青藤碱联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的影响

目的观察青藤碱(sinomenine,SIN)联合甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)对体外培养类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖、凋亡及其破骨细胞分化因子表达的影响。方法从RA患者滑膜组织分离培养FLS,分为SIN1、2、3、4组,MTX1、2、3、4组,联合1、2、3、4组,分别加入0.001、0.010、0.100、1.000mg/mLSIN,0.001、0.010、0.100、1.000mg/mLMTX,0.001mg/mLSIN+0.001mg/mLMTX,0.010mg/mLSIN+0.010mg/mLMTX,0.100mg/mLSIN+0.100mg/mLMTX,1.000mg/mLSIN+1.000mg/mLMTX的含药培养基,并以未加药物的培养基作为对照组,共13组,每组设3个复孔。采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;半定量RT-PCR检测FLSNF-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)mRNA表达水平。结果与对照组比较,各药物组RAFLS增殖OD值均降低,联合3组RAFLS凋亡OD值、OPGmRNA表达升高,RANKLmRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与联合3组比较,SIN3组及MTX3组RAFLS增殖OD值升高(P<0.05)。结论 SIN与MTX联合对RAFLS具有协同抑制效应,这可能是二者联用抑制RA骨破坏的机制之一。

正清风痛宁联合甲氨蝶呤对胶原诱导的关节炎大鼠模型血清OPG/RANKL的表达影响

目的:通过观察青藤碱(SN)联合甲氨蝶呤(MTX)对胶原诱导的关节炎大鼠模型血清OPG/RANKL的表达影响,探讨其防治类风湿关节炎(RA)骨质破坏的作用机制。方法:建立Ⅱ型胶原蛋白诱导的SD大鼠关节炎模型。将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、MTX组和联合组(SN+MTX组)。采用关节评分法评估关节炎症程度,并用ELISA法分析大鼠血清骨保护素(OPG)和核刺激因子-KB受体配体(RANKL)的表达水平。结果:(1)SD大鼠造模后,关节肿胀在第21天最为明显,然后逐渐消退,在第35天左右会出现第2个炎症高峰。MTX组和联合组均可减轻关节肿胀,关节炎指数评分在第46天与造模组比较差异有统计学意义(P≤0.05)。(2)联合组可降低血清RANKL的表达水平,提高OPG的表达水平,升高OPG与RANKL的比值;MTX组提高OPG的表达水平,与模型组比较有统计差异(P≤0.05)。结论:SN联合MTX可协同延缓骨破坏的发生,其机制可能是通过提高OPG/RANKL的比例,从而竞争性抑制RANK和RANKL的结合。本研究为SN联合MTX抗RA骨破坏提供了实验依据。

Bazedoxifene治疗SLE小鼠的疗效及对CD4^(+)T细胞亚群的影响

目的白细胞介素-6(IL-6)与系统性红斑狼疮疾病活动相关,是治疗系统性红斑狼疮的潜在靶点。雌激素-雌激素受体在诱发和加重SLE方面发挥一定的作用。巴多昔芬(bazedoxifene,BAZ)作为新型的第三代选择性雌激素受体调节剂,可与白细胞介素-6受体gp130 D1区域结合,拮抗白细胞介素-6的生物学作用。本研究探讨巴多昔芬治疗系统性红斑狼疮小鼠的疗效及对CD4^(+)T细胞亚群的影响。方法给予18周龄的MRL/lpr雌鼠巴多昔芬20 mg·(kg·d)^(-1)(n=6),对照组给予等量的辅料(n=6),4周后杀死小鼠,评估小鼠脾重指数(脾重/体重)、血清抗dsDNA抗体含量、24 h尿蛋白定量及肾脏病理损伤情况,流式细胞术检测脾脏CD4^(+)T细胞亚群。结果与对照组相比,巴多昔芬治疗1月显著降低系统性红斑狼疮小鼠脾重指数、24 h尿蛋白,对血清dsDNA抗体含量没有显著影响。肾脏病理进一步表明,巴多昔芬治疗显著改善系统性红斑狼疮小鼠肾小球增生性病变和肾小管间质炎性细胞浸润。巴多昔芬显著降低系统性红斑狼疮小鼠脾脏Th2细胞比例,提高Treg比例,对Th1和Th17亚群没有显著影响。结论巴多昔芬对系统性红斑狼疮小鼠和狼疮性肾炎有显著的治疗作用,并可调节Th2/Treg平衡。