中医药治疗糖尿病胃轻瘫作用机制的研究现状

中医药在糖尿病胃轻瘫(DGP)的临床防治实践中具有一定的特色和优势。本文通过对近年来关于中医药治疗DGP的国内外研究进行整理和综述,发现中医药可以通过调节Cajal间质细胞、肠神经系统、胃肠激素、肠道菌群等方面发挥作用。本文从上述几个方面对中医药治疗DGP的作用机制研究进展进行论述,为DGP的防治提供思路和科学依据。

基于Wnt/β-Catenin信号通路探讨吴门骨密葆方含药血清促进间充质干细胞成骨分化的效应机制

目的基于Wnt/β-连环蛋白(β-Catenin)信号通路研究吴门骨密葆方含药血清促进骨髓间充质干细胞成骨分化机制。方法将大鼠骨髓间充质干细胞为正常血清组、经典诱导剂[间充质干细胞成骨诱导分化培养基(OBM)]组、吴门骨密葆方含药血清低(10 g生药/kg)和高剂量(20 g生药/kg)组、抑制剂[分泌型蛋白Dickkopf-1(DKK-1),0.1 ng·mL-1]组以及吴门骨密葆方含药血清低、高剂量+抑制剂组,成骨诱导分化后干预7 d时采用CCK8法检测细胞活力,随后采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色法和ALP试剂盒检测不同剂量吴门骨密葆方含药血清及加入Wnt/β-Catenin信号通路特异性阻滞剂DKK-1干预的间充质干细胞ALP染色强度和活性,Western Blot测定间充质干细胞Wnt信号蛋白家族3alpha(Wnt3a)、β-Catenin、糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)、破骨细胞抑制因子(osteoprotegerin,OPG)和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)蛋白表达水平。结果与正常组比较,吴门骨密葆方含药血清干预均可有效促进间充质干细胞增殖(P均<0.05),吴门骨密葆方含药血清可有效促进间充质干细胞ALP染色的强度和活性(P均<0.05),以及调控成骨分化相关的Wnt3a、β-Catenin、GSK3β、OPG和RANKL蛋白表达(P均<0.05),但是这些调控作用均可被DKK-1在一定程度上逆转。结论吴门骨密葆方含药血清诱导骨髓间充质干细胞的成骨分化,可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路以及影响OPG/RANKL通路而实现。

白花蛇舌草抗炎机制的网络药理学分析及实验研究

目的:基于网络药理学分析及实验研究验证探究白花蛇舌草潜在的抗炎靶点。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)筛选符合条件的活性成分及相关作用靶点,并取得成分靶点和抗炎靶点的交集,构建靶点间的PPI网络图,Metascape平台对关键靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,AutoDock软件对关键成分及靶点进行分子对接。通过小鼠耳缘肿胀和扭体实验模型,进行药效学观察,酶联免疫吸附试验法检测网络药理学涉及部分关键靶点。结果:共筛得相关活性成分6个,匹配到相关靶点信息173个,获得成分和疾病交集靶点99个,潜在治疗靶点有AKT1、IL-6、TNF、VEGFA、PTGS2等,主要参与TNF信号通路发挥抗炎作用。分子对接结果显示,β-谷甾醇,Poriferasterol、2-methoxy-3-methyl-9,10-anthraquinone、豆甾醇与靶点结合性较强。动物实验验证了白花蛇舌草干预后可减轻小鼠耳肿胀度和减少扭体次数,降低血清中肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6因子水平。结论:白花蛇舌草具有抗炎效应,主要与抑制肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6等因子有关,网络药理学结果还显示白花蛇舌草中β-谷甾醇、Poriferasterol、2-methoxy-3-methyl-9,10-anthraquinone和豆甾醇等成分可能通过AKT1、IL-6、TNF、VEGFA等关键靶点作用于TNF信号通路发挥抗炎作用。

注意缺陷多动障碍儿童盐酸哌甲酯用药特征及趋势分析

目的:分析近5年来某儿童医院注意缺陷多动障碍(ADHD)患儿盐酸哌甲酯缓释片(MPH)处方特征及药物消耗趋势。方法:研究2018年至2022年ADHD患儿的MPH处方,对患儿的性别差异、年龄、单次取药量、就诊间隔及药物消耗模式进行分析。依据SPSS时间-序列模型对未来两年MPH的消耗量进行预测。结果:男女患儿的处方性别比由2018年的5.99下降为2022年的5.33;患儿平均就诊年龄约为10岁;2020年以后患儿就诊量大幅增加,2022年就诊人次是2018年的3.05倍;2022年MPH药物总DDDs是2018年的3.24倍。结论:近5年来苏州某儿童医院ADHD就诊量及MPH药物消耗量均呈上涨的趋势。

葛根芩连汤在糖尿病患者中的治疗效果及对证候积分和胰岛功能的影响研究

目的探讨葛根芩连汤在糖尿病患者中的治疗效果及对证候积分和胰岛功能的影响。方法选取2021年3月—2022年6月苏州市中西医结合医院诊治的糖尿病患者68例为研究对象,依据随机抽签法分为两组,各34例。对照组给予基础干预+二甲双胍治疗,研究组在对照组的基础上联合葛根芩连汤治疗。对比两组治疗效果、中医证候积分、糖脂代谢及胰岛功能改善情况。结果研究组治疗总有效率为91.18%,高于对照组的64.71%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组口渴多饮、多食善饥、小便频数、疲乏无力的中医证候积分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组HbA1c、FPG、2 hPG、TC水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组胰岛功能改善情况优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论糖尿病患者给予葛根芩连汤治疗效果显著,可改善患者临床中医证候积分、糖脂代谢及胰岛功能。

中药干预糖尿病胃轻瘫胃肠动力信号通路的研究进展

结合近五年糖尿病胃轻瘫的基础实验研究,对中药干预糖尿病胃轻瘫的的胃肠动力信号通路研究进行综述。发现干细胞因子/酪氨酸激酶信号通路、Ras同源A蛋白/RhoA相关蛋白激酶RhoA/ROCK等多条信号通路参与了糖尿病胃轻瘫的发生和发展过程;中药治疗糖尿病胃轻瘫疗效确切,具有多角度多靶点优势,但缺乏物质基础研究,需要开展符合辨证论治和遣方用药规律的物质基础和作用机理研究,以期为临床有效治疗糖尿病胃轻瘫提供思路。

基于TGF-β1/Smad3信号通路研究肾炎1号方对单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化的改善作用

目的研究肾炎1号方通过TGF-β1/Smad同源物3(Smad3)通路调控铁死亡对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾纤维化的保护作用及相关机制。方法将48只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、肾炎1号方低(10 g生药/kg)、高(20 g生药/kg)剂量组,每组12只。除假手术组外,其余各组大鼠均采用梗阻单侧输尿管的方法复制UUO大鼠模型。造模完成后,各组灌胃相应药物或双蒸水,1次/d,连续4周。4周后,称重并测量左肾重量,采用生化分析法测定大鼠24 h尿蛋白定量和血清ALB、ALT、SCr、BUN水平;采用化学荧光测定试剂盒测定肾组织活性氧(ROS)水平,采用ELISA法测定大鼠左肾组织SOD、MDA水平;通过HE和普鲁士蓝染色法分别观察肾组织形态和含铁血黄素特异性蓝染情况;Western blot检测肾组织中TGF-β1、Smad3、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族1成员5(SLC1A5)表达。结果与模型组比较,肾炎1号方高剂量组24 h尿蛋白定量降低(P<0.05),血清ALB水平升高(P<0.05),ALT水平降低(P<0.05),肾组织SLC1A5表达降低(P<0.05);肾炎1号方低、高剂量组左肾重量/体重降低(P<0.05);血清ROS、MDA水平降低(P<0.05),SOD活性明显升高(P<0.05);肾组织TGF-β1、Smad3表达降低(P<0.05),GPX4表达升高(P<0.05),并能改善肾组织病理损伤及铁离子沉积。结论肾炎1号方可能通过TGF-β1/Smad3通路调控铁死亡而抑制UUO大鼠肾纤维化,从而保护肾组织结构和功能。

中药防风抗肝癌作用及机制的网络药理学和细胞实验研究

目的:应用网络药理学和细胞实验,探究中药防风提取液的抗肝癌效应及可能机制,为防风在抗肝癌的临床应用提供依据。方法:应用网络药理学方法筛选防风抗肝癌的有效成分及相应靶点,并建立“药物-成分-靶点”可视化网络;采用富集分析筛选信号通路;利用Autodock Vina软件验证效应成分与肝癌相关靶点结合力,MTT法测定细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测相关蛋白表达。结果:通过多种数据库共筛选得到防风抗肝癌的15种有效成分和AKT1、CASP3、TP53、JUN、IL-6前5个核心靶点基因。富集分析显示细胞凋亡通路尤为集中。前5位的有效成分与核心靶点对接,结果显示其结合能均小于-20.92 kJ·mol-1。与空白对照组比较,24和48 h时防风提取液对HepG-2细胞的抑制率随浓度升高而增大;细胞凋亡率亦升高;同时促使Caspase-3蛋白磷酸化,提高Bax/Bcl-2比值。结论:防风提取液可抑制人肝癌细胞HepG-2的增殖,诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡,且呈剂量、时间依赖性,其作用机制可能是通过上调HepG-2细胞内Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白并促进Caspase-3蛋白磷酸化发挥作用。

清肝益脾胶囊对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的保护作用及对肠道菌群的影响

目的:研究清肝益脾胶囊(Qinggan Yipi Capsules,简称QgYp)对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化(hepatic fibrosis, HF)的保护作用,并初步探讨其通过调节肠道菌群改善HF的机制。方法:36只SD大鼠随机分成正常组、模型组、QgYp低剂量组、QgYp中剂量组、QgYp高剂量组和秋水仙碱组,腹腔注射四氯化碳油溶液构建HF大鼠模型,第4周后给予药物干预直至第8周;采用HE、Masson染色,光镜下观察病理变化;采用全自动生化分析仪检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)含量;采用ELISA检测血清透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)含量。另取24只SD大鼠随机分为正常组、模型组、QgYp中剂量组,同上方法建模与给药,于8周后收集盲肠内容物,采用16S rRNA测序技术检测肠道菌群。结果:与模型组相比,QgYp各组大鼠肝脏系数显著降低(P<0.05),肝组织纤维病变和胶原纤维沉积显著改善(P<0.05);QgYp中剂量组、QgYp高剂量组ALT、AST、HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C含量显著降低(P<0.05),且2组差异无统计学意义(P>0.05)。肠道菌群检测结果显示,QgYp可增加HF大鼠肠道菌群的丰富度和多样性,改变肠道菌群组成(P<0.01),增加有益菌g__norank_f__norank_o__Clostridia_UCG-014、阿克曼氏菌属的丰度占比,降低有害菌罗姆布茨菌属、经黏液真杆菌和狭义梭菌属1的丰度占比。结论:QgYp可改善四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化,其机制与调节肠道菌群多样性和丰度相关。

腹腔和皮下注射CCl4致大鼠肝纤维化2种造模方法的比较及自愈性研究

目的:探究腹腔和皮下注射CCl4建立大鼠肝纤维化模型的成模和自愈情况,确定较优的造模方法。方法:40只大鼠随机分成4组[正常对照组、腹腔注射低剂量组、腹腔注射高剂量组(下称“腹低组”“腹高组”)、皮下注射组(下称“皮下组”)]。不同注射方式给予不同剂量CCl4,于4、6、8周末分别处死大鼠。HE、Masson染色观察肝脏病理变化,试剂盒检测AST、ALT、LN和PCⅢ水平,Western blot检测α-SMA蛋白表达。结果:同正常对照组相比,腹低组和腹高组4周末肝组织病理改变明显加重,肝脏系数、纤维化阳性面积、AST、ALT、LN、PCⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01),2组间无明显差异(P>0.05)。停止注射CCl44周后,相应指标有明显改善(P<0.05,P<0.01),但与正常对照组相比,仍有明显差异(P<0.05,P<0.01)。同正常对照组相比,皮下组4周末组织病理及相关指标无明显差异(P>0.05);6、8周末组织病理及相关指标有明显变化(P<0.01),程度略强于4周末腹高组。结论:2种注射方式均可建立肝纤维化模型,其中腹腔组成模时间优于皮下组;腹腔组高低剂量间成模情况无差异,停止注射CCl44周后存在自愈性。

吴门抑激散对腹泻型肠易激综合征大鼠肠道、下丘脑5-羟色胺信号传导系统的调控作用研究

目的:研究吴门抑激散对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠肠道、下丘脑5-羟色胺(5-HT)信号传导系统的调控作用。方法:将60只SD雄性大鼠按随机数字表法分为空白组(10只)、腹泻型肠易激综合征组(50只),腹泻型肠易激综合征组经番泻叶灌胃+束缚应激2周后形成IBS-D模型,将其按随机数字表法分为模型组、得舒特组(1.5 mg/kg)、吴门抑激散低剂量组(6 g生药/kg)、吴门抑激散中剂量组(12 g生药/kg)和吴门抑激散高剂量组(24 g生药/kg),每组10只。连续给药2周后,采用ELISA法检测大鼠血清、结肠和下丘脑组织中5-HT含量;HE染色法观察各组大鼠结肠病理改变;采用Western blot法和RT-PCR法分别检测结肠和下丘脑组织中色氨酸羟化酶1(TPH-1)、5-羟色胺受体3(5-HT3R)、5-羟色胺受体4(5-HT4R)、5-羟色胺转运体(SERT)蛋白和mRNA水平。结果:与模型组比较,各给药组结肠病理形态有所改善;与模型组比较,吴门抑激散中、高剂量组大鼠血清、结肠5-HT水平降低(P<0.05),下丘脑5-HT水平升高(P<0.05);吴门抑激散中、高剂量组结肠TPH-1、5-HT3R、5-HT4R蛋白表达降低(P<0.05)、SERT蛋白表达升高(P<0.05);吴门抑激散高剂量组下丘脑TPH-1、5-HT3R、5-HT4R蛋白表达升高(P<0.05)、SERT蛋白表达降低(P<0.05);吴门抑激散低、中、高剂量组结肠TPH-1 mRNA[(4.778±0.604)、(3.278±0.668)、(1.670±0.361)比(6.877±0.148)]、5-HT3R mRNA[(3.807±0.463)、(2.697±0.455)、(1.132±0.136)比(6.322±0.778)]、5-HT4R mRNA[(4.521±0.234)、(2.801±0.351)、(1.331±0.142)比(6.741±0.293)]水平降低(P<0.05);吴门抑激散中、高剂量组下丘脑5-HT4R mRNA[(0.616±0.208)、(0.726±0.226)比(0.521±0.062)]水平升高(P<0.05),吴门抑激散高剂量组SERT mRNA[(1.563±1.023)比(2.612±1.035)]水平降低(P<0.05)。结论:吴门抑激散在一定剂量范围内可双向调节IBS-D大鼠结肠和下丘脑组织中5-HT信号传导系统相关蛋白和mRNA表达,从而改善IBS-D症状。

鲜半枝莲高效液相色谱指纹图谱的建立及10种黄酮类成分含量测定

目的:建立新鲜半枝莲药材高效液相指纹图谱,并测定10种黄酮类成分的含量作为其质控标准。方法:采用HPLC法,应用Agilent Extend-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-甲酸水溶液(pH 2.5)为流动相进行梯度洗脱,流速0.8 mL·min^(-1),检测波长280 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果:建立了10批新鲜半枝莲药材的指纹图谱,得到57个共有峰,并指认了10个成分峰,分别是野黄芩苷、圣草酚、黄芩苷、野黄芩素、柚皮素、木犀草素、汉黄芩苷、芹菜素、黄芩素、汉黄芩素,相似度在0.932~0.992之间。10种成分在各自浓度范围内呈良好的线性关系(R^(2)≥0.9991),平均加样回收率为91.22%~116.75%,RSD为0.80%~4.02%。结论:该方法稳定可行,重复性好,并能同时测定10种黄酮类成分,可作为新鲜半枝莲药材的质控方法。