14-3-3蛋白在神经系统疾病发病中的作用研究进展

14-3-3蛋白是神经细胞中含量最丰富的蛋白之一,参与调节细胞代谢、蛋白转运、信号转导、凋亡以及细胞周期等重要生理过程,在神经系统调控机制中扮演着重要而复杂的角色。14-3-3蛋白作为神经病理过程中的重要指标,可在多种神经系统疾病患者的脑脊液中检测到,如多发性硬化症、克雅氏病、艾滋病毒相关的神经退化、帕金森病、阿尔茨海默病、抑郁症等。14-3-3蛋白在上述疾病的发生、发展中具有重要作用,被认为是最有发展前景和研究价值的蛋白之一。

补肾助孕方对大鼠胚胎着床期子宫内膜及卵巢形态学的影响

目的:观察补肾助孕方对SD大鼠胚胎着床期子宫内膜及卵巢的形态学变化,探讨补肾助孕方治疗黄体功能不全性不孕症的机理。方法:将SD雌性大鼠随机分成空白组、模型组、西药组和中药补肾助孕方低、中、高剂量组,西药组及中药低、中、高剂量组均预防性用药2个性周期,然后按雌、雄比例为2:1配以同种雄鼠合笼,于妊娠第3d灌服米非司酮1mg/100g(10mg/kg),妊娠第5d颈总动脉取血3ml后处死,光镜观察子宫内膜及卵巢的形态,透射电镜观察卵巢黄体细胞的超微结构。化学发光法测定血清E2、P、LH、FSH的水平。结果:中药补肾助孕方中、高剂量组与模型组比,能明显促进胚胎着床期子宫内膜的生长及子宫内膜腺体的增生和发育;中药补肾助孕方中、高剂量组与模型组比,能明显促进胚胎着床期卵巢黄体细胞的发育。结论:中药补肾助孕方通过促进子宫内膜的生长、促进子宫内膜腺体的发育,使腺体和间质发育同步;促进卵巢黄体细胞的增生和改善黄体细胞的结构,从而提高子宫内膜的容受性、提高黄体功能,有利于胚胎着床和发育。

银杏内酯的抗血管性痴呆作用

目的:利用小鼠和大鼠血管性痴呆模型,研究银杏内酯(ginkgolindes,Gink)抗血管性痴呆的作用。方法:采用双侧颈总动脉不完全结扎和左侧大脑中动脉梗塞(MCAO)分别造成小鼠和大鼠血管性痴呆(Vascular Dementia,VD)模型。前者进行跳台和水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,后者进行Y型电迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力,并对脑组织乙酰胆碱酯酶(AChE)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)含量进行测定,采用免疫组化的方法检测海马组织中的神经元型一氧化氮合酶(nNOS)基因的表达情况。结果:小鼠和大鼠血管性痴呆模型组学习、记忆能力较相应的伪手术组均显著下降;与模型组相比,银杏内酯高剂量组的学习记忆能力均有显著提高。在大鼠血管性痴呆模型中,银杏内酯高、低剂量组脑组织的AChE活性有一定程度下降,ChAT活性显著升高,海马区nNOS阳性细胞表达明显减少。结论:银杏内酯具有促进血管性痴呆小鼠和大鼠学习记忆能力的作用,其机制可能与提高脑内胆碱能系统机能和抑制nNOS表达相关。

慢性皮质酮注射对小鼠抑郁样行为及脑糖原水平的影响

目的:探讨慢性皮质酮注射对小鼠抑郁样行为以及脑糖原水平的影响。方法:将40只雄性C57BL/6N小鼠随机分为正常对照组与模型组,模型组小鼠连续4周给予皮质酮皮下注射,构建慢性应激抑郁障碍小鼠模型。采用强迫游泳实验和旷场实验验证慢性应激模型的建立;放免法测定小鼠血清中皮质酮(CORT)水平;采用蛋白免疫印迹法检测海马突触素(SYP)和脑源性神经营养因子(BDNF)的蛋白表达水平;采用荧光间接测定法检测海马组织的糖原以及糖原合酶和糖原磷酸化酶的水平。结果:与正常对照组相比,模型组强迫游泳静止不动时间延长(P<0.01)、自主活动能力降低(P<0.01),表明慢性皮质酮注射诱导小鼠产生抑郁样行为。抑郁小鼠的皮质酮明显升高(P<0.01)。皮质酮注射降低海马SYP和BDNF的蛋白表达(P<0.01),同时海马组织糖原含量减少(P<0.05),糖原合酶的活性降低(P<0.05),而糖原磷酸化酶活性增加(P<0.05)。结论:慢性皮质酮注射引起的海马神经元损伤和诱导小鼠抑郁样行为,可能与皮质酮降低海马糖原水平有关。

利心冲剂对心力衰竭大鼠模型的氧化应激和凋亡相关基因的影响

目的探讨利心冲剂调控心力衰竭大鼠模型氧化应激抗细胞凋亡的分子机制。方法实验分组:正常组、模型组、卡托普利治疗组、利心冲剂低剂量组、利心冲剂高剂量组。腹腔注射阿霉素(ADR)5mg/kg,每5天1次,共3次,复制大鼠心力衰竭模型,左心室插管术测定血流动力学指标;血清学检测氧化指标SOD1、MDA;RealtimePCR检测氧化应激及凋亡相关基因SOD1、PGC-1α和Bcl-2、Bax。结果利心冲剂治疗组和模型组比较,形态学显示心肌细胞变性坏死明显减轻;左心室收缩内压显著升高;氧化应激相关指标SOD1、PGC-1α升高、MDA降低;凋亡相关基因Bcl-2升高、Bax/Bcl-2降低;均有显著性差异(P<0.05)。结论利心冲剂调控氧化应激相关基因SOD1、PGC-1α,降低凋亡相关基因Bax/Bcl-2表达,减轻心肌细胞凋亡,改善心脏收缩与舒张功能。

当归芍药散及其不同提取部位对离体培养大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响

目的探讨当归芍药散对痛经治疗的机理。方法运用体外培养技术进行小鼠卵巢颗粒细胞体外培养,将当归芍药散的不同提取方法所得提取物以2×10-4、2×10-5、2×10-6 g/ml 3个终浓度加入单独培养的大鼠卵巢颗粒细胞,通过MTT法观察药物对卵巢颗粒细胞生长的影响。结果①当归芍药散挥发油部位、水提部位以及醇提部位均具有显著促进大鼠卵巢颗粒细胞增殖的作用,并且具有显著的量效关系。②当归芍药散水提物大孔树脂醇洗脱部位在200μg提取物/ml剂量下30%、40%及80%醇洗脱部位显示较强的促进作用。③90%醇提取部位、石油醚部位、二氯甲烷部位以及乙酸乙酯部位作用较为突出。结论当归芍药散对离体培养的大鼠卵巢颗粒细胞增殖具有明显的促进作用,其治疗原发性痛经可能与其促进卵巢颗粒细胞生长效应相关。

长期注射皮质酮致慢性应激抑郁小鼠海马星形胶质细胞和突触结构可塑性的变化

目的 探讨长期皮质酮（Corticosterone,CORT）注射对小鼠海马星形胶质细胞和突触结构可塑性的影响.方法 将40只雄性C57BL/6N小鼠随机分为正常对照组与模型组,模型组小鼠给予连续四周的CORT皮下注射,构建慢性应激抑郁障碍小鼠模型;采用强迫悬尾和糖水偏好实验验证慢性应激模型的建立,放射免疫法测定小鼠血清中CORT水平;采用蛋白免疫印迹法测定突触囊泡蛋白（Synaptophysin,SYP）和突触后致密物-95（Postsynaptie density-95,PSD-95）的蛋白表达水平;采用免疫细胞化学和定量体视学技术,三维测量胶质纤维酸性蛋白阳性星形胶质细胞体积和细胞突起长度.结果 模型组小鼠强迫悬尾不动时间[（137.95±6.22）s]较对照组[（114.05±4.12）s]明显延长（P＜0.01）,模型组糖水偏好[（62.42±6.75）％]较对照组[（86.52±5.08）％]明显降低（P＜0.01）;抑郁小鼠的血清CORT水平[（11.48±0.62） ng/ml]比对照组[（1.11±0.05） ng/ml]明显增高（P＜0.01）;模型组海马SYP表达水平和PSD-95表达水平均比对照组[（0.54±0.04）vs（0.99±0.14）,（0.57±0.07） vs（1.03±0.10）;均P＜0.叭）明显降低;模型组星形胶质细胞体积[（132.04±9.23） μm3]和细胞突起总长度[（1.39±0.05）×107 μm],低于对照组[（168.49±9.01） μm3],[（1.77±0.10）×107 μm],差异具有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）.并且星形胶质细胞突起总长度缩短与海马SYP和PSD-95的蛋白表达减少呈正相关（r=0.660,P＜0.01;r=0.614,P＜0.01）.结论 长期CORT注射诱导小鼠抑郁样行为,可能与CORT缩短星形胶质细胞突起长度而致突触结构可塑性有关.

利心冲剂对心衰大鼠模型的治疗作用和毒理学研究

目的:研究利心冲剂对心衰大鼠治疗作用及药物毒理学。方法:实验分组:正常对照组、模型组、利心冲剂低剂量组、利心冲剂高剂量组、卡托普利阳性药组。腹腔注射阿霉素(ADR)5mg·kg-1,每5d1次,共3次,复制大鼠心衰模型,左心室插管术测定血流动力学指标,HE病理染色;毒理学研究测定大鼠LD50和最大耐受量,另予利心冲剂4,8,16g·(100g)-13个剂量组和空白对照组,连续8周口服给药,测定大鼠体重,于停药时及停药后7d进行血液常规、肝功能、肾功能检查,实验结束处死动物,计算脏器系数,进行病理学检验。结果:利心冲剂治疗组和模型组比较,左心室收缩内压显著升高,形态学显示心肌细胞变性坏死明显减轻;毒性试验表明,以成人口服剂量的60倍经口灌胃,未见大鼠明显毒性反应;长期应用对大鼠体重、血常规、肝功能、肾功能和脏器系数、病理均无影响。结论:利心冲剂能改善心脏功能,具有较高的安全性。

利心冲剂对慢性心力衰竭模型大鼠Bcl-2、P38丝裂原活化蛋白激酶水平的影响

目的研究利心冲剂对慢性心力衰竭（心衰）模型大鼠Bcl-2、P38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）水平的影响。方法50只大鼠随机分为空白对照组、心衰模型对照组、卡托普利治疗组、利心冲剂低剂量组、利心冲剂高剂量组等，每组10只，除空白对照组外其余四组均腹腔注射阿霉素（ADR）5mg／kg，制成大鼠心衰模型，采用Real-timePCR检测B型利钠肽（BNP）、凋亡相关基因Bcl-2以及免疫组织化学检测P38MAPK的表达，观察五组间差异。结果利心冲剂治疗组和心衰模型对照组比较，BNP水平降低、Bcl-2表达升高，差异均有统计学意义（P〈0．01）；ADR作用后P38MAPK大量表达，利心冲剂治疗后P38MAPK表达明显减少，以高剂量最为明显。结论利心冲剂通过抑制1938MAPK信号通路，凋控Bcl-2表达，从而抑制心肌细胞凋亡，改善心功能。