解脲脲原体感染与精子DNA完整性的相关性的研究

目的:探讨不育男性解脲脲原体(Uu)感染与精子核DNA完整性及精液各参数的相关性。方法:95例不育症患者的精液用Uu培养液进行解脲脲原体的培养,按WHO的标准,用计算机辅助精液分析系统(CASA)进行精液各参数的分析,然后通过精子低渗肿胀实验,吖啶橙(AO)荧光染色检测精子膜的完整性和精子核DNA的完整性。结果:Uu阳性40例,Uu阴性55例,Uu阳性组与阴性组比较,精子核DNA完整性与精子的密度、a+b级精子百分率以及精子的肿胀率都有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。同时Uu阳性组与阴性组的精子核DNA完整性与精子的肿胀率存在显著的正相关性(r=0.438,P=0.014;r=0.438,P=0.01)。结论:Uu感染能够降低精子膜的完整性以及精子核DNA的完整性,这可能是Uu致男性不育的又一因素。

精子获能液的pH对精子胞浆内Ca^(2+)水平影响机制的初步研究

目的研究不同pH值的精子获能液对精子胞浆内Ca2+水平的影响。方法取15例正常生育男性精液,离心沉淀所得精子用不同pH值(4.2、5.2、6.2、7.2、8.2、9.2、10.2、11.2)的精子获能液处理,用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分别检测精子胞浆内游离钙离子的平均荧光强度值。结果流式细胞仪测定结果显示,与pH7.2获能液的荧光值(209.94±89.02)相比,获能液pH为6.2时,精子胞浆内钙离子的荧光强度值(161.91±53.92)降低(P<0.05),pH为8.2、9.2时差异不显著(P>0.05),其余各种pH值的获能液均较pH7.2获能液荧光强度显著降低(P<0.01);激光共聚焦显微镜测定结果显示,与pH7.2获能液荧光值(200.87±27.43)相比,pH为6.2时荧光强度值(152.18±38.05)也显著降低(P<0.05),pH为8.2、9.2时没有差异(P>0.05),其余各组与pH7.2获能液相比,均有显著性降低(P<0.01)。结论不同pH值的精子获能液,可能影响精子胞浆内的钙离子水平的变化,进而导致精子的各种生理活动的改变。

促性腺激素释放激素激动剂对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD的表达影响

目的:探讨阿拉瑞林(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白V(annexin5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)的表达的影响.方法:建立体外分离、纯化和培养大鼠睾丸间质细胞原代培养技术,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定,同时用不同终浓度的GnRHa(分别为1×10-5,1×10-6,1×10-7mol/L)作用于间质细胞24h后,通过Western Blot检测间质细胞中annexin5和3β-HSD的表达变化情况.结果:间质细胞经GnRHa处理后,Western Blot结果显示,与对照组相比,当GnRHa终浓度为1×10-5mol/L时,anenxin5的表达量显著升高了69.2%(P<0.01),3β-HSD的表达量也升高了25.2%(P<0.05);当GnRHa的终浓度为1×10-6mol/L和1×10-7mol/L时,anenxin5的表达量分别升高了61.5%(P<0.05)和16.64%(P>0.05),3β-HSD的表达量则无显著性变化,分别升高了7.7%(P>0.05)和2.22%(P>0.05).结论:GnRHa在原代培养的睾丸间质细胞中,对annexin5,3β-HSD的表达具有调节作用.

光照应激对SD大鼠胃GnRH表达的影响

目的:观察光照应激状态下SD大鼠胃内促性腺素释放素(GnRH)的表达变化.方法:建立SD大鼠光照应激模型,24h持续光照,分别取光照1d,2d,3d,4d,1wk,2wk,3wk,4wk和相应对照组的胃组织,采用免疫组化和Real-timePCR法检测GnRH在各时间段大鼠胃组织中的定位和蛋白及mRNA表达变化.结果:GnRH阳性细胞广泛分布于大鼠胃壁上皮细胞,免疫反应阳性细胞在实验组和对照组中定位没有差异.实验组的GnRH平均灰度值高于其相应的对照组,光照2-4wk时,实验组与对照组相比差异均显著(2wk:105.7±7.9vs77.4±7.2,P<0.05;3wk:97.4±7.7vs77.6±6.6,P<0.05;4wk:93.2±2.1vs77.9±4.0,P<0.05).实验组大鼠胃的GnRHmRNA水平高于对照组,与对照组相比,持续光照2-4wk时,实验组大鼠胃的GnRHmRNA增加具有显著性差异(2wk:1.01±0.10vs0.80±0.01,P<0.05;3wk:0.95±0.07vs0.81±0.01,P<0.05;4wk:0.94±0.05vs0.82±0.01P<0.05).结论:光照应激可以影响消化道中GnRH的表达,GnRH以自分泌和旁分泌的机制对消化系统产生调节作用.提示GnRH除参与消化道正常生理功能外,可能还是一种参与应激反应的激素.

解脲脲原体感染对精子膜功能的影响及机制的初步探讨

目的:研究男性不育患者精液的解脲脲原体(ureaplasma urealyticum,Uu)感染情况对精子膜功能完整性及精子胞浆内钙离子水平的影响。方法:对126例不育患者的精液进行了Uu感染情况检测、精液常规分析、精子膜功能完整性的检测以及通过流式细胞仪检测精子胞浆内Ca2+水平的变化情况。结果:本实验共检测到Uu阳性者55例,Uu阴性者71例,精液各项参数除精子密度、d级精子百分率外,阳性与阴性者比较均有差异性(P<0.05)。同时,Uu阳性组与阴性组的精子肿胀率与胞浆内的钙离子水平存在显著的正相关性(r=0.521,P=0.012;r=0.617,P=0.01)。结论:Uu感染能够降低精子膜功能的完整性,从而进一步降低精子胞浆内钙离子的水平,这可能是造成男性不育的重要原因之一。

增加头孢吡肟、头孢吡肟-克拉维酸的双纸片试验在肠杆菌科细菌中检测ESBLs的探讨

目的探讨在产 AmpC 酶细菌中检测 ESBLs 的方法。方法临床分离对头孢西丁和第三代头孢菌素耐药和(或)中介的111株细菌用于本研究,包括47株阴沟肠杆菌、24株肺炎克雷伯菌和40株大肠埃希菌。结合三维酶抑制试验,ESBLs基因和质粒型 ampC 基因 PCR 扩增试验结果对改进法,包括 CLSI 推荐的 ESBLs 确认法中的2对纸片(推荐法)和头孢吡肟、头孢毗肟克拉维酸纸片法进行评估。结果 47株阴沟肠杆菌中,推荐法22株 ESBLs 阳性,改进法32株阳性。24株肺炎克雷伯菌中,推荐法18株 ESBLs 阳性或可疑阳性,改进法11株阳性。40株大肠埃希菌中,推荐法26侏 ESBLs 阳性.改进法34株阳性。三维酶抑制试验、ESBL 和 ampC 基因的扩增试验结果证实 AmpC 酶的存在干扰了推荐法 ESBLs 的检出率。结论在 NCCLS 推荐的确认试验中增加头孢吡肟、头孢吡肟-克拉维酸纸片不仅可以提高 ESBLs 阳性检出率,而且是一种简易有效的方法,可以在临床微生物实验室的常规敏感试验中同时检测肠杆菌科细菌的 ESBLs,也可在一定程度上推测 AmpC 酶的存在。

光照应激对SD大鼠胃促性腺激素释放激素受体表达的影响

目的观察光照应激状态下SD大鼠胃内促性腺激素释放激素受体(GnRHR)的表达变化。方法建立SD大鼠光照应激模型(共64只,实验组与对照组各32只),24h持续光照,分别取光照1d、2d、3d、4d、1周、2周、3周、4周和相应对照组大鼠的胃,采用免疫组织化学、Westernblotting和实时PCR法检测GnRHR在各时间段大鼠胃黏膜中的定位及蛋白和mRNA的表达变化。结果GnRHR阳性细胞广泛分布于大鼠胃底腺壁细胞中,在对照组和实验组中的定位无差异。实验组大鼠的GnRHR蛋白表达水平高于其相应的对照组。持续光照1～4周后,实验组与其对照组相比差异显著(P<0.05);当持续光照2周时,GnRHR的表达至最高水平,与其对照组相比,差异极显著(P<0.01)。实验组大鼠胃GnRHRmRNA表达水平高于对照组,持续光照3～4周后,实验组大鼠胃GnRHRmRNA表达水平显著增加(P<0.05)。结论光照应激可以影响消化道内GnRHR的表达,提示GnRH通过其受体介导,对消化功能具有潜在的生理调节功能。GnRH除参与消化道正常生理功能外,可能还是一种参与应激反应的激素。

恐吓应激对SD大鼠胃GnRH受体表达的影响

目的观察恐吓应激状态下SD大鼠胃内促性腺素释放素受体(GnRHR)的分布和表达变化。方法建立SD大鼠恐吓应激模型,分别取急性应激组(2~12h)、慢性应激组(1d^4w)和相应对照组大鼠的胃,利用免疫组织化学和western blotting(WB)法检测GnRHR在各组大鼠胃中的的分布和表达变化。结果免疫组织化学显示:胃底腺壁细胞、胃小凹上皮细胞呈GnRHR阳性。阳性反应物质定位于胞膜和胞质中,胞核呈阴性。WB结果表明:应激从2h到2w时,GnRHR的表达量与对照组相比P<0.01,应激从3w到4w时,GnRHR的表达量与对照组相比P<0.01,差异均有统计学意义。结论GnRHR随着恐吓应激时间的延长,在大鼠胃中表达量改变。提示在恐吓应激中,GnRH对消化功能具有潜在的生理调节功能。