不育患者精子活力与精浆及精子核DNA完整性关系的初步研究

目的探讨不育患者精子活力与精浆及精子DNA完整性的关系。方法50例男性不育患者,按a+b级活力分为2组,a+b级精子百分率≥50%为Ⅰ组,<30%为Ⅱ组,Ⅰ组25例,Ⅱ组25例。各组精液分成两部分,一部分用于两组间精浆互换,另一部分用作各自的对照。精浆互换后37℃温育40min、90min,用计算机辅助精液分析系统(CASA)分析精浆互换前后及其对照组的a+b级精子百分率。同时检测这些患者的精浆α-葡糖苷酶、酸性磷酸酶和果糖含量,并用吖啶橙荧光染色检测随机抽取的40名患者精子核DNA的完整性。结果Ⅰ组与Ⅱ组精浆置换后,温育40min和90min时Ⅰ组的精浆置换组精子活力为27.5±18.7、25.8±17.1,比相应的对照组33.9±17.3、26.0±15.6降低;Ⅱ组的精浆置换组精子活力为16.7±11.6、14.4±10.5,比相应的对照组12.2±8.7、11.2±9.3升高;两组的精浆置换组与相应的对照组的精子活力均随着温育时间的延长而降低,但均无统计学意义。精浆果糖、酸性磷酸酶与精子活力间没有相关性,而精浆α-葡糖苷酶与Ⅰ组的精子活力呈正相关。精子活力与精子核DNA的完整性呈正相关性。结论精子活力主要与精子结构有关,精浆成分也是决定精子活力的一个因素。

氧化、丙二醛修饰低密度脂蛋白的ELISA检测法及临床应用

目的建立血浆氧化、修饰低密度脂蛋白(LDL)ELISA检测法并进行临床研究。方法采用自制的多克隆抗体建立ELISA分别测定铜离子氧化型(Ox)和丙二醛(MDA)修饰型LDL,并对方法进行考核;对冠心病(CHD)患者、键康对照人群Ox-LDL、MDA-LDL水平进行分析。结果抗Ox-LDL与MDA-LDL几乎没有反应性;Ox-LDL和MDA-LDL测定平均批内变异(CV)分别为6.1%和6.8%,平均批间CV分别为9.7%和10.1%;Ox-LDL和MDA-LDL测定平均回收率分别为95.1%和93.7%;两法检测限均为:0.05～1.5mg/L。CHD患者较正常人血浆Ox-LDL[(178.1±73.8)mg/Lvs.(82.7±29.1)mg/L,P<0.01]、MDA-LDL[(48.7±25.6)mg/Lvs.(39.2±32.9)mg/L,P<0.05]水平均升高;Ox-LDL作为预测动脉粥样硬化发生指标的价值优于MDA-LDL。Ox-LDL、MDA-LDL分别同TC、TG、LDL-C呈正相关,而与HDL-C呈负相关。结论建立的方法特异、灵敏、准确,适于临床检测。高Ox-LDL、MDA-LDL与CHD密切相关。

异位妊娠患者血清β-HCG、孕酮及抑制素-A水平变化及其临床意义

异位妊娠（ectopic pregnancy,EP）是指受精卵在子宫体腔以外着床,是妇产科常见的急腹症,近年来患病率呈明显上升趋势。目前,EP的早期诊断主要依靠阴道超声检查和β-人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）的检测[1],但对于妊娠早期的孕妇,即使提高阴道超声的分辨率,

联合检测抑制素A、CA125与CA153在卵巢癌中的表达及临床意义

目的探讨联合检测血清抑制素A(INH-A)、CA125与CA153水平对卵巢癌早期诊断的价值。方法采用全自动化学发光免疫分析法(CLIA)检测卵巢癌组40例,卵巢良性疾病组30例,对照组30名健康女性的血清INH-A、CA125与CA153水平。结果卵巢癌组血清INH-A、CA125与CA153水平明显高于卵巢癌组和卵巢良性疾病组,差异有统计学意义(P<0.05);三项标志物的阳性率分别为52.5%,60.0%,72.5%,三项联合检测的阳性率为82.5%。卵巢癌组血清INH-A水平高于卵巢良性疾病组和对照组,提示INH-A异常表达可能与卵巢癌的发生密切相关。结论 INH-A可能作为诊断卵巢癌的一项肿瘤标志物,联合检测有助于早期诊断卵巢癌以及病情监测。

血清抑制素-A水平与异位妊娠的相关性研究

目的探讨异位妊娠患者血清中抑制素-A(INH-A)的水平变化及临床意义。方法采用全自动化学发光免疫分析(CLIA)法对异位妊娠50例(观察组),正常孕妇50例(对照组)血清中INH-A、β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)及孕酮水平进行检测。结果与对照组相比,观察组血清中INH-A(3.6±1.4)、β-HCG(308.5±57.9)、孕酮(29.8±9.4)的水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论血清INH-A对异位妊娠的早期诊断和治疗起到积极的辅助作用。

儿童肾病综合征患者血清视黄醇结合蛋白4水平与氧化低密度脂蛋白的关系研究

目的探讨儿童肾病综合征(NS)患者血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)水平的变化及其与氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的关系。方法分别检测118例NS患儿和45名健康体检儿童(正常对照组)血清RBP4水平,同时测定其血清ox-LDL、白蛋白(Alb)、血脂[包括总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及非高密度脂蛋白胆固醇(non HDL-C)]及肾功能指标[尿素(Urea)、肌酐(Cr)],并做统计学分析。结果 NS组血清RBP4水平为(55.88±27.36)mg/L,明显高于正常对照组[(30.61±8.68)mg/L](P<0.01),且血清RBP4与ox-LDL、TC、TG、LDL-C、non HDL-C及Urea呈明显正相关[相关系数(r)分别为0.30、0.35、0.25、0.29、0.32、0.26,P均<0.01];进一步多元回归分析显示,NS组TC(β=0.62,P<0.01)、Urea(β=0.26,P<0.01)和ox-LDL(β=0.20,P<0.05)水平共同影响了48.4%的RBP4的变化,且RBP4也是NS患儿ox-LDL水平的决定因素之一。结论 NS患儿血清RBP4水平明显升高。升高的RBP4与ox-LDL的增加有一定的关联,可能促进了NS的发生、发展。

他达拉非治疗勃起功能障碍的安全性研究

环磷酸鸟苷(cGMP)信号通路介导的一氧化氮平滑肌舒张效应是正常勃起功能的必要条件。这个信号通路的下调能引起勃起功能障碍(erectile dysfunction,ED)的许多病理生理状况,并导致一些慢性疾病的发生,比如高血压和2型糖尿病。因此,选择性抑制cGMP降解酶能够促进性刺激的勃起反应。最近,一种新型的5-磷酸二酯酶(PDE-5)抑制剂他达拉非问世,该药有很长的半衰期。本文对其治疗ED的安全性研究进行了综述。

全自动阅片机测定血小板计数方法的可行性研究

目的探讨CELLDIFF BCM-2全自动阅片机测定血小板(PLT)计数与Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪、手工计数法检测结果的可比性。方法随机选择300例抗凝全血,首先采用全自动血细胞分析仪阻抗法测定PLT值,按PLT数值将其分为低、中、高3组,再通过全自动阅片机计数法分别检测3组标本的PLT值,同时与血细胞分析仪光学法的测定结果进行比较,最后以手工法作为参考方法对上述方法的PLT计数结果进行初步评价。结果在低、中、高PLT组中,阅片机计数法检测的PLT值与光学法的计数结果的差异无统计学意义(P>0.05),但与阻抗法的计数结果相比,仅在中PLT组的差异无统计学意义(P>0.05);所有标本采用阅片计数法检测的PLT值与阻抗法(r=0.989,P<0.001)、光学法(r=0.992,P<0.001)、手工法(r=0.986,P<0.001)的计数结果均呈显著正相关。阅片计数法测定PLT可同时观察大PLT和PLT聚集的存在。结论全自动阅片机测定PLT计数与全自动血细胞分析仪的阻抗法、光学法及手工法检测结果均具有高度相关性,能同时观察大PLT和PLT聚集现象,具有良好的临床应用价值。

甲胎蛋白异质体在肝细胞癌中临床应用

目的评价甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在肝细胞癌(HCC)中的临床应用。方法收集本院2011年8月至2012年4月住院、门诊患者及健康体检者血清,检测血清中AFP总含量,再应用微量离心柱法分离检测AFP-L3的百分含量。结果以AFP-L3>10%作为阳性判断标准,68例肝癌患者血清AFP-L3阳性率为75.0%,45例肝硬化患者血清AFP-L3阳性率为2.2%,51例慢性肝炎患者血清AFP-L3阳性率为5.9%,60例体检者血清AFP-L3阳性率为0,肝癌患者AFP-L3水平明显高于肝硬化,慢性肝炎及健康人群(P<0.01)。结论 AFP-L3是肝细胞癌鉴别诊断的有用指标,且与AFP联合检测更有利于肝细胞癌的诊断。

抗人Id3蛋白多克隆抗体的制备及其在肿瘤细胞内的定位研究

目的:表达及纯化重组人分化抑制因子3(Id3)蛋白,制备兔抗人Id3多克隆抗体。方法:在大肠杆菌BL21(DE3)中表达并纯化重组人Id3融合蛋白,以纯化Id3重组蛋白为免疫原,免疫新西兰家兔,制备兔抗人Id3多克隆抗体,通过亲合层析实验去除抗血清中非特异性成分,免疫双向扩散、间接ELISA及Western blot法检测抗体效价和特异性。用间接免疫荧光试验(IFA)对人乳腺上皮癌细胞(MCF7)、人前列腺癌细胞(PC-3M)、人肺腺癌细胞(A549)细胞内Id3表达进行定位研究。结果:SDS-PAGE电泳、Western blot分析证实,表达载体Id3/pET-32a在大肠杆菌BL21中经诱导可大量表达His-Tag Id3融合蛋白;表达产物通过镍离子亲和层析法纯化得到相对分子质量(Mr)为34 000的Id3融合蛋白;Id3重组蛋白免疫家兔获得的抗血清效价分别为1∶8(双向扩散)和1∶8 000(ELISA),Western blot分析表明抗体具有抗人Id3的良好特异性。IFA结果发现,A549细胞内Id3表达量很低;在MCF7和PC-3M细胞内,Id3呈高水平表达,且主要定位于核浆。结论:重组人Id3蛋白的表达纯化及抗人Id3多克隆抗体的研制为进一步研究该蛋白的功能及其临床应用研究提供了有利工具。

用兔抗人分化抑制因子3抗体建立双抗体夹心ELISA法及初步临床应用

目的制备兔抗人分化抑制因子3(Id3)多克隆抗体,建立检测血清Id3的双抗体夹心ELISA技术。方法用纯化的Id3重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗Id3多克隆抗体,通过多肽亲和层析柱去除非特异性成分,免疫细胞化学染色、免疫双向扩散及间接ELISA法检测抗体特异性和效价。制备辣根过氧化物酶(HRP)标记抗Id3,以纯化Id3重组蛋白为标准抗原制备标准曲线,建立定量检测人Id3的双抗体夹心ELISA法。结果免疫细胞化学染色显示,制备的兔抗血清能与人Id3蛋白特异性结合,所得兔抗血清效价分别为1∶8(琼脂双向扩散)和1∶8000(ELISA)。ELISA法的包被抗体和酶标记抗体的工作浓度分别为5μg/ml和1∶4000,标准曲线为Y=0.0793+0.0188X,r=0.997。检测线性范围为2～64U/ml,平均回收率为98.2%,批内平均变异系数(CV)为4.4%,批间平均CV为7.2%。该方法可用于人血清Id3含量的检测。结论兔抗人Id3多克隆抗体的制备及夹心ELISA法的建立为今后研究Id3蛋白的功能及其在临床和基础医学中的应用奠定了基础。

微小核糖核酸与肾细胞癌关系的研究进展

微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类在转录后水平调节基因表达的小的非编码核糖核酸分子,参与生物体内多种生理病理过程,与肿瘤的发生、发展密切相关。研究发现,一些miRNAs在肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)患者样本中异常表达,提示miRNA在RCC的发病机制中发挥重要作用。本文就miRNAs与RCC关系的研究进展作一综述。

国家级“临床免疫学新技术应用进展”与“侵袭性真菌病的实验室诊断”继续教育培训班报名通知

南京军区南京总医院全军临床检验医学研究所将于2011年9月15～19日和9月19～23日先后在江苏省南京市举办全国＂临床免疫学新技术应用进展继续教育高级培训班＂[项目编号2011-11-00-141（国）]与全国＂侵袭性真菌病的实验室诊断培训班＂[项目编号2011-11-00-142（国）]。学习班将聘请国内从事检验诊断、临床免疫学、临床微生物学检验及与侵袭性真菌感染相关的知名专家作专题讲座，

国家级“临床免疫学新技术应用进展”与“侵袭性真菌病的实验室诊断”继续教育培训班报名通知

南京军区南京总医院全军临床检验医学研究所将于2011年9月15～19日和9月19～23日先后在江苏省南京市举办“临床免疫学新技术应用进展”与“侵袭性真菌病的实验室诊断”国家级继续教育培训班。学习班将聘请国内知名专家作专题讲座，并组织学员进行实验。参加学习者每个项目将授予国家级I类继续医学教育学分各10分。

γ干扰素对低密度脂蛋白免疫复合物诱导U937细胞基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的:探讨γ干扰素(IFN-γ)对低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)诱导U937细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达的影响。方法:采用不同浓度的LDL-IC诱导不同浓度的IFN-γ预处理的U937细胞,通过RT-PCR分析MMP-1 mRNA表达水平的变化。结果:正常U937细胞MMP-1表达量低。LDL-IC可增强U937细胞MMP-1mRNA的表达,而单独IFN-γ处理对MMP-1表达无影响;LDL-IC对经IFN-γ预处理的U937细胞作用效果较未经处理的更强(P<0.01),并具剂量效应。结论:IFN-γ可增加LDL-IC诱导的U937细胞MMP-1表达,加速动脉粥样硬化的发生、发展。

血清妊娠相关蛋白A检测对异位妊娠早期诊断的价值

目的探讨异位妊娠患者血清中妊娠相关血浆蛋白A(pregnancy-associated plasma protein-A,PAPP-A)水平变化及临床意义。方法血清PAPP-A、抑制素-A(inhibin-A,INH-A)、β-绒毛膜促性腺激素(β-HCG)及孕酮(P)测定均采用全自动化学发光免疫分析法。分别检测异位妊娠78例(观察组)、正常孕妇80例(对照组)血清中PAPP-A、INH-A、β-HCG及孕酮水平。结果观察组血清PAPP-A(20.8±6.6)m IU/L,INH-A(4.6±2.1)pg/m L,β-HCG(2512.4±155.3)IU/L、孕酮(33.2±8.7)nmol/L。对照组血清PAPP-A(102.2±25.3)m IU/L,INH-A(36.7±3.1)pg/m L,β-HCG(12133.5±2208.3)IU/L,孕酮(101.3±26.6)nmol/L。观察组指标明显低于对照组(P<0.01)。PAPP-A与INH-A、β-HCG及孕酮均水平为正相关,相关系数(r)分别为0.491、0.503、0.482(P均<0.05)。结论血清妊娠相关蛋白A检测有助于异位妊娠的早期诊断和治疗。

糖尿病患者血浆氧化、丙二醛修饰低密度脂蛋白及其自身抗体水平

目的探讨血浆氧化及丙二醛(MDA)修饰低密度脂蛋白(LDL)及其自身抗体与糖尿病(DM)及其他血脂项目之间的关系。方法选择DM患者、正常对照组各60例。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定铜离子氧化型LDL(ox-LDL)、MDA修饰型LDL(MDA-LDL)及其自身抗体,同时对受检者血脂水平进行检测。结果DM患者血浆ox-LDL、MDA-LDL及其自身抗体水平均明显高于对照组(P<0.01),分别与总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)呈高度正相关,而与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)呈负相关;且ox-LDL、MDA-LDL分别同其自身抗体呈高度正相关。结论DM患者ox-LDL、MDA-LDL及其自身抗体水平显著升高,可能参与动脉粥样硬化的发生、发展过程。

恐惧应激对大鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响

目的观察恐惧应激对大鼠睾丸组织中生殖细胞凋亡的影响。方法36只SD大鼠随机分为急性应激组、亚急性应激组、慢性应激组和对照组,建立大鼠恐惧应激模型,在观察不同时间后取材,RT-PCR法检测睾丸组织中caspase-3、bax和bcl-2 mRNA的表达并比较bax/bcl-2的比值,TUNEL法检测睾丸内精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞的凋亡情况。结果caspase-3mRNA的表达水平,急性应激组与其对照组比较无显著差异(3.85±0.84vs3.30±0.74,P>0.05),而亚急性应激组与其对照组比较(5.34±1.13vs3.67±0.34)、慢性应激组与其对照组比较(5.88±0.31vs4.08±0.60)均显著增高(P<0.05)。bax/bcl-2比值,急性应激组与其对照组比较无显著差异(1.61±1.01vs1.15±0.29,P>0.05),而亚急性应激组与其对照组比较(2.68±0.86vs1.60±0.42,P<0.05)、慢性应激组与其对照组比较(3.88±0.60vs2.99±0.76)均显著增高(P<0.001)。急性应激组生殖细胞凋亡指数与对照组比较无显著差异(3.75±0.50vs1.50±0.58,P>0.05),而亚急性应激组(10.50±1.29)和慢性应激组(21.50±1.73)与对照组相比较均显著增高(P<0.001)。结论长期恐惧应激可导致大鼠睾丸生精细胞发生凋亡,caspase-3、bax和bcl-2等参与了其凋亡过程。