缩宫素诱导的小鼠离体痛经模型的实验方法研究

目的对缩宫素诱发小鼠离体子宫收缩的药理模型的实验条件进行选择和优化。方法使用不同雌激素增加小鼠子宫敏感性，获取小鼠离体子宫，用0．5～10U·L^-1缩宫素诱导离体子宫收缩，观察改变各种处理条件后子宫收缩的变化，对4种离体子宫收缩的描述指标进行比较。结果缩宫素5U·^-1为最适剂量；腹腔注射3d10mg·kg^-1己烯雌酚或苯甲酸雌二醇均可使子宫产生较高的兴奋性；随着体重上升，离体子宫对缩宫素敏感性略有下降，但各组间差异无显著性；给予缩宫素后5～30min内子宫收缩较为恒定；在各项描述指标中平均收缩张力最为灵敏可靠；250μg·L^-1氯丙嗪、1mg·L^-1的维拉帕米及100μg·L^-1硝苯地平可完全抑制离体子宫的收缩。结论缩宫素诱发的离体小鼠子宫收缩模型快速、简便、灵敏，适合用于痛经治疗药物的筛选。

蜂王浆冻干粉对HepG2细胞葡萄糖消耗作用及对糖尿病小鼠降糖作用的实验研究

目的:研究蜂王浆冻干粉体内外降糖作用。方法:采用与人肝细胞表型相似的HepG2细胞,检测24h后培养液中葡萄糖的消耗量,用MTT法监测细胞增殖的情况;以四氧嘧啶造成小鼠糖尿病模型,观察蜂王浆对糖尿病模型小鼠的降糖作用。结论:蜂王浆冻干粉可使高糖状态下HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加,对胰岛素刺激的HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加有协同作用;能降低四氧嘧啶所致糖尿病小鼠的血糖。

泻肺平喘灵抑制肥大细胞脱颗粒的实验研究

目的:观察研究泻肺平喘灵对大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒反应的抑制作用。方法:50只大鼠随机分为5组,分别接受泻肺平喘灵不同剂量和异丙肾上腺素及生理盐水,然后接受天花粉蛋白处理,最后观察大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒反应情况。结果:泻肺平喘灵高中剂量组能够抑制大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒反应(P<0.001P<0.01),而低剂量组则无此作用(P>0.05)。结论:抑制肥大细胞脱颗粒反应是泻肺平喘灵治疗小儿哮喘的主要作用机理之一。

金银花及其有机酸类化合物的体外抗血小板聚集作用

目的:观察金银花及其有机酸类化合物的体外抗血小板聚集作用及作用强度。方法:应用比浊法测定金银花及其单体有机酸类化合物的体外抗ADP诱导的血小板聚集作用,通过系列浓度,用Logit法计算50%聚集抑制浓度(IC50)。结果:金银花水提物有抗ADP诱导的血小板聚集作用,其IC50值为0.028g.mL-1,其含有的有机酸类化合物绿原酸的同分异构体(2个)、咖啡酸、异绿原酸类(3个)IC50分别为0.028 6,1.707,2.411,0.026,0.328,0.539g.L-1。结论:金银花及其有机酸类化合物绿原酸的同分异构体、咖啡酸、异绿原酸类均具有较强的抗血小板聚集作用。

血小板细胞膜固相色谱法的建立及其对丹参效应物质的初步分析

目的 建立血小板细胞膜固相色谱法,并应用其分析丹参对血小板作用的活性成分。方法 应用血小板细胞膜作为固定相选择性地结合中药提取液中的活性成分,洗去未结合的其他成分后,使细胞膜靶点失活,被结合的活性成分从血小板细胞膜中释放出来,样品经固相萃取后用HPLC对这些成分进行解析。结果 丹参水提液的效应成分初步确定为6个,其中之一为原儿茶醛。结论 血小板细胞膜固相色谱法基本可以反映化合物与细胞膜生物靶点(受体、通道、酶等)的相互作用;该体系中的保留成分和其药理作用有显著的相关性。

中药复方对糖基化终末产物培养下的肾小球系膜细胞增殖以及系膜基质增生的影响

目的观察中药复方对糖基化终末产物(AGEs)培养下的肾小球系膜细胞增殖以及细胞外基质分泌的影响。方法MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖,碱解法检测细胞上清液中羟脯氨酸的含量。结果1×10-3、1×10-2、1×10-1mg/mL的中药复方提取液均能抑制AGEs培养下的鼠肾小球系膜细胞的增殖;能减少AGEs作用下的细胞上清液中羟脯氨酸含量,抑制系膜基质增生。结论中药复方能抑制AGEs引起的大鼠肾小球系膜细胞增殖以及系膜基质增生,提示此方可能通过阻止AGEs受体信号通路抑制糖尿病肾病的发生发展。

血小板细胞膜固相色谱法在脉络宁注射液效应物质分析中的应用

目的应用血小板细胞膜固相色谱法分析脉络宁注射液的活性血小板作用成分。方法应用血小板细胞膜作为固定相选择性地结合脉络宁注射液中的活性成分,排除未与血小板靶点结合的非活性成分后,使细胞膜靶点失活,被结合的活性成分从血小板膜上释放出来,样品经固相萃取处理后用HPLC对这些成分进行分析,利用制备色谱得到筛选出的活性成分。结果脉络宁注射液的效应成分初步确定为8个。结论血小板细胞膜固相色谱法可以进行抗血栓栓塞性疾病血管内给药制剂活性成分的筛选,同时反映了化合物与细胞膜生物靶点(受体、通道、酶等)的作用强度。

蒲黄增强生化汤精减方缩宫和止血作用的研究

目的 探讨蒲黄对生化汤精减方缩宫及止血作用的影响 ,阐明化瘀药在生化汤中的关键地位 ;方法 以Powerlab生理药理信号记录系统记录生化汤精减方、生化汤精减方加蒲黄和相应含药血清对离体子宫肌张力的影响 ,以小鼠断尾法考察生化汤精减方及精减方加蒲黄对凝血时间的影响 ;结果 蒲黄加入生化汤精减方 (当归、炮姜、甘草 )明显增强生化汤缩宫、止血作用 ;结论 化瘀药蒲黄可以明显提高生化汤精减方的缩宫、止血作用 ,提示蒲黄的加入可以使“瘀化生新”作用得到加强 ,化瘀药在生化汤的组方中起到关键性的作用。

桑白皮等中药提取物对胰岛素促进离体肝脏葡萄糖消耗的影响

目的利用大鼠离体肝脏灌流技术评价中药提取物在胰岛素存在时对离体肝组织消耗葡萄糖的影响。方法采用离体肝灌流技术,将中药提取物加入灌流液中,观察灌流液中谷丙转氨酶(ALT)及葡萄糖浓度的变化,用以评价中药提取物在胰岛素存在时对离体肝脏消耗葡萄糖的影响与肝脏损伤状况。结果受试的中药提取液在120 m in内对灌流液中谷丙转氨酶没有显著性影响,桑白皮、桑枝、桑寄生提取物能显著降低灌流液中葡萄糖的浓度。结论桑白皮、桑寄生、桑枝提取物在胰岛素存在时能增加离体肝脏葡萄糖的消耗。

中药对高糖作用下牛肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 研究分别具有益气、养阴、清热、活血功效的中药对高糖作用下牛肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响。方法 采用MTT比色法,观察黄芪、白芍、山楂、知母、当归对体外高糖培养的牛肾小球系膜细胞增殖的影响。结果 黄芪、白芍、山楂、知母对系膜细胞增殖有抑制作用,而当归无抑制作用。结论 养阴益气、清热活血中药是治疗糖尿病肾病的有效药物。

金银花中有机酸类成分抗血栓作用研究

目的:研究金银花中绿原酸、异绿原酸类化合物的体外抗血小板聚集作用及对人脐静脉内皮细胞过氧化损伤的影响。方法:从金银花水提醇沉液中提取制备绿原酸及其同分异构体、咖啡酸、异绿原酸等单体,研究其体外抗ADP诱导的血小板聚集作用和对H2O2损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用。结果:金银花中有机酸类化合物有抗ADP诱导的血小板聚集作用,绿原酸的2个同分异构体(2个)、咖啡酸、异绿原酸类(3个)IC50分别为0.0286、1.707、2.411、0.026、0.328、0.539mg/ml;对H2O2损伤咖啡酸和异绿原酸类成分均具有明显抗损伤作用,且有剂量依赖性,绿原酸虽然未观察到直接对抗作用,但具有预防性保护作用。结论:细胞膜固相色谱法研究体系中的保留成分和其药理作用有显著的相关性;金银花有机酸类成分在血栓性血管病治疗中具有潜在价值。

茵陈蒿汤合煎与分煎的成分比较研究

为比较茵陈蒿汤合煎与分煎的成分 ,利用反相高效液相法分析茵陈蒿汤与茵陈蒿、栀子、大黄的指纹图谱 ,考察中药复方中其化学成分的来源 ,并进行方法学论证。结果显示 ,茵陈蒿汤出峰共 4 7个 ,其中 19个峰来源于茵陈蒿 ,31个峰来源于大黄 ,6个峰来源于栀子。提示 :茵陈蒿汤95 %醇提物所含化学成分可能是茵陈蒿、大黄、栀子三味药材所含成分的加合 ,尚未发现原成分的缺失和新成分的形成。故认为茵陈蒿汤合煎与分煎 。

胡黄连总苷对高糖诱导肾小球系膜细胞氧化应激的保护作用

胡黄连总苷(total glucosides of Picrorhiza scrophulariiflora,TGP)是具有抗氧化作用的活性组分。由于氧化应激在糖尿病肾病发病中起关键作用,因此本研究考察了TGP对高糖培养下系膜细胞病变和氧化应激损伤的影响。通过高糖(25 mmol.L-1)刺激3周造成糖尿病系膜细胞损伤模型,分别以荧光素探针DCFH-DA,Rh123和Fluo-3/AM负载细胞,流式细胞仪法检测细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位(MMP)和[Ca2+]i,观察TGP对高糖引起系膜细胞肥大、细胞外基质分泌增加的保护作用。结果表明,高糖培养组系膜细胞肥大,胶原IV的分泌增加,细胞内ROS升高,MMP降低,[Ca2+]i升高,TGP能明显改善高糖诱导的系膜细胞肥大和降低胶原IV的分泌,降低细胞内ROS含量,提高MMP的水平和降低[Ca2+]i。因此TGP可以保护高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激损伤。

荆芥内酯类提取物对大鼠足跖汗腺及血液流变学的影响

目的 观察荆芥内酯类提取物对汗腺及血液流变学的影响。方法 大鼠腹腔注射给药 1h后 ,自踝关节处迅速取下双后足 ,10 %甲醛溶液固定 ,对足跖部汗腺腺泡上皮细胞在光镜下作形态学观察。大鼠血 (肝素抗凝 )用于血液流变学测定。结果 荆芥内酯类提取物能明显提高汗腺腺泡上皮细胞的空泡发生率、数密度和面密度 ,显著降低全血比粘度和红细胞的聚集性。

茵陈蒿汤对大鼠酒精性肝损伤的保护作用

目的 考察茵陈蒿汤提取物对大鼠酒精性肝损伤的保护作用。方法 不同浓度的酒精灌胃造成大鼠肝损伤模型 ,检测茵陈蒿汤对血清转氨酶及病理组织学的影响。结果 茵陈蒿汤提取物可降低酒精性肝损伤的大鼠ALT、AST的活性和肝脏系数。病理组织学检查显示其可改善小叶中心性纤维化、小叶中心性小灶性坏死及点状坏死 ,减少Mallory小体、嗜酸性变和溶解变性 ,以及中性粒细胞浸润。结论 茵陈蒿汤对大鼠酒精性肝损伤有良好的保护作用。

尿毒清颗粒改善链佐星-弗氏完全佐剂诱导的糖尿病肾病模型肾脏功能的研究

目的:观察尿毒清颗粒(大黄、黄芪、甘草、茯苓等)对链佐星-弗氏完全佐剂诱导的实验性糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏功能的改善作用及可能的机制。方法:以链佐星-弗氏完全佐剂辅以高脂饮食制作DN大鼠模型,检测尿液指标、血清生化指标,并进行病理、免疫组织化学分析。结果:尿毒清颗粒可明显减少DN大鼠的进食量,减少24h尿量,降低24h总蛋白和白蛋白排出量和红细胞和肾脏匀浆中山梨醇含量;降低血清中血糖、MDA、肌酐、尿素氮、糖基化终产物(AGEs)水平,提高SOD水平;提高肌酐清除率;明显降低系膜区增厚、基质增多等病理变化;减少肾小球IV型胶原的表达。结论:尿毒清颗粒明显改善DN模型的肾脏功能。

链佐星-弗氏完全佐剂制作大鼠糖尿病眼病并发症模型

目的 探讨建立适合于糖尿病眼病并发症及其治疗学研究的病理模型制作方法。方法 雄性Wistar大鼠ip链佐星3 0mg·kg- 1 ,d 2每只ip弗氏完全佐剂(CFA) 0 .1mL ,链佐星和CFA均每周1次,连续3周,血糖稳定升高后给予高脂饲料喂养。酶反应荧光法测定晶状体内山梨醇含量,视网膜铺片以OPTMAS软件分析内皮细胞/周细胞(E/C)比值及微血管密度,普通石蜡切片观察视网膜病理变化,电镜观察晶状体病理变化。结果 造模成功后血糖保持1 6mmol·L- 1 以上达1 2周,模型动物85 %出现明显白内障,晶状体内山梨醇含量明显升高,视网膜毛细血管密度显著增加,E/C比值升高,视网膜、晶状体病理变化明显。结论此模型与临床糖尿病眼病并发症有一定相似之处。

茵陈蒿汤与肝细胞结合成分保肝作用研究

目的:观察茵陈蒿汤与肝细胞结合成分对H2O2、CCl4诱导的L02细胞损伤的影响。方法:采用肝细胞固相色谱法得到的与肝细胞特异性结合的活性成分(样品A、B),用MTT法检测其对H2O2、CCl4诱导的L02细胞损伤的保护作用。结果:样品B能显著减轻H2O2、CCl4诱导的L02细胞损伤,样品A的作用不明显。结论:样品B可能是茵陈蒿汤保肝的物质基础之一,参与了直接保护肝细胞的作用,样品A的作为与肝细胞特异性结合成分,其直接保肝效果不明显。

周细胞条件培养液对视网膜色素上皮细胞、胶质细胞及巨噬细胞增殖的影响

目的观察体外培养的视网膜周细胞条件培养液对视网膜色素上皮细胞、巨噬细胞及胶质细胞生长的影响。方法MTT法测定不同稀释度的周细胞条件培养液对色素上皮细胞、巨噬细胞及胶质细胞生长的影响。结果随着周细胞条件培养液稀释度的增加,其对上述细胞的抑制生长作用亦越明显。结论周细胞的缺失将导致色素细胞、巨噬细胞及胶质细胞的增殖,细胞间相互作用对于糖尿病视网膜病变的发生和发展是非常重要的。

通窍活血汤对脑缺血大鼠脑组织中CGRP、ET、IL-1β、TNF-α的影响

目的:探讨通窍活血汤对脑缺血大鼠脑损伤的保护作用及机制。方法:采用大鼠颈总动脉注入混合血栓诱导剂(ADP、凝血酶、肾上腺素)所致脑血栓加双侧颈总动脉结扎所致脑缺血模型,观察脑缺血后通窍活血汤对脑组织中CGRP、ET、IL-1β、TNF-α的含量变化的影响。结果:通窍活血汤能降低脑缺血大鼠脑组织中ET、IL-1β、TNF-α的含量,增加CGRP的含量。结论:通窍活血汤对脑缺血大鼠脑损伤有保护作用,其保护作用与降低脑缺血后脑组织中异常升高的ET、IL-1β、TNF-α含量、增加脑组织中CGRP的含量有关。