中国近交系猪到人异种移植靶抗原研究

目的 研究人血清对近交系猪组织的结合情况及猪组织内 α-半乳糖残基 (α- Gal)的分布。方法 采取近交系中国版纳小耳猪 4头及近交系五指山猪 1头的心、肝、脾、肺、肾、胰、小肠、胸腺、皮肤、淋巴结及各级血管组织 ,分别以中国正常人 A、B、O和 AB型血清及 BSI- B4为一抗或亲和物 ,用亲和免疫组织化学方法观察各型人血清对上述各组织的结合和组织内 α- Gal的分布情况。并用 α-半乳糖基酶 (α- GT)消化后 ,重复上述实验。结果 两种近交系猪组织的血清结合及 α- Gal分布情况相似。A、B、O和 AB型血清与被测两种猪的各部位组织结合无明显差异 ,主要为各级血管内皮细胞及部分实质细胞。BSI- B4与血清结合的部位相似。软骨、外周神经、肌肉未见血清及 BSI- B4结合。经 α- GT消化后 ,人血清和 BSI- B4与两种猪组织的结合反应除少数部位存在差异外 ,反应消失。结论 对猪进行基因改造时可不考虑其抗原强弱及分布问题。α- Gal是近交系猪的主要靶抗原 ,但不排除存在 α- Gal以外的靶抗原 ,通过对近交系猪基因改造克服排斥反应是较好的策略。

异种移植与中国地方猪种资源的利用

目的了解中国地方猪种资源概况及研究现状，使之更好地为异种移植服务。方法通过比较猪与非人灵长类动物在异种移植上的优劣及当前异种移植界对猪种资源的重视，分析中国地方猪种在异种移植供体选择上是否存在优势。结果中国是猪种资源最丰富的国家之一，猪种多样性和遗传相对稳定性为异种移植提供了可贵的研究和利用资源，而异种移植又为猪种的利用提供了机遇。结论中国地方猪种资源可能会引起世界异种移植界的重视，在其保护与利用。

临床异种大动物器官移植的现状、问题与对策综述

异种移植因可能解决同种异体供器官短缺的问题而成为全球研究热点。但迄今临床异种移植数量少，效果不理想。主要原因是：现有的大型哺乳类动物作为供者各有优缺点，尚未选出一种理想的动物供者；异种移植后将出现超急性排斥和急性血管性排斥，其后还可能有急性细胞性排斥和慢性排斥；人畜共患疾病和某些供者动物易患病可能跨越种间屏障危及人类受者甚至社区健康；动物脏器功能能否长期替代人类相应脏器功能均无答案。转基因猪和针对体液、细胞免疫的各种抑制措施可能有助于解决异种排斥问题；但异种移植最终用于临床前，须对动物疾病进行筛检防治，建立观察动物脏器在人体内环境工作的方法，进行深入探索，确保使用安全。

异种移植社会伦理问题

同种供器官、供组织短缺已愈来愈明显，异种移植为最终解决这一世界性难题提供了可能。猪在很多方面与人相近，相对非人灵长类动物，社会、伦理方面的争议较少，已被公认为最理想的供体得以深入研究。但要最终用于临床，除解决免疫、遗传、生理、解剖和人畜共患病防治外，还必须考虑伦理、经济、受者及其家庭以及社会的心理承受力和接受度。加之异种供体的商品属性及其生产、使用过程将遵循的市场规律，是对现行同种移植“自愿捐赠，统一分配”管理体制的极大冲击，有必要在统一认识的基础上。

树突状细胞的表面标志及其免疫学意义

树突状细胞（ＤＣ）是免疫应答中重要的免疫细胞，在体内有移行成熟的特点，成熟及非成熟ＤＣ在免疫应答中有着不同的作用。本文综述了ＤＣ的表面标志，共刺激分子的表达及其免疫学意义和体外培养方法学方面的最新进展。

用人免疫活性细胞重建免疫抑制后猪的免疫系统

为探索用人免疫活性细胞重建猪免疫系统，用以测试活体动态猪→人异种移植免疫反应性。将中国内江猪经化疗行免疫成分摧毁后随机分为对照组、腹腔组和静脉组，每组各5只。腹腔组和静脉组分别于免疫成分摧毁后7天经腹腔和静脉注入人骨髓及脾细胞悬液。结果显示对照组长期存活，腹腔组存活3～54天，静脉组存活15小时～60天。三组在给药后7天，外周血白细胞降至最低，为给药前的1％～10％，而血小板、血红蛋白变化不大。腹腔组和静脉组白细胞计数恢复较对照组缓慢，血小板、血红蛋白差别不大。输入人细胞后1天、7天、60天，腹腔组和静脉组外周血细胞流式细胞仪检测，离心涂片免疫组化染色，均发现人细胞存在。脾、肺中有人类细胞浸润。因此认为，对免疫抑制的猪植入人骨髓及牌细胞，可使人细胞在猪体内形成嵌合，有发生异种移植物抗宿主病的可能，可为研究猪-人异种移植免疫反应性提供更好的动物模型。移植细胞时经腹腔注射可避免对植入细胞的细胞毒作用，可能优于静脉注入。

平行平板流动装置用于药物对内皮细胞功能影响的实验研究

目的 将平行平板流动装置用于体外药物试验研究 ,为心血管药物的筛选和测试提供新的实验方法和手段。方法 用放射免疫法测定内皮素 (ET- 1)和 6 -酮 -前列腺素 F1α(6 - keto- PGF1α)的分泌速率和累积分泌量 ,观察复方丹参注射液、丹皮酚和阿司匹林等心血管药物在剪切流场中对内皮细胞分泌 ET- 1和前列腺素 (PGI2 )功能的干预作用。结果 复方丹参注射液和丹皮酚对 ET- 1、PGI2 的分泌功能均有促进作用 ,而阿司匹林则无影响。结论 平行平板流动装置条件易控制 ,观察和测定方便 ,不失为一种研究心血管药物对内皮细胞功能影响的较好方法。

直接识别和间接识别在猪到人异种移植中的作用研究

目的 探讨直接识别和间接识别在异种移植中的作用。方法 分别以中国内江猪和人的外周血淋巴细胞做为刺激细胞和效应细胞,进行异种单向混合淋巴细胞反应,并与同种异体和自体混合淋巴细胞反应作对照,采用3H-TdR检测混合反应的增殖性。结果 在三种混合方式中,同种异体混合淋巴细胞反应的增殖最强,其次为异种混合,自体混合的增殖最低[采用改良Terasaki血清法对人和猪进行HLA-A、B、DR、DQ 配型,人H1 为A 9,33+ 34;B27,16(40);DR4,8;DQ 1,- 。人H2为A 29(10),23(9);B22,27(7);DR12,9(52);DQ 2,3。]。猪配型不成功。结论 从单向混合淋巴细胞反应的结果提示主要组织相容复合物(MHC)的适配性在异种移植中仍起作用;异种移植中,MHC配型可能也值得考虑。

同种肝脏移植进展——全美ASTP第17届年会纪要

第１７届全美器官移植年会于１９９８年５月在芝加哥召开，本次大会共交流论文七百多篇，基本代表了美国器官移植界的研究动向。同种移植及其相关问题仍然是大会的主要议题，其中至少有近百篇文章与肝脏移植有关。这些文章主要着重于免疫抑制治疗、病毒感染和儿童肝脏移植...

中国内江猪对人血清反应性研究

猪到人异种移植的首要障碍为人血清中的天然抗体与异种抗原结合，激活补体导致的超急排斥反应。一组带有α半乳糖基末端的糖蛋白和脂类是猪到人异种移植的主要异种抗原（αＧａｌ）。采用免疫组化法，用各种血型健康人血清和植物凝集素ＢＳⅠＢ４检测内江猪各组织异种抗原的分布，并用α半乳糖基酶消化αＧａｌ后再检测血清抗体的结合。结果显示：αＧａｌ是内江猪主要的异种抗原；各型血清与内江猪组织结合无差异，提示受者血型不是内江猪到人异种移植首要考虑的因素；肾脏远曲小管和集合管无ＢＳⅠＢ４结合，但有血清抗体结合，经α半乳糖基酶消化后结合消失，提示该处可能存在非αＧａｌ抗原，这些抗原可能为该酶中混杂酶的底物；软骨、外周神经、肌肉中αＧａｌ分布较少。

原代人胚成肌细胞体外培养增殖及分化特性

目的 分离培养人胚胎成肌细胞 ,观察原代细胞体外增殖与分化特性。方法 选择健康妇女捐赠的胎儿骨骼肌标本 ,参照 Blau等的胰蛋白酶与胶原酶混合、多步消化法分离成肌细胞。经差速贴壁法纯化后 ,在含 2 0 %胎牛血清的生长培养基中培养 ,以生长曲线评价其增殖情况 ;含 5 %胎牛血清的融合培养基中培养 ,以磷酸肌酸激酶 - MM型合成量及成肌细胞融合率评价其分化能力。通过光镜、透射电镜、免疫细胞化学方法 (小鼠抗人肌球蛋白单克隆抗体 )鉴定所得细胞。结果 电镜下可见所得细胞含大量游离核糖体 ,肌球蛋白免疫细胞化学染色强阳性 ,能合成磷酸肌酸激酶 ,能融合形成肌小管 ,证明其为骨骼肌成肌细胞。在生长培养基中原代细胞倍增时间为4.8天 ,在融合培养基作用下 ,肌小管融合率及磷酸肌酸激酶合成量明显增加。结论 多步酶消化法与差速贴壁法能获得足量、纯净成肌细胞 ,所得细胞增殖能力强 ,能表达骨骼肌特异的收缩蛋白 ;

流体切应力作用下中性粒细胞F-肌动蛋白的变化

中性粒细胞担负着机体的防御功能，其生理特点关系着功能实现。由于中性粒细胞的成熟储存与功能发挥是在不同的力学环境中完成的，因而也就存在着不同的环境适应。Ｆ－ａｃｔｉｎ 的含量与细胞的力学性质有着密切关系。通过对不同切应力下Ｆ－ａｃｔｉｎ 含量及分布的观察，我们发现：在低切应力范围内随着切应力的升高Ｆ－ａｃｔｉｎ 的含量下降，不同的剪切类型所产生的效果有所差异；切应力与ｆ－ＭＬＰ或ＴＮＦ联合作用会使Ｆ－ａｃｔｉｎ 的含量比ｆ－ＭＬＰ或ＴＮＦ单独作用时下降，其趋势与单纯切应力作用相似。切应力作用后，细胞膜附近的Ｆ－ａｃｔｉｎ 明显减少。ｆ－ＭＬＰ或ＴＮＦ使Ｆ－ａｃｔｉｎ 含量升高则主要集中在细胞边缘，这时再施加切应力，细胞边缘的Ｆ－ａｃｔｉｎ 含量也会显著下降。结果表明：中性粒细胞在流体切应力作用下通过Ｆ－ａｃｔｉｎ 的解聚，降低细胞膜附近的硬度，增加细胞的变形能力，从而减少细胞在流体中的阻力，有利于细胞更好地通过循环，完成其功能。当切应力上升到较大值后，细胞内Ｆ－ａｃｔｉｎ 含量会上升，以抵抗力学的破坏作用。可以得出的结论是：切应力作用下，中性粒细胞内Ｆ－ａｃｔｉｎ 含量随所受切应力的大小呈现双向调节，表现出灵活的力学适?

中国内江猪各脏器组织中人类ABO血型抗原的分布

目的确证中国内江猪各脏器组织中是否存在人类ＡＢＯ血型抗原。方法抗人类血型Ａ、Ｂ、Ｈ抗原单克隆抗体为一抗，免疫组织化学ＥｎＶｉｓｉｏｎ法分别检测１０头中国内江猪多种组织人类血型Ａ、Ｂ、Ｈ抗原分布。结果所有血管内皮细胞均无Ａ、Ｂ、Ｈ抗原表达。其它多种组织表达Ａ抗原，而不表达Ｂ、Ｈ抗原。结论中国内江猪的部分脏器组织中有人类Ａ血型抗原表达，虽不属于超急性排斥反应抗原，但在猪→人异种移植中是值得研究并应加以克服的异种抗原。中国内江猪人血型抗原的表达不同于已报道的其它猪种，有可能寻找一种抗原性弱的猪作为异种移植供者的选育对象。

连续传代人胚骨骼肌成肌细胞生物学特性研究

目的 探讨成肌细胞连续传代能力 ,选择适宜肌组织工程研究的成肌细胞。方法 常规传代培养人胚骨骼肌成肌细胞 ,以生长曲线、融合率分别观察细胞增殖、分化能力 ,探讨成纤维细胞沾染对传代细胞的影响。结果 第 6代以内细胞成纤维细胞沾染轻 ,主要表现出成肌细胞的生长特性 ,增殖较旺盛 ,分化能力高。第 8代～第 16代细胞成纤维细胞沾染重 ,表现出成纤维细胞的生长特性 ,增殖速度明显加快但分化能力低。第 2 0代细胞退变明显 ,细胞增殖与分化能力均丧失。结论 第 6代以内细胞生长特性以成肌细胞为主 ,增殖能力强 ,肌小管形成率高 ,适宜于组织工程研究。

血液净化材料在体外静态接触血浆时血浆中C3a des Arg生成的研究

用放射免疫分析法研究了五种血液净化材料 :磺化聚醚砜 ,聚醚砜 ,聚砜 ,聚甲基丙烯酸甲酯和醋酸纤维素与人血浆在 37℃温育 30、6 0、90、12 0min后 ,血浆中补体C3激活产物C3adesArg的生成情况。结果发现 :醋酸纤维素、聚甲基丙烯酸甲酯、聚醚砜、聚砜在与血浆温育后 ,血浆中C3adesArg的浓度依次降低 ;以醋酸纤维素激活补体C3的情况最严重 ;磺化聚醚砜的最低 ,并且磺化度越大 ,C3adesArg的浓度越小。说明聚醚砜材料作为血液净化材料有较优异的补体相容性 ,并且通过磺化可大大提高聚醚砜的补体相容性。放免分析法检测材料激活补体C3是一种方便可靠的检测手段 ,可作为开发生物材料时对有应用前景的生物材料的筛选和评价。

高效毛细管电泳法快速测定内江猪血清头孢唑啉钠

报道用高效毛细管电泳技术快速测定内江猪血清头孢唑啉钠（ｃｅｆａｚｏｌｉｎｓｏｄｉｕｍ，ＣＥＺ）的方法。血清用乙腈去除蛋白质，经离心后上清直接进样，毛细管内径７５μｍ，有效长度４０ｃｍ，在５０ｍｍｏｌ／Ｌ碳酸钠／碳酸氢钠缓冲液（ｐＨ１０）中，电压２０ｋＶ分离５分钟，２５４ｎｍ紫外检测。此方法操作简单，测定迅速，线性范围为５～３２０μｇ／ｍｌ，日内相对标准偏差为１．７％，日间相对标准偏差为８．０％，平均加样回收率为１０７．９％，最低检测限为１．５μｇ／ｍｌ，定量灵敏度为３．６μｇ／ｍｌ。按１６ｍｇＣＥＺ／ｋｇ对６头成年内江猪作静脉注射，测定结果经药动学软件分析得到药代动力学参数，结果表明内江猪对ＣＥＺ的代谢为二室开放模型，清除率为８．４３ｍｌ／（ｋｇ·ｍｉｎ）。

毛细管胶束电动色谱法测定内江猪血清中的安替比林

研究毛细管胶束电动色谱法（ Ｍ Ｅ Ｋ Ｃ）测定血清安替比林的方法。以对乙酰氨基酚为内标，采用 Ｍ Ｅ Ｋ Ｃ 技术，调节电泳缓冲液 ｐ Ｈ 和表面活性剂 Ｓ Ｄ Ｓ浓度，取得了最佳分离效果。最佳分析条件为５０ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ硼酸硼酸钠缓冲液（含 ５０ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｓ Ｄ Ｓ，ｐ Ｈ ９０１）；毛细管内径 ７５ μｍ ，有效长度 ４０ ｃｍ ，毛细管温度 ２０℃，压力进样 １０ ｓ，电压 ２０ ｋ Ｖ，２５４ ｎｍ Ｕ Ｖ 检测。方法快速，电泳 ８ ｍ ｉｎ 即可完成对 Ａ Ｐ和 Ａ Ａ Ｐ 的有效分离和定量。在 ５～３２０ μｇ／ｍ ｌ范围内线性良好（ｒ＝ ０９９９９）。并研究了 Ａ Ｐ 在内江猪体内的药代动力学，血药浓度时间数据经 ３ Ｐ８７ 药动学软件处理得到药代动力学参数，发现内江猪对 Ａ Ｐ 的代谢为二室开放模型，消除半衰期为 ６２３５ ｍ ｉｎ，血浆清除率为 ５２ ｍ ｌ／（ｋｇ·ｍ ｉｎ）。

中国内江猪胰腺组织异种抗原的研究

为获取临床猪→人异种胰腺移植的基础资料 ,分别采用植物凝集素 BSIB4、健康人血清、人类血型抗原 A、B、H物质单克隆抗体免疫组化法检测 1 0头内江猪胰腺组织中异种移植抗原的表达。结果显示 :内江猪胰腺组织中血管内皮、导管上皮细胞表达α- Gal;部分胰岛细胞、胰腺外分泌细胞和所有导管上皮细胞均表达人类血型 A抗原。结论 :人体内存在抗内江猪胰腺组织部分细胞的天然抗体 ;

猪血管内皮细胞α-Gal对人外周血淋巴作用初探

超急性排斥反应克服后，异种移植物将面临血管性和细胞性排斥。血管内皮是免疫排斥的主要场所，异种移植免疫中血管内皮细胞的作用以及其携带的αＧａｌ在超急性排斥后免疫反应中的作用研究尚少。通过混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ），以同种异体ＭＬＲ为对照，对异种（内江猪→人）外周血淋巴细胞（ＰＢＬＣ）混合反应和内江猪血管内皮细胞（ＰＡＥＣ）人ＰＢＬＣ混合反应进行研究，同时考察α半乳糖基酶消化后ＰＡＥＣ对人ＰＢＬＣ的刺激性。结果表明：异种ＭＬＲ增殖较相应的同种异体ＭＬＲ弱，可能与在异种周围淋巴细胞ＭＬＲ中以间接呈递为主有关；ＰＡＥＣ作为刺激细胞的ＭＬＲ增殖极强，可能与ＰＡＥＣ本身是抗原呈递细胞且抗原呈递以直接呈递为主有关；αＧａｌ引起增殖，可能与其在体内数量多、与生物大分子结合可成为全抗原有关，提示该抗原可能也是超急性排斥后排斥反应的靶抗原；去除ＰＡＥＣ表面αＧａｌ后，仍可诱发人Ｔ细胞反应，提示可能还存在其它超急性排斥后抗原。

兔甲状软骨细胞体外培养及生物学特性研究

目的 研究体外培养的兔甲状软骨细胞的生物学特性 ,为组织工程寻找最适宜的软骨细胞。方法 分离培养兔甲状软骨细胞 ,用倒置显微镜、电镜及组织学方法观察细胞形态、超微结构、功能及生长增殖能力。结果 ①原代软骨细胞呈圆形或多角形 ,第 4代有一半变成梭形 ,第 6代绝大部分变为长梭形 ;②原代软骨细胞胞浆内粗面内质网和线粒体丰富 ,阿新蓝染色阳性 ,具有合成和分泌糖胺多糖的功能 ;③第 3代软骨细胞生长增殖能力强于原代 ,第 5代增殖能力明显减弱 ,第 9代几乎丧失增殖能力。结论 体外培养的兔甲状软骨细胞保持了其体内的基本特征 ,第