人钙调素基因表达载体的构建及在大肠杆菌DH5α中的表达

目的:构建人钙调素(CaM)基因表达载体并在大肠杆菌DH5α中高效表达人CaM蛋白。方法:用PCR方法获得人钙调素基因Ⅲ(hCaMⅢcDNA),将其插入表达载体pBV220,构建重组表达质粒hCaMⅢ/pBV220,用酶切、DNA测序、PCR扩增鉴定阳性克隆。结果:阳性重组子在大肠杆菌DH5α中经温度诱导可高效表达CaM蛋白,经15%SDSPAGE分析,可观察到一分子量与理论值相符(约17kD)的诱导表达条带,其表达量占菌体蛋白总量的20%。进一步分析表达产物的性质表明,CaM主要以可溶性形式表达。Westernblot结果证实,17kD的表达条带可与标准鼠抗CaMMcAb起特异反应。结论:用基因工程技术在大肠杆菌中高效表达人CaM,为进一步研究CaM的生物学功能及研制抗CaM单克隆抗体奠定基础。