南京市精液分析质量控制的初步研究

目的：调查并分析南京市各家医院对精液分析项目中的精子浓度、精浆果糖、α葡糖苷酶及酸性磷酸酶（ACP）的检测结果，为进一步开展省内乃至全国范围内的精液分析的外部质量控制打下基础。方法：制备低、高浓度的4种检测项目的质控品8份，分装后检测每份质控品的结果并计算变异系数（CV）。质控品分发至南京市11家医院，收集并分析质控品回收结果。以分装后检测结果为参考值，计算不同实验室测得的质控品结果的总相对误差（RE）。结果：8份质控品分装后检测的CV为3．83％～11．16％。11家医院回报的精子浓度结果11份，精浆α葡糖苷酶、果糖和ACP结果5份。不同实验室高、低浓度精浆果糖的检测结果差异最小（CV分别为8．99％和3．95％），其次为α葡糖苷酶（CV分别为16．66％和18．41％），而精浆ACP的检测结果差异最大，CV分别为54．12％和65．58％。RE亦有相同的趋势，不同实验室精浆果糖检测的总RE分别为11．99％和20．31％，α葡糖苷酶为22．92％和27．26％，而ACP为7．34％和318．35％，即高浓度ACP检测结果的RE最大。11家医院中，6家用计算机辅助精液分析（CASA）系统检测精子浓度，5家用改良牛鲍血球计数池的方法检测。血球计数池计数的精子浓度结果[分别为（62．74±16．63）×10^6／ml和（163．32±36．24）×10^6／ml]和RE值（分别为148．47％和187．59％）显著高于CASA系统检测的结果分别为[（24．88±4．16）×10^6／ml和（54．24±23．06）×10^6／ml]和RE值（分别为13．97％和10．48％）。结论：目前男科学实验室精浆α葡糖苷酶和果糖的检测方法比较稳定，结果的变异在可接受的范围内，而ACP检测的方法可能不适合于临床常规使用，尚需进一步改进。血球计数池明显高估精子浓度，不适合用作精子浓度分析。

不育男性无精子症因子微缺失的分子与临床特征:5年研究回顾

目的:近年来,Y染色体长臂无精子症因子(AZF)微缺失与男性不育关系的研究已经取得了很大的进展。然而,AZF微缺失的形成机理及各种缺失类型与临床表型之间的关系还不十分确定。本研究的目的是探讨中国不育男性的Y染色体微缺失的发生率、缺失类型以及基因型与表型之间的关系。方法:本研究对2005年至2009年本院男科门诊502例非梗阻性无精子症和306例严重少精子症的不育男性进行Y染色体AZF缺失分析。结果:AZF总体缺失率为7.80%(63/808),其中无精子症不育男性缺失率为9.16%(46/502),严重少精症患者为5.56%(17/306)。完全的AZFa缺失或AZFb缺失患者的精液中均没有成熟精子,而AZFc缺失的表型是多样化的。1例部分AZFb缺失患者有成熟精子发生,精子密度呈轻度进行下降。最常见的缺失类型为AZFc b2/b4亚型,占60.32%(38/63),其中39.47%(15/38)的患者精液中能发现成熟精子,其中1例为自然遗传的AZFc b2/b4缺失。63例缺失患者中仅1例AZFc b2/b4缺失患者的精子密度超过2×109/L。结论:AZF微缺失对精子发生障碍具有良好的诊断和评估价值。对Y染色体微缺失的大样本临床研究有利于进一步明确基因型与表型的关系,更好地理解AZF缺失的机制。

45,X,der(Y)t(Y;13)不育男性患者的临床细胞和分子遗传学研究

目的:了解核型为45,X,der(Y)t(Y;13)(q11.1;q12),-13伴无精子症、双侧乳腺轻微发育和多发性皮下结节男性患者的分子遗传学特点。方法:进行常规染色体核型分析,用荧光原位杂交(FISH)进一步确定患者核型。用PCR-STSs以确定Yq上的断裂点。用DNA多态性方法检测位于13q12上的BRCA 2基因拷贝数。对患者的睾丸和皮下结节进行活检。结果:细胞遗传学和FISH证实患者SRY基因和Y染色体着丝粒位于13号染色体上。因此,患者核型为45,X,der(Y)t(Y;13)(q11.1;q12),-13.ish der(Y)(SRY+,DYZ3+,wcp13+)。Y染色体长臂上的AZFa,b,和C区域全部丢失,断裂点位于sY82以下。BRCA2基因的多态性检测无拷贝数的丢失。睾丸活检结果为唯支持细胞综合征。皮下结节病理检查为血管脂肪瘤。结论:患者的男性表型是由于基因组中存在SRY基因。无精子症、睾丸体积小与病理结果一致,是由于Y染色体Yq11.1→Yqter片段丢失所致。但血管脂肪瘤的分子机制仍然不清楚。

类风湿关节炎新血清学指标研究与临床初步应用

目的建立并完善类风湿关节炎(RA)血清学实验诊断体系,寻找新的RA标志性自身抗体,探讨其在RA疾病发生、发展中的诊断价值。方法采用肽酰精氨酸脱亚氨基酶(PAD)分别对人纤维蛋白原(hFib)和牛Ⅱ型胶原(bCⅡ)瓜氨酸化(cit-rullination,Cit),以环瓜氨酸肽(CCP)作对照,并选择CⅡ短肽(CⅡ260-272),建立检测3种抗原自身抗体的ELISA法,进行临床标本检测及与其他实验室指标进行相关分析,评价其对RA的诊断价值。结果抗Cit-hFib和抗Cit-bCⅡ抗体在RA患者血清中的检出率分别为59.4%和56.3%,均显著高于其他疾病和健康对照组(P均<0.01)。诊断RA的敏感性和特异性均较抗hFib和抗bCⅡ抗体有明显提高。抗CⅡ短肽抗体对RA的诊断效能与抗CCP抗体接近,对RA的诊断敏感性分别为67.2%和68.8%;特异性分别为95.3%和97.8%;阳性预测值分别为76.8%和88.0%;阴性预测值分别为92.6%和93.1%;阳性似然比分别为14.3和31.3;阴性似然比分别为0.34和0.32;Youden指数分别为0.625和0.666。在13例早期RA患者中,抗CⅡ短肽抗体和抗CCP抗体阳性率均为76.9%。抗CCP抗体对RA诊断的ROC曲线下面积(AUC)值为0.946,抗CⅡ短肽抗体为0.924。联合应用抗CⅡ短肽与抗CCP抗体、或抗CⅡ短肽与RF,均可进一步提高对RA的有效诊断水平。相关分析和一致性检验结果显示,各自身抗体均与抗CCP抗体显著相关,仅有抗Cit-hFib抗体、抗Cit-bCⅡ抗体与抗CCP抗体检出结果表现出较好的同步性(0.4<Kappa<0.75),检出符合率分别为84.4%(54/64)和78.1%(50/64)。各自身抗体水平均与C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)呈高度正相关(P均<0.01),提示与RA疾病活动程度密切相关;抗CⅡ短肽抗体水平有随RA临床症状改善而明显下降趋势。结论瓜氨酸化蛋白及其自身抗体在RA疾病发生、发展过程中起重要作用。抗CⅡ短肽抗体及抗CCP、抗Cit-hFib和抗Cit-bCⅡ抗体均与RA疾病活动性密切相关,这些抗体可能发展成为RA新的血清学监测和诊断指标。

临床分离的铜绿假单胞菌对头孢吡肟敏感性低于头孢他啶的机制研究

目的探讨临床分离的铜绿假单胞菌对头孢吡肟(FEP)敏感性低于头孢他啶(CAZ)的原因。方法收集临床分离的经Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统检测PEF最小抑菌浓度(MIC)高于CAZ MIC的铜绿假单胞菌60株,琼脂稀释法复查FEP和CAZ的MIC值,聚合酶链反应(PCR)扩增耐药基因,实时荧光定量PCR分析细菌外排系统表达情况。结果手工琼脂稀释法检测与Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统检测存在5%的差别,PCR扩增发现部分菌株存在编码KPC和PSE-1的耐药基因,外排系统表达显示以mex B和mex D为主。测序结果发现mex B的3个调控基因只有nal C Gly70→Glu(GGG→GAG)改变,其他2组调控基因未发现有意义的突变,mex D外排系统过度表达的调控基因出现nfx B Gly109→Val(GGC→GTC)。结论 FEP敏感性低于CAZ的主要原因可能是编码KPC与PSE-1的耐药基因的存在和外排系统mex AB-Opr M、mex CD-Opr J表达增加共同作用的结果。

南京城区部分职业人员生化指标分析

目的了解南京城区职业人员空腹血糖、尿酸、血脂、转氨酶等五项生化指标水平，初步评估南京城区居民健康状态。方法用全自动生化分析仪检测1575例体检者空腹血糖、尿酸、血脂、转氨酶指标。结果血糖随年龄增长其上升幅度女性约为每10y0．1～0．21mmol／L，男性在-0．08～0．33mmol／L间；胆固醇高峰在50～59y组，≥60y后下降，其中男性高峰在40～59y，女性在50y。三酰甘油从年轻组起阳性率就高达14％以上。谷丙转氨酶异常则主要集中于年轻组。男性各年龄组尿酸阳性率持续20％以上，女性60Y后阳性率反超男性（30％）。结论南京城区职业人员血脂高峰较早，年轻人尤其男性自我保健意识差，三酰甘油、谷丙转氨酶和尿酸异常率高，应加强健康教育，预防疾病发生。

南京地区过敏性疾病患者特异性变应原检测结果报告

目的探讨引起南京地区居民过敏性疾病患者变应原的流行分布状况。方法采用免疫印迹法对420例过敏性疾病患者进行食物和吸入性变应原特异性IgE(sIgE)检测,同时对其血清总IgE水平进行检测和结果分析。结果在所测384例食物组样本中,特异性变应原以水果组合阳性率最高(为19.5%),紧随其后者依次为海鲜组合17.7%、虾9.8%、鲑鱼8.9%、花生8.6%等。而在327例吸入组样本中,特异性变应原以猫狗阳性率最高(为25.4%)、其下依次为蚕丝22.6%、粉尘螨(粮尘为主)13.5%、屋尘螨(床尘为主)12.8%等。在血清总IgE升高者中,发现有76.2%(64/84)的患者可检出1种或1种以上sIgE。统计分析结果表明,南京地区最常见的过敏性疾病发生时段多在夏秋季的6-10月和冬季的11-12月份。结论各种变应原中,水果组合、海鲜组合、虾、鲑鱼、花生、猫狗、蚕丝、粉尘螨、屋尘螨为南京地区过敏性疾病的主要致敏原。

海训野战医疗所中医学检验的实践与思考

医学检验是完成战场救治任务的重要保证。现代战争对野战医学检验的实施提出了新的挑战。医学检验存在技术与装备的特殊要求,需要在野战条件下不断演练,通过实践-认识-再实践-再认识的过程不断改进和完善。近几年来,我院奉命组建野战医疗所,配属海训部队训练。

南京地区289例男男性行为人群艾滋病感染血清学调查

男男性行为人群（men who have sex with men,MSM）中,艾滋病（acquired immunodeficiency syndrome）流行和感染已经相当严重,应当引起人们的重视。性传播已经成为我国艾滋病传播的主要途径,尤其是MSM的艾滋病毒传播。根据中国艾滋病防治联合评估报告,在2007年新感染HIV的5万人中,男男性传播约占12.2%;在2009年新感染HIV的4．8万人中，男男性传播约占33．0％。

精浆游离L-肉毒碱水平及其与精子密度、活动率及活力的相关性研究

目的:研究正常生育及不育男性精浆中游离L-肉毒碱水平差异及其与精子密度、活动率(a+b+c级精子百分率)及活力(a+b级精子百分率)之间的相关性,探讨精浆中游离L-肉毒碱水平对男性生育力的影响及其在不育症检查和治疗中的作用。方法:分别采用高效液相色谱法和计算机辅助精液分析系统,测定了230例不育症患者(精子密度正常117例,少精子症81例,无精子症32例)和30例正常生育男性精浆中游离L-肉毒碱水平及精子密度、活动率、活力等参数。根据检查结果对不育症患者分组后,以SPSS12.0软件包进行统计学分析,比较各组间游离L-肉毒碱水平的差异以及游离L-肉毒碱水平与精子密度、活动率、活力之间的相关性。结果:正常生育组精浆游离L-肉毒碱水平明显高于不育组(P<0.01)。精液中精子密度越低、活力越弱,这种差异性越显著。相关性分析结果显示,精浆游离L-肉毒碱水平与精子密度呈显著正相关关系(r=0.521,P<0.01),与精子活动率和活力之间也具有正相关关系(r=0.319,P<0.01;r=0.251,P<0.01)。结论:精浆L-肉毒碱水平与精子密度、活动率和活力之间密切相关,其含量测定作为一项有用的生化指标,可为男性不育症检查及临床诊治和进行有关男性生殖功能机制研究提供参考。

男性不育的遗传学病因研究进展

许多非梗阻性无精子症和严重少精子症患者的病因尚不清楚。据估计,其中约有30%的患者是由于染色体畸变或基因突变等遗传学因素引起的。男性不育的遗传学病因有染色体畸变、Y染色体微缺失和基因突变等,其中Klinefelter综合征和Y染色体微缺失最为常见。与男性不育相关的基因突变包括囊性纤维化跨膜介导的调节子(CFTR)基因、雄激素受体(AR)基因、胰岛素样因子3(INSL3)基因和富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体8(LGR8)基因。CFTR基因突变可导致囊性纤维化、输精管缺如和梗阻性无精子症。AR基因突变会引起雄激素不敏感综合征和生精损伤。INSL3和LGR8基因突变则与睾丸下降异常和隐睾相关。Meta分析显示,仅有3个遗传多态性与男性不育显著相关,即AZFc区部分缺失、雄激素受体(AR)基因(CAG)n长度和亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性。本文主要综述了男性不育常见的遗传学病因以及与男性不育相关的遗传多态性研究进展。

早泄与中央型腰椎间盘突出相关性的初步研究

目的:研究早泄(PE)与中央型腰椎间盘突出(CLIDH)的相关性,以探究PE可能的病因,并寻求简便有效、无创的治疗方法。方法:按照入选标准对门诊PE患者行腰椎间盘(腰3～骶1)CT/MR检查,240例CLIDH阳性患者随机分为治疗组(n=180)和对照组(n=60),分别行腰椎牵引和口服盐酸舍曲林治疗。治疗前后,均利用中国PE患者性功能评价表(CIPE-5)进行评分,记录射精潜伏期和性生活满意度,评价疗效。结果:治疗组患者通过腰椎牵引治疗,可以显著提高射精潜伏期,提高性生活满意度,与治疗前相比具有极显著性差异(P<0.01)。对照组治疗前后疗效无显著性差异。治疗组与对照组疗效相比有显著性差异(P<0.05)。结论:CLIDH可能是造成大多数"不明原因PE"的重要病因之一,对此类PE患者行腰椎牵引治疗,无创,简便易行,疗效明显,为临床诊断和治疗PE提供了一个新的思路和方法,值得临床推广和普及。

JC-1单标法流式细胞术检测精子线粒体膜电位的研究

目的:探讨应用荧光染料JC-1单色标记法进行流式细胞术检测精子线粒体膜电位(MMP)的可行性及其临床意义。方法:收集63例男性精液标本,分为生育组(n=31)和不育组(n=32)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析。精液标本洗涤处理后用JC-1染色后上流式细胞仪分析,用发橙红色荧光精子百分率(JC-1+%)表示MMP正常精子的比例。结果:生育组精子JC-1+%为(75.89±15.69)%,显著高于不育组[(54.04±22.21)%,P=0.000]。63例标本中,JC-1+%与精子活动率呈显著正相关(r=0.610,P=0.000),与(a+b)级精子百分率呈显著正相关(r=0.614,P=0.000),与d级精子百分率呈显著负相关(r=-0.504,P=0.000)。JC-1+%与已建立的罗丹明/碘化吡啶双染法检测结果(Rh123+/PI-%)呈显著正相关(r=0.938,P=0.000)。结论:应用流式细胞术JC-1单标法检测精子MMP具有可行性,精子JC-1+%可作为男性不育的辅助诊断指标。

念珠菌优势抗体检测方法的建立及临床诊断价值评估

目的侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)是免疫功能损伤或低下患者常见的感染和死亡原因,近年来检测IC患者血清中特异性抗体的血清学诊断方法成为研究热点。本文旨在建立检测念珠菌烯醇化酶(Enolase,Eno)、果糖二磷酸醛羧酶(fructose-bisphosphate aldolase,Fba1)特异性抗体的ELISA方法,评估其在IC早期诊断中的应用价值。方法利用基因重组技术获得的Eno、Fba1重组蛋白作为包被抗原,建立测定人血清相应抗体的ELISA,并对方法的敏感性、特异性进行考查。结果建立了检测IC患者血清抗Eno、抗Fba1抗体的ELISA,cut-off值分别为吸光度(A)值0.370和0.610。ELISA结果显示,IC患者血清中的抗Eno、抗Fba1抗体水平明显高于健康对照和非IC患者对照(P<0.001)。抗Eno和抗Fba1对诊断IC的敏感性和特异性分别为72.3%(73/101)和98%(196/200),87.1%(88/101)和96%(192/200),联合检测可提高敏感性至91.0%。且与细菌感染及其他真菌感染患者(如曲霉病)无交叉反应。IC患者中40.6%(41/101)可以在血培养阳性前检测到抗Eno、49.5%(50/101)可以在血培养阳性前检测到抗Fba1。结论建立了检测抗Eno、抗Fba1抗体的ELISA法,检测念珠菌菌丝相分泌蛋白IgG抗体特异性和灵敏度良好,在念珠菌感染诊断中具有潜在临床应用价值。

氨基糖苷类药物双圈耐药型鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因研究

目的探讨在K-B法药物敏感试验中对氨基糖苷类药物双圈耐药的鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因携带状况以及药物诱导对该基因mRNA表达量的影响。方法收集42株鲍曼不动杆菌,K-B法测定其药敏情况;PCR法扩增三种16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtB及rmtC;用RT-PCR的方法分析阿米卡星诱导前后耐药基因表达量。结果 90.4%(38/42)的菌株阿米卡星药敏纸片周围呈现双圈耐药,且均检测到armA,未检测到rmtB及rmtC,其余3株为敏感,1株为普通耐药,且PCR检测耐药基因为阴性。RT-PCR结果显示经阿米卡星诱导后细菌armA基因mRNA表达量显著上升。结论双圈耐药现象与armA基因诱导型表达有关。

SYBR-14/PI双染法流式细胞术检测精子质膜完整性的研究

目的:探讨应用荧光染料SYBR-14/碘化丙啶(SYBR-14/PI)双色标记法进行流式细胞术检测精子质膜完整性的可行性及其临床意义。方法:收集208例男性精液标本,按WHO精液分析标准分为正常组(n=31)与异常组(n=177)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析。精液标本洗涤处理后经SYBR-14/PI双染后上流式细胞仪(FCM)分析,用发绿色荧光精子百分率(SYBR-14+/PI-%)表示质膜完整精子(PMI)的比例。结果:正常组与异常组SYBR-14+/PI-与SYBR-14-/PI+精子百分率均存在统计学差异(P均<0.05)。正常组精子SYBR-14+/PI-%为(55.66±20.64)%,显著高于异常组[(39.71±19.21)%,P=0.000]。208例标本中,SYBR-14+/PI-%与精子活动率呈显著正相关(r=0.408,P=0.000),与(a+b)级精子百分率呈显著正相关(r=0.398,P=0.000),与d级精子百分率呈显著负相关(r=-0.413,P=0.000);SYBR-14-/PI+%与精子活动率呈显著负相关(r=-0.380,P=0.000),与(a+b)级精子百分率呈显著负相关(r=-0.397,P=0.000),与d级精子百分率呈显著正相关(r=0.385,P=0.000);SYBR-14+/PI+%与精子活动率呈正相关(r=0.172,P=0.013),与(a+b)级精子百分率呈正相关(r=0.177,P=0.011),与d级精子百分率呈负相关(r=-0.164,P=0.018)。结论:应用流式细胞术SYBR-14/PI双染法检测精子质膜完整性具有可行性,可用于评估男性生育力。

DPY19L2基因与圆头精子症研究进展

圆头精子症是一种严重的畸形精子症,临床上100%圆头缺陷精子的病例比较少见,这类患者精液中精子头部呈圆形,一般无顶体或者顶体异常,可伴有杂乱的中段和尾部。由于顶体内含有精子和卵细胞受精所需要的酶类,这类异常的精子无论体内或体外都不易自主与卵细胞受精,因而圆头精子症患者临床表现为不育。最新研究表明,一种编码跨膜结构域蛋白基因DPY19L2(dpy-19-like 2)的缺失是导致圆头精子产生的主要原因。本文就DPY19L2与圆头精子症的研究进展做一概述,为圆头精子症的基因诊断和分子机制研究提供依据。