人单核细胞株巨细胞病毒编码miR-US25-1-3p过表达后蛋白质组学变化分析

目的分析人单核细胞株(THP-1)过表达人巨细胞病毒(HCMV)编码miR-US25-1-3p后蛋白质表达谱变化及价值。方法采用脂质体将hcmv-miR-US25-1-3p模拟物转染THP-1细胞构建hcmv-miR-US25-1-3p过表达细胞株,RT-qPCR验证转染效果;采用串联质谱标签标记联合液相色谱-串联质谱对hcmv-miR-US25-1-3p过表达后THP-1细胞蛋白质组学进行定量分析,生物信息学分析差异表达蛋白质生理病理功能;westernblot验证重要差异蛋白表达变化。结果与对照相比,THP-1细胞过表达hcmV-miR-US25-1-3p后65种蛋白质呈现差异表达,其中17种上调,48种下调。GO、COG和KEGG注释及功能预测结果显示,差异表达蛋白主要参与炎症反应信号通路、代谢过程、细胞及遗传信息功能,与肿瘤、病毒性心肌炎、非酒精性脂肪肝、原发性免疫缺陷病、类风湿关节炎、多种病原体感染、阿尔茨海默病、亨廷顿病等多种疾病相关。48种下调蛋白质中,文献调研和生物信息学分析发现,肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)参与抗病毒及炎症反应,上述蛋白质下调表达经western blot验证。结论HCMV编码的hcmv-miR-US25-1-3p能够影响宿主蛋白表达谱,并可能通过抑制TRAIL和RANTES表达,促进病毒潜伏、免于宿主细胞杀伤。

炎症性肠病患者血清胆红素水平分析

目的 分析炎症性肠病(IBD)患者血清胆红素(sTB)水平,探讨其与患者病情的关系。方法 选取2019年1月-2020年9月在南京市中医院就医并确诊的IBD患者165例,其中克罗恩病患者80例(CD组)、溃疡性结肠炎患者85例(UC组),收集同期体检健康者163例作为健康人对照组。检测IBD患者sTB、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)和血红蛋白(Hb)水平,分析IBD患者血清sTB水平的变化,及其在患者不同病变范围中的水平差异,探讨sTB与IBD患者疾病活动性的严重程度(UC患者改良Mayo评分、CD患者简化CDAI评分)、ESR、CRP和Hb的相关性。结果 与对照组血清sTB[(12.99±2.71)μmol/L]相比,CD组[(9.48±3.29)μmol/L]和UC组[(10.14±5.11)μmol/L]患者血清sTB的水平均显著降低(P<0.001),CD组和UC组患者血清sTB的水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。UC患者中,不同病变范围患者,即直肠病变组(E1)[9.90 (7.30,13.70)μmol/L]、左半结肠病变组(E2)[10.70 (6.70,15.90)μmol/L]和广泛结肠组(E3)[6.80 (5.10,11.70)μmol/L]血清sTB水平差异有统计学意义(H=7.793,P=0.020)。相关性分析结果显示,UC患者sTB与改良Mayo评分(r=-0.359,P=0.001)、CRP(r=-0.496,P<0.001)和ESR(r=-0.483,P<0.001)水平呈负相关,与Hb水平呈正相关(r=0.534,P<0.001)。CD患者sTB与简化CDAI评分呈负相关(r=-0.578,P<0.001),与Hb水平呈正相关(r=0.375,P<0.001),与CRP和ESR水平无相关性(P>0.05)。结论 IBD患者的sTB水平降低,分析IBD患者sTB的水平有助于评估患者疾病活动程度,可为判断UC病变范围提供新的参考指标。

去泛素化酶在炎症性肠病中的研究进展

炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种慢性胃肠道炎症性疾病,包括克罗恩病和溃疡性结肠炎,其发病机制尚不明确。蛋白质泛素化是重要的蛋白质翻译后修饰过程,可参与炎症相关信号通路的调节。靶向去泛素化酶的相关研究可阐明部分IBD信号通路机制。本文就去泛素化酶介导泛素化修饰在IBD中的作用机制研究进展作一综述。

尿路分离利奈唑胺不敏感粪肠球菌耐药机制及毒力基因研究

目的探讨尿液分离利奈唑胺(LZD)不敏感粪肠球菌耐药机制及毒力基因携带情况。方法收集临床中段尿分离粪肠球菌72株,其中利奈唑胺不敏感和敏感菌株分别为23株和49株。采用微量肉汤稀释法检测菌株对常规药物最低抑菌浓度(MIC);采用E-test复核利奈唑胺MIC。采用PCR法结合Sanger测序技术检测23株利奈唑胺不敏感粪肠球菌optrA基因、cfr基因及23S rRNA V区。采用PCR法检测肠球菌6种毒力基因cylA、esp、asa1、hyl、gelE和agg;统计分析LZD不敏感和敏感菌株毒力基因携带情况及差异。结果23株利奈唑胺不敏感粪肠球菌对利奈唑胺MIC分布4~256μg/mL;其中13株检出optrA基因,其余10株未检出;23株菌未检出23S rRNA V区突变及cfr基因。23株LZD不敏感粪肠球菌中21株检出毒力基因,以asa1基因检出率最高(17/23,73.91%),其次为esp(16/23,69.57%)、cylA(13/23,56.52%)、gelE(10/23,43.48%)和agg(4/23,17.39%),未检出hyl基因;49株尿液分离LZD敏感粪肠球菌中48株检出毒力基因,以asa1基因检出率最高(42/49,85.71%),其次为cylA(39/49,79.59%)、esp(38/49,77.55%)、gelE(35/49,71.43%)和agg(10/49,20.41%),未检出hyl基因。利奈唑胺敏感菌株中cylA和gelE基因检出率均高于不敏感菌株,差异有统计学意义(χ^(2)=4.15,5.22,P<0.05),其余基因检出率在2组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论尿液分离利奈唑胺不敏感粪肠球菌中主要由optrA介导耐药;利奈唑胺不敏感粪肠球菌菌株cylA、gelE基因携带率低于敏感菌株。

非小细胞肺癌患者血清细胞外囊泡3′末端2′- O-甲基化修饰miR-21-5p和miR-125a-5p联合诊断的价值

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清细胞外囊泡(EV)中3′末端2′-O-甲基化(3′t-2′Ome)修饰的微小RNA(miR)-21-5p和miR-125a-5p水平的变化, 评估其作为NSCLC患者辅助筛查分子标志物的价值。方法回顾性分析2023年5月1日至 10月31日于东部战区总医院确诊的69例NSCLC患者及65名同期年龄、性别匹配的健康体检对照者资料。采用茎环法和加Poly(A)尾法两种实时荧光定量(RT-qPCR)技术检测NSCLC患者及对照血清EV中3′t-2′Ome-miR-21-5p和3′t-2′Ome-miR-125a-5p表达变化, 分析两种3′t-2′Ome-miRNA水平与患者临床分期、病理分型间差异及其他肿瘤指标的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清EV 3′t-2′Ome-miR-21-5p和3′t-2′Ome-miR-125a-5p及二者联合诊断NSCLC的效能。结果与对照组相比, NSCLC患者血清EV中3′t-2′Ome-miR-21-5p水平较高, 3′t-2′Ome-miR-125a-5p水平较低[(0.30±0.05)比(0.35±0.09), t=3.32, P=0.001;(0.33±0.06)比(0.25±0.06), t=7.45, P<0.001], 差异均有统计学意义。EV中3′t-2′Ome-miR-21-5p水平在NSCLC42例0~Ⅱ期患者、56例腺癌患者、12例鳞癌患者中表达水平均升高, 且腺癌和鳞癌患者间差异有统计学意义[(0.34±0.85)比(0.40±0.12), P<0.05];ROC曲线分析结果显示, 血清EV中3′t-2′Ome-miR-21-5p、3′t-2′Ome-miR-125a-5p水平及二者联合用于诊断NSCLC患者AUC分别为0.647(95%CI 0.550~0.743)、0.825(95%CI 0.756~0.894)和0.860(95%CI 0.797~0.923), 敏感度分别为92.3%、80.0%、89.2%, 特异度分别为46.4%、73.9%、78.3%。结论 NSCLC患者血清EV中存在2′Ome-miR-21-5p和2′Ome-miR-125a-5p水平变化, 二者联合检测具备作为NSCLC患者辅助筛查分子标志物的潜能。

溃疡性结肠炎患者血清高迁移率族蛋白B1水平的变化及其临床意义

目的探讨溃疡性结肠炎患者血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平的变化及其临床意义。方法采用ELISA法检测75例溃疡性结肠炎患者(溃结组)和75例健康体检者(对照组)血清HMGB1水平,应用ROC曲线评估其对溃疡性结肠炎的诊断价值。结果溃结组血清HMGB1水平高于对照组[4.126(1.711,6.104)ng/mL vs.0.440(0.324,1.078)ng/mL](P<0.01)。血清HMGB1诊断溃疡性结肠炎的AUC为0.906[95%CI(0.861~0.951)];取截断值0.680 ng/mL时,其诊断溃疡性结肠炎的灵敏度和特异度分别为77.3%和90.7%。结论溃疡性结肠炎患者血清HMGB1水平升高,其可作为溃疡性结肠炎潜在的辅助诊断指标。