茵陈对阿霉素诱导的NRK-52e细胞凋亡的保护作用研究

目的 探究茵陈水提物冻干粉(freeze-dried powder of Artemisia Capillaris Thunb. water extract, WAC)对阿霉素(adriamycin, ADR)诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52e)损伤的保护作用。方法 ADR(1μg·mL^(-1))体外诱导NRK-52e损伤,通过加入不同质量浓度的WAC(1、2、4 mg·mL^(-1))作用后,分别采用形态学观察、细胞增殖毒性检测法(CCK-8法)检测WAC对细胞的保护作用,通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TUNEL)染色法以及蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞凋亡的表达水平。结果 与空白组比较,给予ADR干预后,NRK-52e细胞数目明显减少,间隙明显增大,形态皱缩变形,同时漂浮在培养液中的损伤细胞明显增加,细胞活性明显降低(P<0.01),TUNEL法检测凋亡率明显增加(P<0.01),能诱导相关凋亡蛋白Bcl-2/Bax表达明显降低(P<0.01)、Cleaved Caspase-3/Caspase-3显著提高(P<0.01),并且伴随一定的剂量依赖性。与模型组相比,在加入不同质量浓度的WAC(1、2、4 mg·mL^(-1))后,能减弱ADR(质量浓度为1μg·mL^(-1))诱导的细胞形态改变,细胞活性显著提高(P<0.05,P<0.01),TUNEL法检测凋亡率明显降低(P<0.01),检测凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax表达明显升高(P<0.01)、Cleaved Caspase-3/Caspase-3表达明显降低(P<0.01),均呈现一定的剂量依赖性。结论 WAC能抑制ADR诱导的肾小管细胞凋亡而发挥保护作用,作用机制可能与线粒体途径有关。

凉血通瘀方对脑出血大鼠肠黏膜屏障修复及神经功能改善作用的研究

目的:探究凉血通瘀方对脑出血大鼠肠黏膜屏障的组成结构、选择通透性以及神经功能的影响。方法:将30只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、凉血通瘀组和益生菌组。除正常组和假手术组外,其余各组大鼠通过注射泵控制器注血/二次退针法建立脑出血模型。造模成功后,凉血通瘀组给予凉血通瘀方药液灌胃,益生菌组给予双歧杆菌三联活菌制剂灌胃,每日1次,连续3 d。治疗结束后,采用ELISA法检测肠黏膜屏障蛋白Occludin、Claudin-1、ZO-1的表达水平及血清中LPS、DAO、DLA的含量。结果:与模型组比较,凉血通瘀组行为学评分显著下降(P<0.01),益生菌组评分改变不明显(P>0.05)。与正常组比较,模型组Occludin、Claudin-1、ZO-1蛋白的表达水平显著降低(P<0.01),血清LPS、DAO、DLA的含量显著增加(P<0.01);凉血通瘀组和益生菌组Claudin-1、ZO-1蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),血清LPS、DAO、DLA的含量明显增加(P<0.05)。与假手术组比较,模型组Claudin-1、ZO-1蛋白的表达水平显著降低(P<0.01),血清LPS、DAO、DLA的含量显著增加(P<0.01),凉血通瘀组ZO-1蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),血清LPS、DAO、DLA的含量显著增加(P<0.01);益生菌组血清LPS的含量显著升高(P<0.01)。与模型组比较,凉血通瘀组Claudin-1、ZO-1蛋白的表达水平明显上升(P<0.05),益生菌组Occludin、Claudin-1、ZO-1蛋白的表达水平均显著上升(P<0.01)。与模型组比较,凉血通瘀组与益生菌组血清LPS、DAO、DLA的含量显著降低(P<0.01)。与凉血通瘀组比较,益生菌组血清DLA的含量显著降低(P<0.01)。结论:凉血通瘀方与益生菌制剂均可有效提高肠黏膜屏障紧密连接蛋白Occludin、Claudin-1和ZO-1的表达水平,改善肠黏膜通透性,减少LPS、DAO及DLA等有害物质入血,且益生菌制剂稍优于凉血通瘀方。但在改善脑出血后的神经功能缺损症状方面,凉血通瘀方疗效更为确切。

“易层”贴敷调控巨噬细胞M2型极化促进DRG神经元自噬缓解KOA冷痛敏的机制研究

目的研究“易层”贴敷(YC)改善膝骨关节炎(KOA)冷痛敏的作用及机制。方法用IL-4处理骨髓来源的巨噬细胞成功构建M2型巨噬细胞模型。将60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术(Sham)组、KOA组、M2型巨噬细胞鞘内注射(M2-II)组、M2型巨噬细胞鞘内注射+“易层”贴敷(M2-II+YC)组,每组15只。KOA模型通过内侧半月板失稳术(DMM)构建,造模成功后,M2-II组和M2-II+YC组予以鞘内注射M2型巨噬细胞,M2-II+YC组使用“易层”贴敷28天,给药完成后提取各组背根神经节(DRG)组织。采用冷板实验和丙酮低温实验进行冷痛行为学检测;免疫荧光法检测小鼠DRG组织中CGRP、PGP9.5、c-Fos和M2型巨噬细胞标志物荧光强度;Western blot和qPCR检测巨噬细胞CD206、Arg-1和DRG组织TRPA1、TRPM8、LC3B、Beclin1、P62蛋白和基因表达量。结果与KOA组比较,M2-II组和M2-II+YC组小鼠冷板实验和丙酮低温实验所测定的冷痛阈值均明显提高(P<0.05,P<0.01);DRG组织中疼痛标志物CGRP、PGP9.5和c-Fos平均荧光强度明显降低(P<0.001);冷痛伤害感受器TRPA1、TRPM8蛋白和基因表达明显降低(P<0.01,P<0.001);M2表型CD206和Arg-1蛋白荧光强度明显升高(P<0.01,P<0.001);DRG神经元自噬LC3B、Beclin1和P62蛋白和基因表达明显升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001);与M2-II组比较,M2-II+YC组小鼠上述各指标均明显改善(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论“易层”贴敷可能通过调控巨噬细胞M2型极化促进DRG神经元自噬,发挥对KOA小鼠冷痛敏的抑制作用。