单克隆抗体药物中重组人透明质酸酶活性测定方法的建立

目的建立并验证一种检测单克隆抗体药物中重组人透明质酸酶(recombinant human hyaluronidase,rHuPH20)活性的方法。方法利用浊度法建立单克隆抗体药物中rHuPH20活性的检测方法,并对该方法的专属性、线性、中间精密度、准确度、重复性进行验证。结果该方法专属性良好,空白和不添加rHuPH20的单克隆抗体药物的rHuPH20活性均<4 U/ml。在3.5~26.7 U/ml范围内,供试品rHuPH20理论活性和实测活性线性相关,决定系数R^(2)>0.97;中间精密度试验结果的变异系数(coefficient of variation,CV)均<15%;各rHuPH20活性的平均值回收率在95%~105%之间,符合线性、中间精密度和准确度的验证要求。6次独立测定3批供试品rHuPH20活性的变异系数分别为6.56%,2.96%和4.10%,符合重复性的可接受标准(≤10%)。结论该方法各项指标均符合要求,可对单克隆抗体药物中rHuPH20活性进行质量控制。

抗CD52单克隆抗体ADCC转基因测活方法的建立

目的 建立转基因细胞法测定抗CD52单克隆抗体(单抗)的抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)生物学活性检测方法。方法 ①以Ramos细胞系作为靶细胞,以Jurkat-hFcγRⅢa/FcεRIγ-NFAT转基因细胞系作为效应细胞,通过荧光素酶检测系统(Bright-GloTM luciferase Assay System)建立抗CD52单抗的ADCC生物学活性检测方法;②对靶细胞、量效范围、效靶比及诱导时间进行优化并进行方法学验证;③研究建立的方法应用于对不同抗CD52单抗的ADCC生物学活性检测。结果 建立抗CD52单抗的ADCC生物学活性检测方法,抗CD52单抗在该方法中存在量效关系,符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D;经优化后确定抗体量效范围为起始质量浓度360μg/mL,4倍系列稀释9个稀释度;效靶比为3∶1,诱导时间为6.0h;该方法具有良好的专属性;4个不同稀释组回收率样品经3次测定,相对效价分别为(45.58±4.67)%、(71.61±9.45)%、(122.92±7.92)%和(149.94±14.58)%;对应的回收率分别为(91.16±9.34)%、(95.49±12.60)%、(98.34±6.34)%和(99.96±9.72)%,上述结果的变异系数(coefficientofvariation,CV)均小于15%;且该方法也适用于不同抗CD52单抗的ADCC效应评价。结论 利用转基因细胞法成功建立了抗CD52单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、准确性高、重复性好,可用于评价抗CD52单抗的ADCC生物学活性。

用单克隆抗体PAP桥联酶标技术检测猪粪中的猪痢疾密螺旋体

用单克隆抗体(McAb)过氧化物酶—抗过氧化物酶(PAP)桥联酶标方法,在实验室检测8株猪痢疾密螺旋体(T.h)纯培养物,全部“+”,检测无害密螺旋体(T.i)及禽弧菌(AV)各1株全为“-”。用该法检测来自猪痢疾(SD)猪20头份全为“+”,健康猪39头份全为“-”和可疑猪场的猪粪201头份,其中38头份“+”,163头份“-”共260头份,其结果与McAb间接荧光抗体(IFA)试验一致。捎除了用多克隆抗血清(PcAS)IFA和结晶紫染色法对T.i及在健康猪群中所出现的假阳性。PAP法具有高度敏感性和特异性,且染色标本能长期保存。初步结果表明该法可以成为诊断工作和免疫学研究的有用工具。

人肝癌组织中DSA强结合的γ-谷氨酰基转移酶单克隆抗体的制备

目的制备与欧蔓陀罗凝集素(DSA)强结合的γ-谷氨酰基转移酶(γGT)的单克隆抗体(mAb),并对抗体进行鉴定。方法以纯化的人肝癌组织DSA强结合的γGT为抗原,免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤(SP2/0)细胞融合,经ELISA筛选和有限稀释法获得稳定分泌mAb的细胞株。结果获得5株分泌抗DSA强结合γGT的mAb细胞株,其中3株分泌的mAb具有较高的特异性;ELISA法测定小鼠腹水mAb的效价≥625000;亚类鉴定mAb为小鼠IgG1。结论成功制备了抗DSA强结合γGT的单克隆抗体,为进一步建立免疫学检测方法奠定了基础。

一种乙肝病毒表面抗原和其单克隆抗体相互作用的SERS研究

利用银纳米粒子的表面增强拉曼散射(SERS)效应,研究了乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和其鼠源单克隆抗体(单抗,Ab HBsAg)的相互作用.SERS光谱结果表明,Ab HBsAg分子主要通过位于非抗原结合部位的去质子化羧基(COO-)实现与银纳米粒子的结合.HBsAg与Ab HBsAg相互作用形成免疫复合物后,HBsAg分子上的色氨酸(Trp)残基特征振动完全消失,表明Trp残基位于HBsAg抗原分子的活性区,是HBsAg与Ab

单克隆抗体及醋酸纤维薄膜电泳法在肺癌血清学诊断上的应用

肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一。为提高肺癌的诊治率，我们对肺癌血清学的诊断方法不断进行研究、改进，以期建立一种操作简便，结果可信、肺癌检出率高的检查方法。本文采用组合单克隆抗体，经醋酸纤维薄膜电泳法，对７０例肺癌患者血清及１００例正常人血清进行了检测。结果显示，肺癌血清中癌相关抗原的检出率为８３％，正常人血清组的假阳性率为１０％，误诊率小于３０％，故此方法有诊断应用价值。

抗人粘膜地址素-1单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的制备抗人ＭＡｄＣＡＭ－１单克隆抗体（ｍＡｂ）。 方法以重组人ＭＡｄＣＡＭ－１胞外区蛋白免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，采用杂交瘤技术制备ｍＡｂ。结果获得１０株可分泌特异性ｍＡｂ的杂交瘤细胞，其腹水ｍＡｂ的效价为３．２×１０５～１．９×１０６，ｍＡｂ的Ｉｇ亚类均为ＩｇＧ１，其中，８株ｍＡｂ的轻链属κ型，２株为λ型。应用于免疫组化染色法，检测表明，正常成人小肠、附睾及前列腺组织中存在ＭＡｄＣＡＭ－１阳性表达的血管内皮细胞。结论 成功地研制出抗人ＭＡｄＣＡＭ－１的ｍＡｂ，为进一步研究ＭＡｄＣＡＭ－１在肠道黏膜免疫中的作用提供了有用的试剂。

重组抗IL-36受体单克隆抗体药物的质量控制研究

目的研究并建立针对白细胞介素-36受体单克隆抗体(抗IL-36R单抗)的关键质量属性质控方法。方法采用基于胰蛋白酶酶切和反相高效液相色谱技术(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)的肽图法对抗IL-36R单抗进行特异性鉴别;采用还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)法、分子排阻(size exclusion,SE)-HPLC法测定抗IL-36R单抗的纯度;采用阳离子交换(cation exchange,CEX)-HPLC法测定抗IL-36R单抗的电荷异质性;采用亲水相互作用(hydrophilic interaction,HILIC)-HPLC法进行抗IL-36R单抗的寡糖图谱分析;采用IL-36R结合抑制法测定抗IL-36R单抗的生物学活性。结果利用基于胰蛋白酶酶切和RP-HPLC的肽图法可以获得具有特征性的抗IL-36R单抗色谱图,发挥了特异性的鉴别作用。非还原CE-SDS主峰面积百分比为(98.05±0.17)%,还原CE-SDS重链(HC)和轻链(LC)的峰面积百分比之和为(98.33±0.05)%。SE-HPLC单体和高分子量物质峰面积百分比分别为(99.53±0.01)%和(0.43±0.01)%。CEX-HPLC主峰、酸性峰和碱性峰的峰面积百分比分别为(61.47±0.79)%,(35.33±0.72)%和(3.19±0.12)%。HILIC-HPLC分析中含量最高的特征性寡糖的峰面积百分比为(63.68±0.08)%。抗IL-36R单抗相对于参比品的相对生物学活性为(95.87±6.10)%。结论针对抗IL-36R单抗的关键质量属性,研究并建立了相应的质量控制方法,以确保其安全、有效和质量可控,为该类单抗产品的质量控制方法和策略提供参考依据。

治疗性单克隆抗体类制品质量控制标准的思考

治疗性单克隆抗体制品在肿瘤、自身免疫、器官移植和感染性疾病的治疗中均取得了显著疗效,其品种和市场份额逐年显著提高。随着新的治疗性单克隆抗体制品的研发和上市,不同产品的质量控制研究,特别是新技术在质量控制中的应用被提到新的高度。由于治疗性单克隆抗体制品结构和生产的复杂性,使得质量控制的复杂程度也相应提高。本文结合治疗性单克隆抗体质量控制的工作经验和国际上的最新进展,对治疗性单克隆抗体质量控制项目设定、标准和方法进展进行论述。

肝癌组织γ-谷氨酰转移酶单克隆抗体制备及ELISA方法的建立

目的应用纯化的人肝癌组织中蔓陀罗凝集素(DSA)强结合的γ-谷氨酰转移酶(GGT)制备单克隆抗体(McAb),并建立ELISA检测方法。方法应用亲和色谱法纯化肝癌组织中DSA强结合的GGT;采用单克隆抗体技术获得其McAb;protein A-Sepharose亲和色谱法纯化McAb,过碘酸钠法标记HRP法后建立ELISA方法。结果获得5株能特异性识别DSA强结合GGT的McAb细胞株,其中3株细胞所分泌McAb具有较高的特异性,应用所获得McAb进行HRP标记后,建立的ELISA方法,其检测灵敏度为10μg/L,批内及批间平均变异系数为8.9%和11.5%。结论成功制备了DSA强结合的GGT McAb杂交瘤细胞系,并建立了ELISA免疫学检测方法,为临床应用打下基础。

两组单克隆抗体联合检测肺癌血清中癌相关抗原的研究

来文报道应用我室制备的单克隆抗体(单抗)WLA2C4、CL-3、Ps-9及Ps-10,用酶联免疫ELISA结合抑制法分别测定了肺癌组及正常人组血清中癌相关抗原(TAA)的含量,并以组合方式将4株单抗分为2组测定肺癌患者血清TAA含量,其中一组还对呼吸系统良性病变患者56例进行了测定。结果表明,单株应用单抗与组合应用单抗检测正常人组及呼吸系统良性病变组血清TAA的检出率均不高,两者之间无显著差异。而单株使用单抗检测肺癌组TAA检出率分别为52％～55％,组合应用后其TAA检出率显著增高,WLA2C4与CL-3组的TAA检出率为79.3％,CL-3、Ps-9与Ps-10组的检出率为85.2％,显示了组合应用单抗良好的互补性。鉴于组合应用单抗的假阳性检出率与假阴性检出率之和小于30％,故有诊断价值。

抗胃肠癌单克隆抗体对胃肠癌普查1801例结果分析

以抗结肠癌及胃癌单克隆抗体组合应用对１８０１例进行胃肠癌普查。普查结果：３２例胃肠癌肿瘤相关抗原阳性，阳性率为１．８％，部分进行胃及肠镜检查，其中１２例做肠镜，３０例做胃镜，结果证实：早期胃癌１例。癌前病变１９例，其中大肠腺瘤５例，伴不典型增生２例，萎缩性胃炎１２例，伴不典型增生７例，浅表性胃炎伴不典型增生１例，老年多发性肠憩室１例。此外，非癌前病变７例，包括浅表性胃炎、急性胃、肠炎等。１７５０例阴性者随访１年以上，尚未发现胃、肠癌，本法假阳性率低，０．３％。且方法较简便、价低。用于胃肠癌普查及诊断将有一定意义。

抗GD2单克隆抗体药物的质量控制

目的研究并建立针对抗双唾液酸神经节苷脂(disialoganglioside,GD2)单克隆抗体的关键质量属性质控策略。方法采用基于报告基因的抗体依赖性细胞介导的细胞吞噬(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)效应以及基于细胞增殖抑制的补体依赖性细胞毒性(complement-dependent cytotoxicity,CDC)作用测定生物学活性。分别采用ELISA法和SPR-Biacore法测定GD2和CD16的结合活性。采用还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)、分子排阻色谱(size exclusion-high performance liquid chromatography,SE-HPLC)测定单抗纯度。运用毛细管等电聚焦电泳(capillary isoelectric focusing electrophoresis,cIEF)测定电荷异质性。运用基于荧光检测器的超高效液相色谱法(UPLC)分析抗GD2单抗的糖基化(岩藻糖和半乳糖)。结果生物学活性中ADCP的半数最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC_(50))值为(24.24±0.57)ng/ml,CDC的EC_(50)值为(0.49±0.003)ng/ml。GD2结合活性的EC_(50)值为(17.53±2.14)ng/ml,CD16结合活性的EC_(50)值为(99.40±1.43)nmol/L。非还原CE-SDS主峰面积百分比为(98.61±0.17)%,还原CE-SDS重链(HC)和轻链(LC)的峰面积百分比之和为(97.39±0.15)%,SE-HPLC主峰峰面积百分比为(98.32±0.01)%。cIEF分析中峰“l”、峰“m”和峰“n”的峰面积百分比分别为(14.88±0.15)%,(37.18±0.37)%和(38.67±0.50)%。糖基化分析中岩藻糖基化单糖合计所占比例为(97.41±0.04)%,半乳糖基化单糖合计所占比例为(18.93±0.07)%。结论针对抗GD2单抗的关键质量属性,研究并建立了相应的质量控制策略,以确保其安全、有效和质量可控,为该类单抗产品的质量控制提供参考依据。

人肺腺癌细胞系SLC-89单克隆抗体的研制

用本室建立的“宣威”人肺腺癌细胞系SLC—89作抗原制备了三株抗人肺癌单克隆抗体细胞株4E_(12),4F_(12)和4H_2。它们在体外已培养了8个多月,多次液氮冻存后复苏,生长良好,并继续分泌抗体,经检测,所分泌的抗体对肺癌有较好的反应性,相应抗原在常规石蜡组织切片中仍较稳定,因此有可能作为临床病理诊断试剂。

亲和层析法纯化肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体

应用小鼠抗大鼠Ｋａｐｐａ轻链单克隆抗体（ＭｃＡｂ）亲和层析系统，对抗肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）大鼠ＭｃＡｂ进行了纯化研究。使用该系统具有ＭｃＡｂ回收率好，纯度高，能较好地保持ＭｃＡｂ免疫学活性，操作简便、快速，可一步除去腹水中宿主杂蛋白，并能适应不同类别ＭｃＡｂ纯化的特点。此外还对自制盐析纯大鼠Ｋａｐｐａ轻链ＭｃＡｂ柱与进口亲和纯大鼠Ｋａｐｐａ轻链ＭｃＡｂ往进行了比较和探讨。

大鼠单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳鼠保护作用观察

用肾综合征出血热病毒陈株(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome Virus,HFRSV Strain Chen)感染乳鼠,检测11株大鼠单克隆抗体(McAb)对感染乳鼠的保护作用。结果表明,其中4株McAb被动使用后对感染乳鼠有较高的保护作用。McAb保护力的大小与使用抗体中和活性有无、使用时间的早晚有密切的关系。同时发现多种McAb混合使用保护效果优于单一运用的保护作用。本文亦分析了McAb在活体内的保护作用与其它抗病毒保护机制的关系。

抗肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体的制备及初步鉴定

抗肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体的制备及初步鉴定徐海峰，杨为松，梁 ，米力，崔龙洙，李海凤（唐都医院出血热研究室，人单克隆抗体研究室）关键词肾综合证出血热病毒；大鼠；单克隆抗体中图法分类号Ｒ５１２．６大鼠Ｂ淋巴细胞杂交瘤具有单克隆抗体（ＭｃＡｂ）产...

对人单克隆抗体技术困难及前景的思考

目前的鼠、人或人—鼠杂交单克隆抗体在用于治疗病人中出现了种种困难,极大地限制了人单克隆抗体技术的发展。本文从系统观点分析难题的症结所在;并就其发展前景的两种观点进行了评判及提出了自己的观点。

^(99)Tc^(m)直接法标记单克隆抗体的研究Ⅱ.抗坏血酸在直接法标记过程中的作用

分析和比较了在^（９９）Ｔｃ~ｍ直接法标记单克隆抗体过程中，抗坏血酸在各个环节中的作用和影响。结果表明，在抗体还原完成后加入防氧化剂抗坏血酸可以防止还原后的—ＳＨ重新氧化，得到的标记产物在标记率和体外稳定性方面均优于不加抗坏血酸的标记法。该方法已成功地用于对Ｆ（ａｂ＇）＿２片段的标记并进行了荷瘤裸鼠体内分布和肿瘤显像测定，得到了很好的体外显像结果。