癌细胞株，将作为适合细胞融合的抗原细胞，为研制肺癌疫苗，建立对肺癌有效的特异性免疫治疗奠定良好的基础。

一株HGPRT缺陷型小鼠肺癌细胞株的建立及其生物学性质

目的 为研制肺癌疫苗提供适合细胞融合的抗原细胞。方法 用8氮鸟嘌呤(8AG)从小鼠肺癌细胞LA795渐进诱导次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖基酶(HGPRT)缺陷型细胞株ALA9702,并鉴定其生物学性质及成瘤性。结果 ALA9702细胞在20μg/ml8AG培养液中生长了一年,在HAT培养液中不能形成集落,并保持了来源细胞LA795的生物学性质及成瘤性。结论 ALA9702细胞株稳定表现为HGPRT缺陷型小鼠肺癌细胞。