K88ac基因工程苗及免疫仔猪腹泻的试验小结

一、大肠杆菌K88ac基因工程苗的构建 80年代以来,国内外许多学者都在研究预防仔猪腹泻的基因工程疫苗,且均有不同程度的进展。本文猪源性产肠毒素大肠杆菌K88ac菌株是从上海奉贤县仔猪腹泻粪便中分离出来的大肠杆菌。采用两个重组质粒,一个是粘附素基因重组质粒pMM032,编码合成K88ac抗原;另一个是热敏毒素(LT)基因重组质粒pPMC4或pPMC5。

卫氏并殖吸虫基因文库的构建——Ⅰ重组克隆的方法

以SDS-酚-乙醇沉淀法提取卫氏并殖吸虫成虫基因组DNA,分别用Sau 3A和Eco RI核酸限制性内切酶酶切,电泳回收0.4—4Kb大小的DNA片段,与相应的大肠杆菌质粒载体pBR^(322)或pUR^(222)重组连接,转染大肠杆菌7118。结果显示,pUR^(222)质粒经碱性磷酸脂酶处理后与DNA片段以1/4(W/W)比例重组连接,获得的重组克隆最多,并且可以利用菌落的色泽不同,从麦康凯培养基平板上直接挑选出重组克隆。是利用质粒载体构建基因文库重组克隆的较好方法。

卫氏并殖吸虫基因组DNA文库构建Ⅱ．基因组DNA文库的构建及鉴定

以ＥｃｏＲＩ酶切安徽地区卫氏并殖吸虫基因组ＤＮＡ，电泳分离回收０．４～４ｋｂ的ＤＮＡ片段。与ＥｃｏＲＩ酶切并经牛肠碱性磷酸脂酶处理的大肠杆菌质粒ｐＵＲ２２２载体，在Ｔ４ＤＮＡ连接酶作用下重组连接，构建卫氏并殖吸虫基因组ＤＮＡ文库，获得１．０８×１０６个重组克隆。经重组克隆质粒的快速鉴定和卫氏并殖吸虫基因组ＤＮＡ探针菌落原位杂交证实，重组克隆中含有与卫氏并殖吸虫基因组ＤＮＡ同源的ＤＮＡ插入片段，并初筛到１９个阳性重组克隆。表明卫氏并殖吸虫基因组ＤＮＡ文库构建成功。