中药复方对糖基化终末产物培养下的肾小球系膜细胞增殖以及系膜基质增生的影响

目的观察中药复方对糖基化终末产物(AGEs)培养下的肾小球系膜细胞增殖以及细胞外基质分泌的影响。方法MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖,碱解法检测细胞上清液中羟脯氨酸的含量。结果1×10-3、1×10-2、1×10-1mg/mL的中药复方提取液均能抑制AGEs培养下的鼠肾小球系膜细胞的增殖;能减少AGEs作用下的细胞上清液中羟脯氨酸含量,抑制系膜基质增生。结论中药复方能抑制AGEs引起的大鼠肾小球系膜细胞增殖以及系膜基质增生,提示此方可能通过阻止AGEs受体信号通路抑制糖尿病肾病的发生发展。

缩宫素诱导的小鼠离体痛经模型的实验方法研究

目的对缩宫素诱发小鼠离体子宫收缩的药理模型的实验条件进行选择和优化。方法使用不同雌激素增加小鼠子宫敏感性，获取小鼠离体子宫，用0．5～10U·L^-1缩宫素诱导离体子宫收缩，观察改变各种处理条件后子宫收缩的变化，对4种离体子宫收缩的描述指标进行比较。结果缩宫素5U·^-1为最适剂量；腹腔注射3d10mg·kg^-1己烯雌酚或苯甲酸雌二醇均可使子宫产生较高的兴奋性；随着体重上升，离体子宫对缩宫素敏感性略有下降，但各组间差异无显著性；给予缩宫素后5～30min内子宫收缩较为恒定；在各项描述指标中平均收缩张力最为灵敏可靠；250μg·L^-1氯丙嗪、1mg·L^-1的维拉帕米及100μg·L^-1硝苯地平可完全抑制离体子宫的收缩。结论缩宫素诱发的离体小鼠子宫收缩模型快速、简便、灵敏，适合用于痛经治疗药物的筛选。

桑白皮等中药提取物对胰岛素促进离体肝脏葡萄糖消耗的影响

目的利用大鼠离体肝脏灌流技术评价中药提取物在胰岛素存在时对离体肝组织消耗葡萄糖的影响。方法采用离体肝灌流技术,将中药提取物加入灌流液中,观察灌流液中谷丙转氨酶(ALT)及葡萄糖浓度的变化,用以评价中药提取物在胰岛素存在时对离体肝脏消耗葡萄糖的影响与肝脏损伤状况。结果受试的中药提取液在120 m in内对灌流液中谷丙转氨酶没有显著性影响,桑白皮、桑枝、桑寄生提取物能显著降低灌流液中葡萄糖的浓度。结论桑白皮、桑寄生、桑枝提取物在胰岛素存在时能增加离体肝脏葡萄糖的消耗。

中药对高糖作用下牛肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 研究分别具有益气、养阴、清热、活血功效的中药对高糖作用下牛肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响。方法 采用MTT比色法,观察黄芪、白芍、山楂、知母、当归对体外高糖培养的牛肾小球系膜细胞增殖的影响。结果 黄芪、白芍、山楂、知母对系膜细胞增殖有抑制作用,而当归无抑制作用。结论 养阴益气、清热活血中药是治疗糖尿病肾病的有效药物。

蜂王浆冻干粉对HepG2细胞葡萄糖消耗作用及对糖尿病小鼠降糖作用的实验研究

目的:研究蜂王浆冻干粉体内外降糖作用。方法:采用与人肝细胞表型相似的HepG2细胞,检测24h后培养液中葡萄糖的消耗量,用MTT法监测细胞增殖的情况;以四氧嘧啶造成小鼠糖尿病模型,观察蜂王浆对糖尿病模型小鼠的降糖作用。结论:蜂王浆冻干粉可使高糖状态下HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加,对胰岛素刺激的HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加有协同作用;能降低四氧嘧啶所致糖尿病小鼠的血糖。

山茱萸环烯醚萜总苷对实验性糖尿病肾病变的保护作用

目的 研究山茱萸环烯醚萜总苷 (HXMTZG)对链脲佐菌素 (STZ)诱导的大鼠糖尿病肾病变 (DN)的保护作用。方法大鼠ipSTZ 6 0mg/kg ,1周后血糖值高于 16 .7mol/L者则纳为糖尿病大鼠。将糖尿病大鼠随机分为模型组、氨基胍 (AG)组 (0 .1g/kg ,ig)和HXMTZG组 (0 .5、1.0g/kg ,ig) ,同期另设正常组 ,各组连续灌胃给药 12周。实验结束后测定血糖和尿微量白蛋白 (UMA) ,取肾脏经HE和PAS糖原染色后进行光镜检查。结果 模型组大鼠血糖、UMA排出量均高于正常组 ,HXMTZG及AG对血糖基本无降低作用 ,但两者均能显著降低UMA的排出 (P <0 .0 1) ;光镜检查显示模型组呈现早 -中期糖尿病肾病变 ,而HXMTZG及AG组均能不同程度地减轻肾小球系膜增生、GBM增厚、糖原沉积及AE透明变等。结论HXMTZG能延缓实验性DN大鼠的发生与发展 。

抗氧化中药对蛋白质非酶糖基化反应的影响

目的 观察中药胡黄连和贯叶连翘对体外蛋白质非酶糖基化反应的影响 ,评价其抗氧化作用与非酶糖基化反应的关系。分析它们治疗糖尿病并发症的可能性。方法 将牛血清白蛋白和葡萄糖在体外共同孵育建立体外蛋白非酶糖基化反应体系 ,并将反应液分成对照组和不同的药物浓度组 ,在 37℃孵厢中孵育 6 0d ,以激发波长 (EX) 370nm/发射波长(EM) 4 4 0nm测定各组荧光值。结果 不同浓度的胡黄连和贯叶连翘以剂量依赖方式明显抑制AGEs的形成。结论 胡黄连和贯叶连翘可以抑制蛋白质的非酶糖基化 ,可能与其抗氧化作用有关。

细胞膜生物色谱法在中药研究中的应用

中药的效应—物质基础研究一直是中药研究重点和难点,细胞膜生物色谱技术近年来在中药中应用逐渐受到关注,本文对细胞膜生物色谱法的原理、特点、应用现状进行了阐述,对其在中药研究的优势、存在的问题及对策、应用前景进行了分析和展望。通过该方法在中药效应成分分析中的不断应用,以及在实验过程的对该方法不断的完善和优化,细胞膜生物色谱法一定会在中药效应成分的研究中发挥重要的作用。

中药水提取液对荧光法测定醛糖还原酶活性的干扰

目的 探讨中药水提液采用荧光法检测醛糖还原酶抑制作用的可行性。方法 激发光 36 7nm ,发射光 410～ 470nm范围内扫描 13种中药水提物荧光强度。结果 所观察 13种中药含有较强的荧光物质 ,干扰体外酶反应荧光测定法检测醛糖还原酶活性的方法。结论 若水提液不适于采用此种筛选方法 ,可考察有机溶剂是否有干扰以确定实验条件或选择其它筛选方法。

清热中药对高糖培养下肾小球系膜细胞增殖的影响

为研究清热中药治疗糖尿病肾病的作用机理,验证中医理论对糖尿病发病机制的认识,并为临床用药提供依据。采用MTT比色法,观察具有清热作用的中药知母、生地、胡黄连和地骨皮水提物对体外高糖条件下培养的牛肾小球系膜细胞增殖的影响。结果显示,知母、生地和胡黄连对系膜细胞增殖有抑制作用,而地骨皮无明显作用。提示清热中药可能通过抑制系膜细胞的增殖从而对糖尿病肾病的发生产生一定的影响。

适用于中药醛糖还原酶抑制剂高通量筛选的细胞模型的建立

目的:建立一种适合中药醛糖还原酶抑制剂高通量筛选的细胞模型,以避免中药对传统离体筛选方法的干扰。方法:以视网膜周细胞、肾小球系膜细胞为研究对象,确定最佳孵育条件,并建立酶促微量反应法测定山梨醇含量,两者联动,建立细胞模型。结果:细胞孵育体系的最佳反应条件为30mmol·L-1葡萄糖孵育4h;酶促微量反应测定山梨醇含量的精密度、重现性良好,山梨醇浓度变化与荧光强度变化呈线性正相关,山梨醇浓度在6.25×10-6～2.5×10-4mol·L-1范围内线性关系良好。结论:该细胞模型能够排除中药对酶法测定醛糖还原酶活性的干扰,模拟体内的反应情况,使应用该模型进行的醛糖还原酶抑制剂筛选更具针对性,并适用于中药醛糖还原酶抑制剂的高通量筛选。

细胞膜固相色谱及其在中药效应-物质基础研究中的应用

中药效应-物质基础的探讨较为困难,需要建立当代生物医学与中医学理论能够兼容的方法学对其进行解析。本实验室在国家科技部的资助下,对这一问题进行了探索,建立了细胞膜固相色谱技术。这一技术是基于细胞与内外环境的信息传递,主要通过包括药物在内的介质与细胞膜上的受体、离子通道、酶等各种信息靶点结合而实现的。我们利用这一原理,将细胞膜与中药提取液共温育,用色谱分析法解析被细胞膜特异性结合的成分。所建立的细胞膜固相色谱与一般生物色谱不同点在于:将细胞与中药提取物对话过程与色谱分析过程分开,分别满足各个过程的实验条件。这一技术在当归、丹参及脉络宁注射液效应-物质基础分析的研究中显示出应用前景。

泻肺平喘灵抑制肥大细胞脱颗粒的实验研究

目的:观察研究泻肺平喘灵对大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒反应的抑制作用。方法:50只大鼠随机分为5组,分别接受泻肺平喘灵不同剂量和异丙肾上腺素及生理盐水,然后接受天花粉蛋白处理,最后观察大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒反应情况。结果:泻肺平喘灵高中剂量组能够抑制大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒反应(P<0.001P<0.01),而低剂量组则无此作用(P>0.05)。结论:抑制肥大细胞脱颗粒反应是泻肺平喘灵治疗小儿哮喘的主要作用机理之一。

生化汤提取物对离体及产后子宫活动的影响

目的 观察生化汤提取物对小鼠离体及产后家兔子宫收缩的影响 ,探讨其效应及效应特征。方法 用PowerLab 8s生命信号记录仪采集离体及产后在位子宫的收缩幅度及频率。结果 生化汤提取物 6× 10 - 6 ～ 6× 10 - 1 mg mL可收缩小鼠离体子宫 ,ED50 =0 .4 4mg mL ;增加产后麻醉家兔子宫的张力 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。给药后 6 0～ 80min达到效应高峰 ,而对产后子宫收缩频率无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论 提示生化汤提取物具有增加宫缩作用 ,药效温和持久 。

金银花及其有机酸类化合物的体外抗血小板聚集作用

目的:观察金银花及其有机酸类化合物的体外抗血小板聚集作用及作用强度。方法:应用比浊法测定金银花及其单体有机酸类化合物的体外抗ADP诱导的血小板聚集作用,通过系列浓度,用Logit法计算50%聚集抑制浓度(IC50)。结果:金银花水提物有抗ADP诱导的血小板聚集作用,其IC50值为0.028g.mL-1,其含有的有机酸类化合物绿原酸的同分异构体(2个)、咖啡酸、异绿原酸类(3个)IC50分别为0.028 6,1.707,2.411,0.026,0.328,0.539g.L-1。结论:金银花及其有机酸类化合物绿原酸的同分异构体、咖啡酸、异绿原酸类均具有较强的抗血小板聚集作用。

原发性痛经研究进展

原发性痛经是发病率较高的妇科常见疾病 ,近年来国内外对其研究不断深入 。

血小板细胞膜固相色谱法的建立及其对丹参效应物质的初步分析

目的 建立血小板细胞膜固相色谱法,并应用其分析丹参对血小板作用的活性成分。方法 应用血小板细胞膜作为固定相选择性地结合中药提取液中的活性成分,洗去未结合的其他成分后,使细胞膜靶点失活,被结合的活性成分从血小板细胞膜中释放出来,样品经固相萃取后用HPLC对这些成分进行解析。结果 丹参水提液的效应成分初步确定为6个,其中之一为原儿茶醛。结论 血小板细胞膜固相色谱法基本可以反映化合物与细胞膜生物靶点(受体、通道、酶等)的相互作用;该体系中的保留成分和其药理作用有显著的相关性。

生化汤提取物对孕末期家兔子宫肌电活动的影响

目的 :观察生化汤提取物对孕末期家兔子宫体及子宫颈肌电活动的影响 ,探讨其效应及作用方式。方法 :用PowerLab/8s生命信号记录仪采集乌拉坦麻醉状态下的怀孕末期家兔子宫体及子宫颈平滑肌肌电活动。结果 :生化汤提取物 4 0mg·kg-1能增加怀孕末期家兔子宫体的平滑肌动作电位脉冲的发放 (P <0 .0 1) ,对其子宫颈平滑肌肌电活动则无显著的影响 (P >0 .0 5 )。结论 :提示生化汤提取物具有增加宫体肌电活动作用 ,可以发挥催产、止血的效应 ;对宫颈的电活动无明显影响 ,表明它不干预产道舒缩 ,有利于胎儿的娩出。

血小板细胞膜固相色谱法在脉络宁注射液效应物质分析中的应用

目的应用血小板细胞膜固相色谱法分析脉络宁注射液的活性血小板作用成分。方法应用血小板细胞膜作为固定相选择性地结合脉络宁注射液中的活性成分,排除未与血小板靶点结合的非活性成分后,使细胞膜靶点失活,被结合的活性成分从血小板膜上释放出来,样品经固相萃取处理后用HPLC对这些成分进行分析,利用制备色谱得到筛选出的活性成分。结果脉络宁注射液的效应成分初步确定为8个。结论血小板细胞膜固相色谱法可以进行抗血栓栓塞性疾病血管内给药制剂活性成分的筛选,同时反映了化合物与细胞膜生物靶点(受体、通道、酶等)的作用强度。

蒲黄增强生化汤精减方缩宫和止血作用的研究

目的 探讨蒲黄对生化汤精减方缩宫及止血作用的影响 ,阐明化瘀药在生化汤中的关键地位 ;方法 以Powerlab生理药理信号记录系统记录生化汤精减方、生化汤精减方加蒲黄和相应含药血清对离体子宫肌张力的影响 ,以小鼠断尾法考察生化汤精减方及精减方加蒲黄对凝血时间的影响 ;结果 蒲黄加入生化汤精减方 (当归、炮姜、甘草 )明显增强生化汤缩宫、止血作用 ;结论 化瘀药蒲黄可以明显提高生化汤精减方的缩宫、止血作用 ,提示蒲黄的加入可以使“瘀化生新”作用得到加强 ,化瘀药在生化汤的组方中起到关键性的作用。