Nogo-A在大鼠脑组织中的亚细胞定位

目的Nogo-A在中枢神经系统的髓鞘和神经元中广泛表达,并且有多种亚分布形式。在以往研究的基础上,将通过检测Nogo-A/B(N-18)在大鼠脑组织中的亚细胞定位,进一步获得Nogo-A在细胞核中表达的有力证据。方法通过差速离心法和NP-40处理得到大鼠皮层和小脑样本的纯化细胞核亚组分,利用Westernblot来检测各亚细胞成分中Nogo-A的表达。通过免疫荧光双标染色,共聚焦显微镜观察Nogo-A在大鼠皮层和小脑组织中的亚细胞定位。结果WesternBlot在纯化细胞核中可检测到清晰的Nogo-A条带。免疫荧光染色显示胞核内有免疫阳性物质表达,并且和Hoechst复染的胞核着色有广泛重合。结论Nogo-A在大鼠皮层和小脑细胞核中有明确表达,并且很有可能以全长形式入核。

髓鞘相关蛋白Nogo-A在纯化细胞核中的表达

目的:检测Nogo-A蛋白在纯化后的大鼠脊髓和小脑细胞核中的表达。方法:通过差速离心法得到大鼠脊髓和小脑样本的各亚细胞成分,利用非离子性去污剂NP-40纯化细胞核组分,采用Western blot方法检验核纯度并检测Nogo-A在各亚细胞成分中的表达。结果:纯化的细胞核抽提物中检测到特异的Nogo-A反应条带。结论:Nogo-A在纯化的细胞核中仍有明确表达,进一步证明了Nogo-A蛋白在中枢神经元的细胞核中有定位,并提示Nogo-A很可能以全长形式入核。