微小RNA-23靶向线粒体分裂蛋白1调控炎症反应和氧化应激保护脓毒症肾小管上皮细胞损伤

目的探讨微小RNA-23(microRNA-23,miR-23)和线粒体分裂蛋白1(fission protein 1,FIS1)在脓毒症肾小管上皮细胞中的作用关系以及miR-23靶向FIS1对细胞炎症反应和氧化应激的调控。方法体外培养人肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2),用脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)诱导建立脓毒症模型;利用双荧光素酶报告基因验证miR-23和FIS1的相互作用。将HK-2细胞采用随机数字表法随机分组,用miR-23的模拟物/抑制物和FIS1的真核表达载体/小干扰RNA单独或联合处理,细胞计数试剂检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒检测细胞MDA水平,酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)1β、IL-6和IL-10水平。结果LPS诱导的HK-2细胞miR-23 mRNA表达量为对照组的(0.60±0.12)倍(P<0.05),FIS1 mRNA表达量为对照组的(2.16±0.21)倍(P<0.05),FISI蛋白表达水平是对照组的(2.69±0.28)倍(P<0.05)。miR-23可以与FIS1的3'-UTR区形成互补结合,负向调控FIS1。miR-23 mimic组的TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.021±0.003)、(0.0310±0.007)和(0.017±0.006)ng/ml,FIS1 siRNA组的TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.015±0.004)、(0.043±0.007)和(0.020±0.008)ng/ml,均低于空白对照组(P<0.05),两组的IL-10分别为(0.325±0.011)和(0.376±0.018)ng/ml,高于空白对照组(P<0.05)。miR-23 inhibitor组的TNF-α和IL-6分别为(0.117±0.015)和(0.096±0.007)ng/ml,pcD-NA3.1-FIS1组TNF-α和IL-6分别为(0.168±0.024)和(0.147±0.030)ng/ml,均高于空白对照组(P均<0.05),miR-23 inhibitor组和pcDNA3.1-FIS1组的IL-10分别为(0.149±0.012)和(0.121±0.024)ng/ml,均低于空白对照组(P<0.05)。miR-23 mimic+pcDNA3.1-FIS1组TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.060±0.010)、(0.084±0.009)和(0.048±0.008)ng/ml,均高于miR-23 mimic组的(0.021±0.003)、(0.0310±0.007)和(0.017±0.006)ng/ml(P<0.05),IL-10为(0.149±0.025)ng/ml,低于miR-23 mimic组的(0.325±0.011)ng/ml(P<0.05)。miR-23 inhibitor+FIS1 siRNA组TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.049±0.007)、(0.056±0.008)和(0.037±0.006)ng/ml,均低于miR-23 inhibitor组的(0.117±0.015)、(0.085±0.015)和(0.096±0.007)ng/ml(P<0.05),IL-10为(0.325±0.027)ng/ml,高于miR-23 inhibitor组的(0.149±0.012)ng/ml(P<0.05)。MiR-23 mimic组和FIS1 siRNA组ROS分别为(1328±84)和(1300±70),均低于空白对照组(P<0.05),miR-23 inhibitor组和pcDNA3.1-FIS1组ROS分别为(1825±80)和(1930±105),均高于空白对照组(P<0.05)。miR-23 mimic+pcDNA3.1-FIS1组ROS为(1538±96),高于miR-23 mimic组的(1328±84)(P<0.05);miR-23 inhibitor+FIS1 siRNA组ROS为(1490±70),低于miR-23 inhibitor组的(1825±80)(P<0.05)。MiR-23 mimic组和FIS1 siRNA组MDA分别为(17.34±2.18)μmol/L和(12.05±2.47)μmol/L,均低于空白对照组(P<0.05);miR-23 inhibitor组和pcDNA3.1-FIS1组MDA分别为(52.20±7.48)μmol/L和(46.25±6.50)μmol/L,均高于空白对照组(P<0.05);miR-23 mimic+pcDNA3.1-FIS1组MDA为(35.44±3.03)μmol/L,高于miR-23 mimic组的(17.34±2.18)μmol/L(P<0.05);miR-23 inhibitor+FIS1 siRNA组MDA为(40.26±4.87)μmol/L,低于miR-23 inhibitor组的(52.20±7.48)μmol/L(P<0.05)。miR-23 mimic组和FIS1 siRNA组细胞增殖率分别为(183±14)%和(171±11)%,均高于空白对照组(P<0.05),两组凋亡率分别为(7.89±1.21)%和(11.22±2.98)%,均低于空白对照组(P<0.05);miR-23 inhibitor组和pcDNA3.1-FIS1组细胞增殖率分别为(134±10)%和(127±9)%,均低于空白对照组(P<0.05),凋亡率分别为(23.22±2.54)%和(28.15±3.12)%,均高于空白对照组(P<0.05);miR-23 mimic+pcDNA3.1-FIS1组细胞增殖率为(148±12)%,低于miR-23 mimic组的(183±14)%(P<0.05),凋亡率为(17.02±2.29)%,高于miR-23 mimic组的(7.89±1.21)%(P<0.05);miR-23 inhibitor+FIS1 siRNA组细胞增殖率为(160±8)%,高于miR-23 inhibitor组的(134±10)%(P<0.05),凋亡率为(14.27±2.00)%,低于miR-23 inhibitor组的(23.22±2.54)%(P<0.05)。结论LPS诱导的肾小管上皮细胞miR-23和FIS1异常表达与细胞的炎症反应和氧化应激过程有关。miR-23通过靶向负调控FIS1,减轻HK-2细胞的炎症反应和氧化应激水平,对脓毒症肾小管上皮细胞损伤起保护作用。

基于风险管理的质量控制策略在自身抗体检测领域的策划

目的 识别自身抗体检测领域的潜在危害,建立该领域基于风险管理的质量控制策略的策划方法。方法 参考ISO 22367:2020标准,对自身抗体检测领域进行风险评估,并结合WS/T 496—2017标准中提出质量指标,针对性地选择监控的质量指标。结果 对自身抗体检测的全过程进行分析,在检验前5个、检验中6个、检验后3个子过程中分别识别出8个、11个及4个潜在危害,在当前预防措施下,仍发现7个需要采取进一步改进措施的潜在危害,其中6个为低风险、1个为中风险。在采取进一步改进措施后,仅有一个潜在危害仍存在低风险,实验室针对采取的进一步改进措施设立4个质量指标以持续监控措施的有效性。结论 实验室管理者可利用FMEA分析法进行风险评估,并与质量控制策略的策划相联系,应用于实验室特定的检测领域。

稳定性冠心病患者血清超敏心肌肌钙蛋白T水平与冠状动脉病变程度的相关性研究

目的：探讨稳定性冠心病（SCAD）患者血清超敏心肌肌钙蛋白T（hs-c Tn T）与冠状动脉病变之间的关系。方法：回顾性分析450例在我院行冠状动脉造影且均在术前3天内检测了hs-c Tn T基础值的SCAD患者。根据三分位法,将患者按Gensini评分分为三组,即低积分组（Gensini积分〈14分;n=153）,中积分组（Gensini积分14~28分;n=145）,高积分组（Gensini积分〉28分;n=152）。分析三组之间的Gensini积分与hs-c Tn T水平的关系。采用受试者工作特征曲线（ROC曲线）分析hs-c Tn T水平预测Gensini高积分及需要血运重建的最佳诊断界点,并进一步用Logistic回归分析hs-c Tn T水平与Gensini高积分及需要血运重建的相关性。结果：低积分组、中积分组及高积分组hs-c Tn T中位数（P25,P75）分别为6.72（4.20,8.93）pg/ml、7.90（5.74,12.68）pg/ml及14.99（10.26,24.30）pg/ml,组间比较P值均〈0.001,差异有统计学意义。在ROC曲线分析中,hs-Tn T对于Gensini高积分及需要血运重建曲线下面积（AUC）分别为0.837[95%可信区间：（CI）0.803~0.874]及0.772[95%CI：0.728~0.817],hs-Tn T最佳诊断界点为10.04 pg/ml及8.56 pg/ml。Logistic回归分析显示,调整年龄、性别、高血压、糖尿病史、吸烟史、血肌酐、低密度脂蛋白胆固醇及高敏C反应蛋白后,hs-c Tn T仍然为预测高Gensini积分[比值比（OR）=1.13,95%CI：1.06~1.20,P〈0.001]及需要血运重建（OR=1.19,95%CI：1.14~1.24,P〈0.001）的独立预测因子。结论：SCAD患者冠状动脉造影术前的hs-c Tn T水平和冠状动脉病变程度显著相关,可以作为术前预判严重冠状动脉病变及需要血运重建的指标之一。

Caspase依赖的氧化应激对脓毒症肾小管上皮细胞损伤的作用及机制

目的:观察不同活性氧(reactive oxygen species,ROS)及氧化应激水平对脓毒症肾小管上皮细胞增殖、凋亡、周期等生物学效应的影响,探索氧化应激水平和线粒体-Caspase途径能否作为脓毒症肾小管上皮损伤的治疗靶点。方法:用终浓度为10μg/mL的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理人肾小管上皮HK-2细胞12 h建立脓毒症细胞模型,将细胞模型随机分为H_(2)O_(2)组(H_(2)O_(2),300μmol/L)、Caspase抑制剂组(Ac-DEVD-CHO,15μmol/L)、Caspase抑制剂+H_(2)O_(2)组(H_(2)O_(2),300μmol/L+Ac-DEVDCHO,15μmol/L)和阴性对照组(不处理);另以正常培养的HK-2细胞为空白对照组。Western blot检测Cleaved-Caspase 3和Cleaved-多聚ADP核糖多聚酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)蛋白表达,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞ROS水平、细胞凋亡和细胞周期。结果:阴性对照组细胞ROS水平、凋亡率、凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase 3和Cleaved-PARP水平以及G1期细胞比例均较空白对照组升高(P均<0.05),增殖率较空白对照组降低(P<0.05)。H_(2)O_(2)组细胞ROS水平、凋亡率、Cleaved-Caspase 3和Cleaved-PARP水平以及G1期细胞比例均较阴性对照组升高(P均<0.05),而增殖率较阴性对照组降低(P<0.05)。Caspase抑制剂+H_(2)O_(2)组细胞ROS水平、凋亡率、Cleaved-Caspase 3和Cleaved-PARP水平以及G1期细胞比例均较H_(2)O_(2)组降低(P均<0.05),但均高于阴性对照组(P均<0.05));增殖率较H_(2)O_(2)组升高(P<0.05),但仍低于阴性对照组(P<0.05)。结论:脓毒症细胞模型中存在异常升高的氧化应激反应。ROS能通过线粒体-Caspase凋亡途径抑制脓毒症肾小管上皮细胞增殖,促进细胞凋亡和引起细胞周期G1期阻滞。抑制Caspase对ROS引起的脓毒症肾小管上皮细胞损伤有一定保护作用。

急诊凝血功能检测实验室内周转时间回归模型建立及影响因素分析

目的建立急诊室凝血功能检测周转时间(TAT)回归模型,探讨影响实验室内TAT的因素,并验证采取干预措施后的效果。方法选取2018年10月至12月(干预前)及2019年3月至5月(干预后)凝血功能检测数据,记录检验人员、标本及TAT相关信息,进一步对不同检验人员干预前、后3个月月均TAT进行聚类分析,并验证采取针对性干预措施后的效果。结果干预前、后,9名检验人员间凝血功能检测实验室内TAT差异有统计学意义,仅5名检验人员TAT满足质量要求。干预后,4名检验人员TAT缩短,7名检验人员TAT满足质量要求。干预前5名检验人员上半夜TAT短于下半夜;而干预后9名检验人员上半夜TAT均短于下半夜。二元Logistic回归显示,工龄是TAT的有利因素,下半夜的检测时段则是TAT的不利因素。干预前聚类分析显示,优良为检验人员B、F、G、I;及格为检验人员A、C、D、H;不及格为检验人员E;干预后聚类分析显示,检验人员E的TAT远大于其他检验人员,仍为最差。结论利用统计学方法建立模型对实验室质量指标进行分析,寻找其发生偏离的影响因素,从而针对性地采取纠正措施,可以达到精细化管理的目的。

不同检测系统间乙型肝炎病毒表面抗体结果一致性及影响因素分析

目的探讨乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)单独阳性及乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)与HBsAb同时阳性这两种不同乙肝标志物结果模式下,两种不同化学发光法检测系统HBsAb检测结果的一致性及可能影响一致性的原因。方法①选取在A系统行乙型肝炎病毒感染标志物检测样本64例,其中HBsAb单独阳性35例为模式一样本;HBsAg与HBsAb同时阳性29例为模式二样本,所有样本同时在B系统行HBsAb检测并比较A/B系统结果。②模式二样本经聚乙二醇6000(PEG6000)处理后,分别经A/B系统再次检测HBsAb,并比较其结果。结果(1)模式一样本,A/B系统HBsAb阳性符合率为91.4%(32/35)(≥10IU/L),其中10~100IU/L浓度范围符合率为90.9%(20/22);大于100IU/L浓度范围符合率为92.3%(12/13)。A/B系统HBsAb定量检测结果差异有统计学意义[68.01(26.15,270.60)vs 50.65(28.86,246.79),P<0.05]。(2)模式二样本,A/B系统HBsAb阳性符合率为37.9%(11/29)(≥10IU/L),其中10~100IU/L浓度范围符合率为40%(10/25),大于100IU/L浓度范围符合率为25%(1/4)。A/B系统间HBsAb定量检测结果差异有统计学意义[25.45(15.98,66.01)vs 5.81(2.82,22.70),P<0.001]。经PEG处理后,A系统HBsAb检测结果较处理前差异有统计学意义[17.88(8.75,49.61)vs 25.45(15.98,66.01),P<0.001];而B系统两者间差异无统计学意义[8.09(1.93,32.52)vs 5.81(2.82,22.70),P>0.05]。A/B系统结果比较,小于10IU/L浓度范围内符合率为72.7%(8/11),10~100IU/L浓度范围内符合率为43.7%(7/16),大于100IU/L浓度范围内的符合率为50%(1/2)。A/B系统HBsAb定量检测结果差异仍有统计学意义[17.88(8.75,49.61)vs 8.09(1.93,32.52),P<0.001]。结论(1)溯源性不同的A/B检测系统对于单独HBsAb阳性样本结果阳性符合率较高,但定量结果存在一定差异;(2)HBsAg-HBsAb免疫复合物的存在可能是影响A/B系统HBsAb检测结果一致性的重要因素。(3)对于HBsAg和HBsAb同时阳性患者,B系统检测结果可能更能反映个体的真实免疫状态。

Graves病患者的促甲状腺素受体抗体与甲状腺刺激性免疫球蛋白及甲巯咪唑治疗反应的相关性

目的:评估Graves病(Graves’disease,GD)患者促甲状腺激素受体抗体(thyrotropin receptor antibody,TRAb)与甲状腺刺激性免疫球蛋白(thyroid-stimulating immunoglobulin,TSI)水平之间的相关性,比较TRAb和TSI对甲巯咪唑治疗反应的临床预测能力。方法:收集2020年1月至2021年12月在江苏省中西医结合医院就诊的患者2 145例。使用Pearson分析方法对游离甲状腺素(free thyroxine,FT4)、TRAb、TSI进行相关性分析。从2 145名患者中选取50名接受甲巯咪唑治疗的GD患者并进行随访。收集患者基线资料,甲巯咪唑治疗期间患者甲状腺自身抗体水平及甲巯咪唑剂量变化(Δ_(甲巯咪唑))等。使用logistic回归分析确定与甲巯咪唑治疗快速反应性相关的预测因子。结果:GD患者的TRAb与TSI水平极强相关(P<0.001)。甲巯咪唑≥10 mg/d治疗的GD患者中FT4、TRAb、Δ_(甲巯咪唑)与治疗反应显著相关(均P<0.05),TSI无统计学意义;甲巯咪唑<10 mg/d治疗的GD患者中各指标均与治疗反应无关(均P>0.05)。受试者工作特征(receiver operating characteristics,ROC)曲线显示FT4水平是GD患者对甲巯咪唑治疗快速反应的最佳预测因子。结论:GD患者的TRAb水平与TSI水平密切相关。与TRAb相比,TSI对甲巯咪唑的治疗反应性可能更弱。

表观健康儿童人类白细胞分化抗原B27参考区间的建立

目的建立健康儿童人白细胞抗原B27(HLA-B27)的参考区间,为幼年特发型关节炎(JIA)附着点炎症相关型(ERA)的诊断和鉴别诊断提供实验室依据。方法选取460例无自觉脊柱、外周关节、关节周围组织炎症或其他病变的儿童作为参考区间建立人群,另选取200名表观健康儿童和50例ERA患儿作为参考区间验证人群。检测所有对象的外周血HLA-B27,建立参考区间,并进行验证。结果 460例儿童HLA-B27平均荧光强度检测结果呈偏态分布(Z=1.615,P=0.011),采用中位数(M)[百分位数(P2.5-P97.5)]表示,结果为100(78-121)。不同年龄和性别儿童HLA-B27平均荧光强度差异均无统计学意义(P>0.05)。采用百分位数法建立单侧97.5%的参考区间,HLA-B27参考区间为<121。一致性比较结果显示,建立的新参考区间与厂商提供的HLA-B27参考区间(0-147)之间一致性较差(kappa=0.013,P<0.001)。根据新参考区间,200名表观健康儿童HLA-B27的异常率为5%,50例ERA患儿的HLA-B27阳性率为78%;根据厂商提供的参考区间,200名表观健康儿童HLA-B27的异常率为3%,50例ERA患儿的HLA-B27阳性率为26%;二者异常率差异无统计学意义(χ^2=1.41,P>0.05),阳性率差异有统计学意义(χ^2=49.18,P<0.001)。结论建立了南京地区儿童外周血HLA-B27的参考区间,依据该参考区间诊断ERA的特异性与厂商提供的参考区间无差异,但提高了诊断敏感性,降低了漏诊率。

妊娠中期孕妇血清铁储备水平与亚临床甲减的关系

目的探讨碘适量地区妊娠中期不同铁储备水平孕妇间甲状腺素水平的差异,并分析铁储备水平与妊娠期亚临床甲减(亚甲减)的关系。方法选取2017年1月至2018年10月南京地区妊娠中期常规产检孕妇703例,记录人口学资料并分析其血清铁蛋白(Ferr),游离三碘甲状腺原氨酸(FT 3),游离甲状腺素(FT 4),血清促甲状腺激素(TSH),血红蛋白(Hb)等指标检测结果。根据Ferr及Hb检测结果,将其分为健康对照组(A组,n=388)、铁储备减少组(B组,n=259)、缺铁性贫血(IDA)组(C组,n=56),采用单因素方差分析方法,分析三组妊娠中期妇女Ferr、FT 3、FT 4、TSH等指标的差异;采用二元Logistic回归分析法,进一步分析妊娠期亚甲减的危险因素。结果①三组间Ferr、FT 3、BMI、TSH水平比较,A组与B组、C组差异有统计学意义(P<0.05),而B组与C组之间差异无统计学意义(P>0.05);Hb水平比较,A、B、C三组之间差异均有统计学意义(P<0.05);孕妇年龄及FT 4水平比较,三组之间差异无统计学意义(P>0.05)。②二元Logistic回归分析显示:Ferr(<20ng/mL)是妊娠期亚甲减的危险因素(OR:1.579,CI:1.018~2.449);年龄(24~29岁)是妊娠期亚甲减的保护因素(OR:0.440,CI:0.235~0.825)。结论Ferr水平降低影响FT 3、TSH的水平。铁储备减少(Ferr<20 ng/mL)是并发妊娠期亚甲减的危险因素,而适合的孕龄(24~29岁)是并发妊娠期亚甲减的保护因素。Ferr水平可能是并发妊娠期亚甲减敏感的预测指标。

南京地区40岁以上人群2型糖尿病控制现状的调查分析

目的 了解南京地区40岁以上人群的糖尿病发病现状,以及当前医疗模式下的干预对糖尿病自然人群血糖和其他代谢指标的实际影响.方法 于2011年6-11月,对南京市栖霞区40～79岁常住居民进行流行病学调查,总调查人数为10 300人,筛查出糖尿病患者2 293例.其中,既往诊治的糖尿病患者1 393例,新诊断糖尿病而未行干预的患者900例,采用多因素Logistic回归比较此2组患者的糖化血红蛋白(HbA1c)、血压、LDL-C水平的差异性.结果 南京地区40岁以上人群糖尿病患病率高达23.28％(2 293/9 850).混杂因素校正后,40～50岁患者中,既往诊治糖尿病患者的HbA1c达标率是新诊断糖尿病患者的3倍,而血压和LDL-C无明显差异;51～60岁患者是否已诊治糖尿病对HbA1c、血压及LDL-C均无显著影响;而61 ～ 79岁既往诊治患者的HbA1c达标率明显低于新诊断糖尿病者(61～70岁:0R=0.649,95％CI 0.487～0.865;71～79岁:OR=0.474,95％CI0.333～0.674).结论 当前国内糖尿病管理模式并未使高龄患者受益,其管理模式有待改进.糖尿病患者整体血糖达标率低下的主要瓶颈在于50岁以上糖尿病患者的血糖达标率过低,尤其是60岁以上高龄患者.为提高糖尿病患者的血糖达标率,今后的工作重点应为50岁以上糖尿病患者,尤其是60岁以上患者.

罕见抗钌抗体所致甲状腺功能异常伴降钙素升高的患者1例并文献复习

免疫分析平台目前是临床实验室的首选方法,然而,免疫测定容易受到不同的因素干扰。其中临床上用于检测甲状腺功能的自动免疫测定法容易受到6种不同类型的干扰,包括嗜异性抗体、生物素、抗链霉亲和素抗体、巨促甲状腺激素(MTSH)、甲状腺激素自身抗体以及抗钌抗体干扰[1],其中抗钌抗体干扰甲状腺功能测定首次在2007年被报道,其发生率很低(0.40%~1.00%)[2-3]。本文就南京中医药大学附属中西医结合医院诊治的1例罕见抗钌抗体干扰导致的甲状腺功能异常和降钙素升高的病例作一讨论。

细胞壁锚定蛋白SasX调控RNAⅢ参与金黄色葡萄球菌ST239克隆生物膜形成及致病性相关研究

目的探讨金黄色葡萄球菌(SA)细胞壁锚定蛋白SasX对RNAⅢ转录表达的调控,揭示其对SA的生物膜(BF)形成和致病过程的作用。方法收集2022年4~6月南京医科大学附属儿童医院住院患儿临床样本中分离的SA ST239克隆,采用基因敲除和回补技术建立突变株△SasX和回补株△SasX(pRB473-SasX),经RNAⅢ抑制肽(RIP)处理,再采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SasX基因对RNAⅢ转录水平的影响,绘制增殖曲线观察菌株生长速度,镜下观察菌株聚集能力,半定量实验观察BF形成,并采用qPCR验证BF形成相关基因表达。结果△SasX株的RNAⅢ水平显著低于野生株(t=4.273、P=0.037)。△SasX株BF形成能力较野生株显著减弱(t=4.619、P=0.032),△SasX(pRB473-SasX)+RIP株BF形成能力显著低于△SasX(pRB473-SasX)株(t=7.874、P=0.011)。△SasX株icaA(t=5.324、P=0.027)、sarA(t=6.250、P=0.016)和fnbA(t=4.833、P=0.031)mRNA水平显著低于野生株;△SasX(pRB473-SasX)+RIP株icaA(t=4.386、P=0.034)和sarA(t=5.531、P=0.023)mRNA水平较△SasX(pRB473-SasX)株显著降低。镜下可见野生株有大片聚集成团,△SasX株多为单个散在分布或小范围聚集,△SasX株的聚集能力较野生株显著减弱;△SasX(pRB473-SasX)株的聚集能力和野生株相当,△SasX(pRB473-SasX)+RIP株的聚集能力较△SasX(pRB473-SasX)株减弱。结论SA SasX通过调控RNAⅢ的转录表达,促进细菌的聚集和BF形成能力,从而参与其致病过程。

木犀草素对BMDM极性及炎性因子表达的影响

目的观察木犀草素对小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDM)的极性及其炎性因子表达的影响,初步探讨木犀草素调控BMDM的极性而抑制炎症的机理。方法以C57BL/6小鼠取材的BMDM为研究对象,10 ng/ml脂多糖(LPS)和20 ng/ml干扰素(IFN)-γ刺激BMDM发生M1极化,20 ng/ml IL-4刺激其M2极化;实验分为对照(Control)组;LPS+IFN-γ刺激(M1)组;IL-4刺激(M2)组;木犀草素(2.5/5μmol/L)处理组分别为M1+2.5L和M1+5L;激光共聚焦显微镜观察BMDM的形态;FCM检测BMDM的纯度和膜表面分子CD11c和CD206的水平;qPCR和ELISA分别检测M1型和M2型炎性因子mRNA和蛋白的变化;Western-blot检测p-STAT1和p-STAT6蛋白通路的表达。结果分离的小鼠骨髓干细胞成功诱导分化为BMDM,LPS+IFN-γ诱导BMDM极化为M1型,IL-4诱导其极化为M2型;木犀草素作用后:M1极化的BMDM所表达的M1型致炎因子下调、M2型抗炎因子上调;M1细胞膜表面M1型标志分子CD11c的表达下调、M2型标志分子CD206的表达上调;炎症信号通路蛋白p-STAT1的水平下降,而p-STAT6的水平上升。结论木犀草素可能通过调节p-STAT改变BMDM的极性从而调节炎症介质的表达。