补肾活血方中单体成分的体外炎性抑制作用研究

本文采用LC-MS技术进行定性分析,确定补肾活血方水提液中存在芍药苷、阿魏酸、白藜芦醇、蛇床子素及补骨脂素等单体化合物。利用酶联免疫法(ELISA)测定试药对模型细胞释放TNF-α、IL-6及NO的抑制作用。与空白组比较,模型组TNF-α、IL-6、NO含量明显升高(P<0.0);与模型组比较,阿魏酸、白藜芦醇、补骨脂素及复方水提部位在100μg/m L,以及蛇床子素在20、100μg/m L均对TNF-α的释放具有显著的抑制(P<0.01);阿魏酸及补骨脂素在100μg/m L,白藜芦醇及蛇床子素在20、100μg/m L均对IL-6水平具有显著的抑制(P<0.01);芍药苷及复方水提部位在100μg/m L,阿魏酸、白藜芦醇、蛇床子素及补骨脂素在20、100μg/m L均对NO的释放具有显著抑制(P<0.01)。结果表明单体对炎性因子的释放抑制作用总体上强于复方水提部位,提示补肾活血方的治疗骨关节炎活性可能是通过抑制炎症介质释放,降低TNF-α、IL-6、NO等含量发挥作用,这对验证复方药效活性,探究效应物质基础具有重要意义。

小檗碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制作用及其分子机制研究

本研究的目的是为了探索小檗碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响以及阐明小檗碱促乳腺癌细胞凋亡的分子机制。在实验过程中,我们通过MTT检测小檗碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用,采用Annexin-V/PI染色定量考察小檗碱对肿瘤细胞凋亡的影响,运用Western Blot实验检测肿瘤相关通路蛋白表达来进行研究。实验表明小檗碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖具有抑制作用,使细胞中自噬因子Beclin 1表达增加,诱导细胞自噬泡的形成,导致肿瘤细胞发生凋亡。综上说明小檗碱是通过抑制AKT-mTOR通路,诱导MDA-MB-231细胞的自噬以及凋亡,从而发挥抗肿瘤作用。

转化医学视角下的中药复方物质基础研究思路与建议

物质基础研究是中药复方研究的重要内容,是实现中医药基础研究与临床应用之间双向转化的关键环节。论文简述了当前中药复方物质基础研究的基本情况和存在的问题,提出以转化医学视角,开展中药复方物质基础研究的思路与方法,要注重中医药理论创新及药物创制;要统筹好给药前以及给药后两个环节;还要充分借助现代仪器分析技术和生命科学手段。

补肾活血方中4种有效成分对炎性因子释放抑制活性研究

目的:观察补肾活血方中异欧前胡素、齐墩果酸、蜕皮甾酮、虎杖苷等4种有效成分对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及一氧化氮(NO)等炎性介质释放浓度的影响作用,探讨复方治疗骨关节炎的初步机制。方法:选取补肾活血方水提液中存在的具有潜在治疗骨关节炎活性的异欧前胡素等4种化合物,采用体外脂多糖(LPS)刺激的RAW264.74小鼠巨噬细胞为模型,利用酶联免疫法(ELISA)测定试药对模型细胞释放TNF-α、IL-6及NO的抑制作用。结果:异欧前胡素在100μg/m L,对TNF-α的释放有显著抑制作用(P<0.01);异欧前胡素在20、100μg/m L,虎杖苷在100μg/m L对IL-6水平有显著抑制(P<0.01);异欧前胡素与齐墩果酸在20、100μg/m L,蜕皮甾酮与虎杖苷在100μg/m L,对NO的释放具有显著抑制(P<0.01)。结论:补肾活血方的治疗骨关节炎活性可能是通过抑制炎症介质释放,降低TNF-α、IL-6、NO等含量发挥作用,这对验证复方药效活性,探究效应物质基础具有重要意义。

消癌解毒方中有效成分在小鼠体内的组织分布研究

目的：使用液质联用方法对消癌解毒方水提液中芦丁、野黄芩苷、半枝莲碱B等在小鼠组织中的分布进行研究。方法：以2-氰基-3,12-二氧代齐墩果烷-1,9（11）-二烯-2-酸甲酯（CDDO-Me）作为内标,以甲醇对组织中蛋白进行沉淀,通过液质联用技术对芦丁、野黄芩苷和半枝莲碱B含量进行测定,使用Waters ACQUITY UPLC BEH-C18色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7μm）,0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱,正、负离子模式检测,检测离子质荷比（m/z）芦丁609.2、野黄芩苷463.3、半枝莲碱B558.4和CDDO-Me 506.7。结果：在小鼠肝脏、心脏、脾脏、肺脏、肾脏等组织中,芦丁、野黄芩苷、半枝莲碱B在测定的线性范围内线性关系良好（r≥0.9913）;方法的精密度和稳定性RSD小于均15%;回收率为89.89%~113.35%,RSD值小于15%,符合化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则。芦丁等3种成分在不同组织中分布情况各不相同,芦丁主要分布在肝脏和肾脏,其次为心脏和脾脏,肺脏中分布最少;野黄芩苷只在肺脏中检出;半枝莲碱B的分布趋势为肝脏、肾脏和心脏中,肺脏和脾脏中分布较少。结论：本方法能够方便、灵敏、准确地对小鼠组织中的芦丁、野黄芩苷、半枝莲碱B的含量进行测定。

基于HPLC-ESI-Q-TOF-MS技术分析白花蛇舌草二氯甲烷部位化学成分

目的:通过HPLC-ESI-Q-TOF-MS技术对白花蛇舌草二氯甲烷萃取部位中的化学成分进行定性分析。方法:采用LC-MS/MS,C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱,使用ESI离子源,正离子模式下采集数据。通过质谱信息及元素组成,与相关文献数据对照分析,对白花蛇舌草二氯甲烷萃取部位进行成分鉴定。结果:共鉴定出12个化合物,分别为阿魏酸、对羟基香豆酸、葡萄糖乙苷、对甲氧基桂皮酸、quercetin-3-O-[2-O-(6-O-E-feruloyl)-β-D-glucopyranosyl]-β-D-glucopyranoside、kaempferol-3-O-[2-O-(6-O-Eferuloyl)-β-D-glucopyranosyl]-β-D-galactopyranoside、2-羟基-1-甲氧基蒽醌、2-甲基-3-羟基蒽醌、aurantianmide acetate、β-谷甾醇、豆甾醇、豆甾醇-5,22-二烯-3β,7β-二醇。结论:采用LC-MS/MS方法同时鉴定白花蛇舌草中多种化学成分,方法简单,快速,结果准确,为进一步阐明白花蛇舌草的药效物质基础提供证据。

消癌解毒方水提液化学成分分析及活性成分含量测定

目的:建立HPLC-ESI-Q-TOF-MS同时鉴定消癌解毒方水提液中化学成分的方法,并使用UPLC-TQMS技术同时测定其中芦丁和半枝莲碱B含量。方法:ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)用于成分定性分析,流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸溶液(B)梯度洗脱,正离子模式下采集数据。定量分析使用Waters ACQUITY UPLC BEH-C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7μm),0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱,正、负离子检测模式。结果:消癌解毒方水提液中鉴定出20种化学成分,并同时测定其中芦丁和半枝莲碱B等成分含量,2种成分在测定的线性范围内线性关系良好,R2>0.9995,加样回收率98.88%、98.01%(RSD<3%)。结论:该方法能够快速、简便、高效地对消癌解毒方中化学成分进行定性、定量分析。

液质联用分析芦丁、野黄芩苷和半枝莲碱B在小鼠灌胃给药后体内的组织分布

目的:建立UPLC-MS同时测定小鼠组织中芦丁、野黄芩苷和半枝莲碱B的分析方法,并对该3种成分在小鼠体内的组织分布进行研究。方法:以2-氰基-3,12-二氧代齐墩果烷^(-1),9(11)-二烯-28-酸甲酯(CDDO-Me)为内标,通过甲醇沉淀组织样品蛋白,使用LC-MS技术进行定量分析,采用ACQUITY UPLC BEH-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,正、负离子检测模式,检测离子质荷比(m/z)为芦丁609.2、野黄芩苷463.3、半枝莲碱B 558.4和CDDO-Me 506.7。结果:在小鼠肝脏、心脏、脾脏、肺脏、肾脏等组织中,芦丁、野黄芩苷、半枝莲碱B分别在0.005 0~0.160 0、0.004 0~0.133 0、0.0033~0.106 7μg·m L^(-1)的线性范围内线性关系良好(r≥0.9913);方法的精密度和稳定性RSD均小于15%;回收率为90.0%~98.4%,RSD小于15%,符合化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则。芦丁等3个成分在小鼠体内分布比较广泛,其中在肝脏和肾脏中分布较多,在肺脏中分布含量最低。结论:本方法经方法学验证,可对小鼠组织中的芦丁、野黄芩苷、半枝莲碱B含量进行测定;在用于小鼠体内化学成分的组织分布研究中,芦丁在肾脏中含量多、脾脏中最少,野黄芩苷在心脏中含量最多、肺脏中最少,半枝莲碱B在肝脏中含量最多、肾脏中最少。