LC-MS/MS法测定人血浆中羟基红花黄色素A的浓度

目的：建立LC-MS/MS法测定人血浆中羟基红花黄色素A（ QA）的浓度。方法血浆样品中加入等体积0．2 mol ·L-1的乙酸铵后,采用固相萃取技术进行提取QA,洗脱液直接进行 LC-MS/MS分析。 QA和内标异鼠李素-3-O-新橙皮苷（SLS）通过Agilent ZORBAX SB C18（3．0 mm ×100 mm,3．5μm）色谱柱进行等度洗脱分离,流动相组成为0．2 mmol ·L-1乙酸铵水溶液/甲醇=30/70。质谱检测采用负离子模式,扫描方式为多反应检测,QA的目标离子对为m/z 611.131/490．900,SLS 的目标离子对为 m/z 623．032/298．800。结果 QA和SLS的保留时间分别2．7 min和3．9 min左右,空白血浆无干扰影响含量测定；血浆中 QA 的线性范围为8．57-4185μg·L-1（ r为0．9949-0．9992）,定量下限为8．570μg·L-1,日内日间精密度 RSD 均小于7%；低、中、高3个浓度下的平均介质效应分别为116．62%、119．06%和115．72%（ RSD 分别为3．27%、3．42%和4．93%）,平均提取回收率分别为77．75%、80．90%和80．76%（ RSD分别为1．70%、1．78%和4．15%）；血浆样本于室温放置4 h、-70℃反复冻融3次及-70℃冰冻保存31 d的情况下均稳定；浓度超出定量上限的QA血浆样本经空白血浆稀释6．25倍后可准确测定。结论建立的测定血浆样本中QA浓度的LC-MS/MS分析方法简便、快速、准确灵敏,适用于QA人体药代动力学的系统研究。

LC/APCI/MS/MS测定Beagle犬口服雷公藤片后血浆中雷公藤甲素

目的建立LC／APCI／MS／MS法测定Beagle犬血浆中雷公藤甲素，研究Beagle犬单剂量口服雷公藤片后体内雷公藤甲素药动学。方法血浆样品经乙酸乙酯提取，色谱柱为AgilentZORBAXSBC18（3．0mm×100mm，3．5μm），运用甲醇～醋酸铵缓冲液梯度洗脱，多反应监测（MRM）雷公藤甲素（[M＋H]＋，m／z378．5／361．3）和内标泼尼松龙（[M＋H]＋，m／z361．3／147．0）。Beagle犬单剂量口服雷公藤片（1片／kg）后，采用该方法测定血浆中雷公藤甲素，DAS（1．0）软件对雷公藤甲素药-时曲线进行拟合，并计算药代动力学参数。结果在0．16—20．55μg·L^-1内，雷公藤甲素与内标的峰面积比值与浓度的线性关系良好，日内日间精密度小于6．15％，提取回收率大于79．14％。Beagle犬口服雷公藤片后，雷公藤甲素主要药动学参数为：Cmax／μg·L^-1：2．78±0．387；Tmax／h：1．75±0．76；T1/2／h：2．59±0．60；CL／L·kg^-1·h^-1：2．768±0．606；AUC（0～9）／μg．L^-1．h：11，539±1．491；AUC（0-∞）／μg·L^-1·h：13．185±1．686。结论建立的LC／APCI／MS／MS分析方法准确灵敏，适用于雷公藤片中雷公藤甲素在Beagle犬体内的药代动力学研究。

高效液相色谱-质谱联用法研究人体内阿奇霉素药动学和生物等效性

目的：研究健康人口服阿奇霉素胶囊后的药动学和生物等效性。方法：20个健康受试者采用随机分组自身交叉对照试验设计，口服阿奇霉素胶囊500mg后用LC-MS联用法测定血浆中阿奇霉素浓度，以BAPP程序计算其药动学参数和评价生物等效性。结果：在选定的色谱／质谱条件下阿奇霉素与内标及血浆杂质分离良好，在3．48～1．39×10^3μg·L^-1范国内线性良好。相对回收率大于91．2％，日内和日间RSD小于9．19％。阿奇霉素受试制剂（T）和参比制剂（R）的主要药动学参数：Tmax分别为（2．4±1．1）h和（2．6±0．8）h，Gmax分别为（497±180）μg·L^-1和（547±243）μg·L^-1；T1／2分别为（43．7±4．4）h和（44．6±4．3）h；AUC（0-144）分别为（4．4×10^3P±1．1×10^3）μg·L^-1·h和（4．4×10^3±1．0×10^3）μg·L^-1·h；用面积法（AUG（0-144）估算的阿奇霉素胶囊相对生物利用度为（100．0±15．2）％。结论：用LC-MS法测定血浆中阿奇霉素浓度，杂质无干扰，定量限低，重复性好，准确度高。受试的阿奇霉素胶囊与参比的阿奇霉素胶囊生物等效。

黄芪口服液降低大鼠顺铂毒性作用机制的尿液代谢组学研究

采用基于液相色谱-飞行时间质谱联用(LC-TOF-MS)技术的代谢组学方法,分析大鼠尿液内源性代谢物的变化,研究黄芪口服液(HO)降低大鼠顺铂(CDDP)毒性的作用机制。采用低剂量多次腹腔注射CDDP的方法建立CDDP染毒大鼠模型,并连续给予16天HO。于第18天收集正常对照(Control)组、顺铂模型(CDDP)组和黄芪口服液(HO)组大鼠的24 h尿液,进行LC-TOF-MS分析,以获取尿液代谢物组数据集,对所得数据进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)等多元统计分析,以筛选潜在生物标志物。于第20天采集大鼠血清测定肌酐和尿素氮水平。血清指标测定结果表明,HO可以显著降低CDDP染毒大鼠的肌酐和尿素氮水平(p<0.05)。PCA得分图显示,3组可分别聚类,HO组位于Control组和CDDP组中间,表明HO可部分改善CDDP所致大鼠尿液代谢产物的异常变化。综合OPLS-DA分析、t检验和倍数变化分析结果,最终共筛选并初步鉴定出35个尿液代谢产物作为HO减毒相关的潜在生物标记物。代谢通路分析结果表明,HO可通过纠正体内氨基酸代谢、能量代谢和核苷酸代谢等通路的紊乱,降低CDDP所致机体毒性。

脉络宁注射液在兔体内的药动学研究

目的:研究新西兰大耳白兔静脉注射脉络宁注射液后的药动学。方法:4只健康新西兰大耳白兔耳缘静脉注射脉络宁2 mL·kg^(-1),后用高效液相色谱法(HPLC)双波长同时测定血浆中绿原酸、肉桂酸和咖啡酸的浓度,以DAS程序分别计算3个分析物的药动学参数。结果:绿原酸的主要药动学参数:最佳房室为二室,W=1,V=1.45 L,t_(1/2β)=14.1 min,CL=5.21×10^(-2)L·min^(-1);肉桂酸的主要药动学参数:最佳房室为二室,W=1/cc,V=28.2 L,t_(1/2β)=81.1 min,CL=1.65×10^(-1) L·min^(-1);咖啡酸的主要药动学参数:最佳房室为二室,WV=1/cc,V=6.16 L,t_(1/2β)=51.4 win,CL=6.65×10^(-2)L·min^(-1)。结论:在选定的色谱条件下3个分析物与内标及血浆杂质分离良好,定量限低,重复性好,准确度高。首次报道的药动学参数为下一步的临床药动学研究提供参考依据。

LC-MS/MS法测定人血浆中吡非尼酮及其代谢产物的浓度

目的建立LC-MS/MS法测定人血浆中吡非尼酮(pirfenidone,BT)及其主要代谢产物5-羧基吡非尼酮(5-carboxypirfenidone,SBT)的含量。方法血浆样品加入氘代同位素内标吡非尼酮-d5(d BT)和5-羧基吡非尼酮-d5(d SBT),经甲醇沉淀蛋白后进样。液相分离采用Agilent ZORBAX SB C18(3.0 mm×100 mm,3.5μm)色谱柱,流动相为水(含0.5%甲酸)/乙腈(50/50)。质谱检测采用ESI离子源,正离子多反应检测模式检测。BT、SBT、d BT和d SBT的检测目标离子对分别为m/z 185.958/77.1、215.944/77.0、190.965/81.1和220.948/99.1。结果空白溶剂、空白血浆无干扰,分析物及内标间无相互干扰。血浆中BT和SBT分别在0.020 59~25.14 mg·L-1和0.016 73~20.42 mg·L-1范围内线性关系良好。批内、批间精密度和准确度均在可接受范围内。分析物及内标储备液于4℃冰箱中放置156 d,血浆样本于室温放置4 h、-70℃冰箱中保存并反复冻融3次、-70℃冰箱保存10、29、52 d及样品处理后自动进样器(8℃)中放置24 h的情况下均稳定。BT和SBT的平均提取回收率和归一化基质因子均在可接受范围内。结论本研究所建立的测定BT和SBT血浆药物浓度的LC-MS/MS分析方法具有良好的特异性、准确度、精密度、灵敏度、稳定性和耐用性,适用于人血浆中吡非尼酮及其代谢物的浓度测定及其药动学研究。

高效液相质谱联用研究伐昔洛韦人体生物等效性

目的研究健康人po盐酸伐昔洛韦片后的药动学和生物等效性。方法20个健康受试者采用随机分组自身交叉对照试验设计，口服盐酸伐昔洛韦片600mgHPLC—MS联用法测定血浆中代谢产物阿昔洛韦浓度，以BAPP程序计算其药动学参数和评价生物等效性.结果在选定的色谱／质谱奈件下阿昔洛韦与内标及血浆杂质分离良好，在41．6～5．34×10μg·L^-1内线性良好.阿昔洛韦的相对回收率大于96．7％，日内和日间RSD小于10．2％。盐酸伐昔洛韦片受试制剂（T）和参比制别（R）的主要药动学参数：tmax分别为（1．5±0．6）（T）和（1．5±0．6）h（R），Pmax、分别为（2．83×10^7±7．76×10^2）（T）和（2．72×10^3±8．50×10^2）μg·L^-1（R）；t1/2分别为（3．21±0．29）（T）和（3．23±0．30）h（R）；AUC0-14分别为（1．02×10^4±2．03×10^3）（T）和（9．91×10^3±2．46×10^3）μg·h·L^-1（R）；盐酸伐昔洛韦片相对生物利用度为（104．5±14．0）％.结论用LC—MS测定血浆中代谢产物阿昔洛韦浓度，杂质无干扰，定量限低，重复性好，准确度高.受试的盐酸伐昔洛韦片与参比的盐酸伐昔洛韦片生物等效.

盐酸沙格雷酯对大鼠体内细胞色素P4502D1/2的影响

目的观察盐酸沙格雷酯对大鼠细胞色素P4502D1/2(CYP2D1/2)的底物右美沙芬药动学的影响。方法♂SD大鼠,随机分成2组,对照组按右美沙芬组10 mg·kg-1灌胃给药,盐酸沙格雷酯组按右美沙芬和盐酸沙格雷酯均10 mg·kg-1同时灌胃给药,按不同时间从大鼠眼底静脉丛取血,血样处理后,用LC-MS/MS法测定大鼠血浆中右美沙芬的浓度,用DAS 2.0软件进行分析,求出其主要药代动力学参数。结果盐酸沙格雷酯组与对照组比较,右美沙芬的T12明显延长(2.49 h±0.93 h vs 1.47 h±0.20 h,P<0.05),Cmax明显升高(325.7μg·L-1±133.2μg·L-1vs 104.5μg·L-1±52.4μg·L-1,P<0.05),AUC0-t(785.5μg·L-1·h±451.9μg·L-1·h vs 244.8μg·L-1·h±168.3μg·L-1·h,P<0.05)和AUC0-∞(804.7μg·L-1·h±445.6μg·L-1·h vs 251.4μg·L-1·h±173.4μg·L-1·h,P<0.05)明显增大。结论盐酸沙格雷酯在大鼠体内对右美沙芬的代谢有抑制作用,能降低其消除过程。

蝙蝠葛碱抑制人胰腺癌SW1900细胞系增殖及诱导其凋亡

目的探讨蝙蝠葛碱对人胰腺癌SW1900细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度蝙蝠葛碱处理细胞系SW1900,采用MTT法检测细胞增殖,采用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率。Real-time PCR和免疫印迹法分析蝙蝠葛碱处理SW1900细胞中凋亡蛋白及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)的表达水平。结果MTT实验显示,蝙蝠葛碱呈剂量依赖性地抑制SW1900细胞活力,F=783.7,P<0.001。流式细胞术结果显示,经0、6、12 mg/L蝙蝠葛碱处理的各组细胞凋亡率分别为(4.34±1.30)%、(14.94±1.94)%和(22.68±3.61)%,3组间均值差异有统计学意义,F=58.52,P<0.001,蝙蝠葛碱呈剂量依赖性促进细胞凋亡。Real-time PCR实验结果显示,蝙蝠葛碱可剂量依赖性下调PI3K、Akt、Bcl-2的基因表达(PI3K mRNA,F=101,P=0.01;Akt mRNA,F=1666,P<0.01;Bcl-2 mRNA,F=753,P<0.001)。免疫印迹法结果显示,蝙蝠葛碱呈剂量依赖性地下调PI3K、Akt和Bcl-2的蛋白表达。结论蝙蝠葛碱对人胰腺癌SW1900细胞具有抑制其增殖和诱导其凋亡等作用,可能通过PI3K/Akt通路下调Bcl-2的表达诱导SW1900细胞凋亡。

黄芪制剂中黄酮类成分的筛选和鉴定

目的筛选并鉴定黄芪注射液、黄芪口服液(黄芪)中黄酮类成分。方法采用高效液相色谱-三重四极杆飞行时间质谱(LC-Q-TOF-MS/MS)技术获取正负离子模式下的分析数据,质量亏损过滤(MDF)法进行系统筛选,依据加合离子的出现和正负离子的相互佐证作进一步锁定,借助对照品和黄酮特征碎片离子对其进行鉴定或归属。结果共筛选鉴定出68种黄酮类成分,其中六碳糖基化、羟基化、乙酸酯化、五碳糖基化、丙二酸酰基化、甲基化、去甲基化、氢化、葡萄糖醛酸化、四碳糖基化、去羟基化这11种转化反应参与了该类成分的形成。结论基于LC-Q-TOF-MS/MS技术的MDF法可行有效,可用于黄芪制剂中黄酮类成分的系统筛选。

前列通窍胶囊治疗肾虚瘀阻型前列腺增生症87例临床研究

目的:探讨前列通窍胶囊治疗前列腺增生症(BPH)的临床疗效。方法:采用随机对照、双盲双模拟及多中心临床研究方法,将符合纳入标准的186例研究对象按1∶1随机分入治疗组和对照组,最终有效病例治疗组87例,对照组88例,治疗组采用前列通窍胶囊+癃闭舒胶囊模拟剂,对照组采用前列通窍胶囊模拟剂+癃闭舒胶囊治疗。8周为1个疗程,观察1个疗程。随访观察4周。结果:治疗组总有效率为63.22%,其中显效率为6.90%;对照组总有效率为47.73%,其中显效率为2.28%,两组疗效比较具有显著性差异(P<0.01)。两组治疗后患者国际前列腺症状评分(I-PSS)、生活质量(Qo L)评分、最大尿流率(Qmax)、膀胱残余尿量、中医证候积分均有明显改善(P<0.01),而前列腺体积无明显变化。组间比较显示,治疗组在改善BPH患者I-PSS、Qo L、Qmax、中医证候积分方面优于对照组(P<0.01);在减少膀胱残余尿量方面,无显著性差异。结论:前列通窍胶囊可明显改善BPH引起的临床症状,是治疗BPH的一个安全、有效的制剂,具有广阔的开发应用前景。

应用基于LC-TOF-MS分析的质量亏损过滤方法筛选黄芪注射液中的皂苷类成分

采用液相色谱与四极杆飞行时间质谱(LC-TOF-MS)联用技术分析黄芪注射液(HI)样品,获取正负离子模式下HI中化学成分的LC-TOF-MS分析数据。根据前期相关文献报道,建立黄芪皂苷类化合物的质量亏损过滤(MDF)方法,用于系统筛选HI中所含有的皂苷类成分。每个筛选化合物的存在需由不少于2个准分子离子进行确认。最后依据其母离子和子离子信息对所筛选的化合物进行初步鉴定。最终共从HI中筛选并初步鉴定出62个皂苷类化合物,其中15个为新发现的皂苷类化合物。鉴定结果提示,乙酰化、氢化、去氢化、甲氧基化和水化可能为HI中皂苷所涉及的主要转化反应。该研究丰富了黄芪化学物质基础研究内容,同时也表明基于LC-TOF-MS分析的MDF方法,是一种可行且有效的中药成分系统筛选工具。

液相色谱质谱联用技术研究石杉碱甲人体生物等效性

目的:研究健康人口服石杉碱甲片后的药动学及生物等效性。方法:20名健康受试者采用随机分组自身交叉对照试验设计,口服石杉碱甲片200μg后用液相色谱质谱联用技术(LC/MS/MS)测定血浆中石杉碱甲浓度,以BAPP程序计算其药动学参数和评价生物等效性。结果:在选定的色谱/质谱条件下石杉碱甲与内标及血浆杂质分离无干扰,在0.10～6.38μg·L-1范围内线性良好。石杉碱甲的提取回收率>73.1%,日内和日间RSD<10.2%。石杉碱甲片受试制剂(T)和参比制剂(R)的主要药动学参数:tmax分别为(0.6±0.3)h(T)和(0.60±0.20)h(R),Cmax分别为(1.9±0.5)μg·L-1(T)和(2.0±0.4)μg·L-1(R);t1/2分别为(13.6±1.3)h(T)和(13.6±1.1)h(R);AUC0-48分别为(19.9±2.7)μg·L-1·h(T)和(20.6±2.2)μg·L-1·h(R);石杉碱甲片相对生物利用度为(96.8±10.1)%。结论:用LC/MS/MS法测定血浆中石杉碱甲浓度,杂质无干扰,定量限低,重复性好,准确度高。受试的石杉碱甲片与参比的石杉碱甲片生物等效。

串联质谱法研究文拉法辛及其主要代谢物的药动学

目的建立同时测定人血浆中文拉法辛(Ven)和O-去甲基文拉法辛(ODV)的串联质谱方法,研究男性健康志愿者单剂量服用盐酸文拉法辛胶囊,原形药文拉法辛和代谢产物O-去甲基文拉法辛体内药动学行为,评价生物等效性。方法 22名健康受试者采用随机分组自身交叉对照试验设计,二周期分别口服受试制剂和参比制剂盐酸文拉法辛胶囊50 mg,用LC-MS-MS联用法同时测定给药后不同时间点血浆中文拉法辛和O-去甲基文拉法辛的经时血药浓度,采用BAPP软件计算其药动学参数和评价生物等效性。结果血浆样品经蛋白沉淀,在选定的色谱/质谱条件下文拉法辛、O-去甲基文拉法辛与内标及血浆杂质分离良好,文拉法辛、O-去甲基文拉法辛分别在1.99～510μg·L-1(r=0.999 7)和1.99～510μg·L-1(r=0.9997)内线性良好;相对回收率在92.2%～105.9%,日内和日间RSD均小于10.5%。受试制剂和参比制剂的文拉法辛主要药动学参数:tmax分别为(2.2±0.7)和(1.9±0.8)h,ρmax分别为(68.90±23.82)和(69.81±23.73)μg·L-1;t1/2分别为(5.0±1.1)和(4.9±1.6)h;AUC0-24分别为(547.91±288.66)和(592.70±330.70)μg·L-1.h。O-去甲基文拉法辛主要药动学参数:tmax分别为(3.8±1.8)和(4.0±1.6)h,ρmax分别为(73.88±21.18)和(73.96±22.09)μg·L-1;t1/2分别为(8.7±1.8)和(8.9±1.9)h;AUC0-48分别为(1 224.41±239.46)和(1 243.53±287.19)μg.h.L-1;文拉法辛、O-去甲基文拉法辛相对生物利用度分别为(107.8±22.0)%和(99.6±10.7)%。结论用LC-MS-MS同时测定血浆中文拉法辛、O-去甲基文拉法辛浓度,样品处理简单快速,杂质无干扰,定量限低,重复性好,准确度高。两制剂的文拉法辛、O-去甲基文拉法辛的主要药动学参数之间无明显差异,经方差分析和检验,证明两制剂生物等效。

脂质组学在慢性肾病研究中的应用

慢性肾病(CKD)常伴随心血管疾病的发生,目前,CKD已成为世界性的公共卫生问题。早期发现和监测肾功能是预防CKD发生和发展的关键。传统的肾功能生物标志物检测在早期CKD中灵敏度较低,因此迫切需要高灵敏性的诊断方法。脂质组学是研究脂质紊乱的代谢组学分支,自2003年提出以来,逐渐成为CKD早期诊断和监测的有效手段。综述近年来脂质组学在CKD及相关慢性肾损害研究中的应用进展,并对涉及的脂质紊乱进行了总结与探讨,以期为后续相关研究提供参考。