适配体技术及其在医学检验研究中的作用

适配体是利用指数富集配体的系统进化技术从含有大量序列的随机文库中筛选出来,能通过特定三维结构与靶标紧密结合的单链DNA或RNA。适配体不仅能与各种有机物或无机物靶标分子高特异性、高亲和力结合,还具有分子量小,免疫原性低,稳定性好,制备和标记方便等优点。适配体将有可能替代抗体,在疾病的诊断和治疗中发挥重要的作用。本文就适配体作用和筛选的原理及策略、适配体技术在医学检验研究中的作用以及面临的挑战作简要的述评。

肿瘤标志物判别模型鉴别非小细胞肺癌与结直肠癌的研究

目的:探讨判别分析在非小细胞肺癌与结直肠癌两大恶性肿瘤中的应用价值。方法:使用多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统(C-12)检测155例非小细胞肺癌患者、132例结直肠癌患者、246例肺良性疾病患者、233例结直肠良性疾病患者的血清肿瘤标志物,建立两类肿瘤单独判别模型和组间判别模型,并评价其应用价值。结果:判别模型对非小细胞肺癌判别的阳性率为85.7%,特异性96.9%,阳性预测值96.0%,阴性预测值88.6%;对结直肠癌判别的阳性率为86.7%,特异性77.8%,阳性预测值72.2%,阴性预测值89.7%。结论:建立的肿瘤标志物判别模型能够有效地鉴别非小细胞肺癌与结直肠癌,具有较高的诊断价值。

烟曲霉致病性与免疫系统相互作用的研究进展

由腐生性丝状真菌烟曲霉(Aspergillus fumigatus)引起的侵袭性曲霉病(Invasive Aspergillosis,IA),是免疫受损患者致死性并发症之一,更是临床诊疗的难点。通常侵袭性曲霉病是由吸入真菌孢子引发,健康个体可及时清除吸入的孢子,而免疫受损人群吸入的孢子可在体内萌发、繁殖,导致肺曲霉病。一旦孢子进入血液循环,则可造成全身多系统感染。本文总结了烟曲霉的致病力与机体免疫系统各组成间相互作用的研究进展。烟曲霉的致病力受多因素调节,如:烟曲霉的耐热性、细胞壁成分、信号转导途径等。曲霉菌感染引起的机体免疫反应可因菌株变异产生不同致病力及宿主的不同免疫状态而出现差异,表现出高低不等的感染性。研究烟曲霉与免疫系统的作用机制,可为研发烟曲霉感染的诊断治疗方法提供新思路。

利用酵母重组SSB抗原建立间接ELISA法检测抗SSB抗体的初步研究

目的:利用纯化的酵母重组SSB抗原建立间接ELISA法,用于检测抗SSB抗体。方法:将毕赤酵母菌重组表达的SSB抗原包被于聚苯乙烯微量反应板,与待检血清中抗SSB抗体反应后,经洗涤,再加入辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG与之结合,然后用TMB作用显色。结果:本法的敏感性和特异性分别为93.33%和100%,与欧蒙斑点酶免疫法检测结果之间的符合率为94.87%。结论:本法敏感性和特异性均较高,具有很好的临床诊断应用前景。

尿液中检测循环miRNA的研究进展

MicroRNA（miRNA）是一类进化上保守的非编码小分子RNA,作为基因的内源性调节物,可与特异的mRNA的3非翻译区结合,诱导mRNA降解干扰蛋白质合成或抑制翻译。目前已在人体的胞外环境确认了一系列miRNA,发现miRNA可由细胞和组织释放入循环系统,稳定存在于血清、血浆、尿液和其他体液中,可作为多种疾病和组织损伤的非侵入性生物标志物。

几种炎症标志物在小儿发热疾病中的诊断意义

目的研究降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)和白细胞计数(WBC)在小儿发热疾病中的诊断意义。方法选取2011年6月至2012年2月该院儿科收治的186例发热患儿为研究对象(实验组),采用回顾性分析方法,根据出院时的诊断结果,将其分为感染组,包括细菌、病毒及支原体(n=113)、非感染组(n=63),同时,将健康儿童纳入对照组(n=30)。2组受试儿童的血清PCT、CRP、ESR和WBC检测水平,与对照组健康儿童进行统计学比较。结果感染组患儿PCT、CRP、ESR、WBC较对照组明显升高(P<0.05),但非细菌感染组与对照组之间无明显升高,比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合检测PCT、CRP、ESR、WBC在小儿发热疾病鉴别诊断中,具有重要意义。

国产循环酶法检测同型半胱氨酸试剂盒的分析性能评价

目的 对某国产循环酶法同型半胱氨酸试剂盒进行性能评价。方法 依据CLSI-EP相关文件,在AU2700生化仪上对该试剂盒的精密度、线性范围、可报告范围、生物参考区间验证、干扰试验等方面进行性能评价;并与西门子化学发光法进行比对分析,计算相关系数和直线回归方程,根据回归方程计算同型半胱氨酸在医学决定水平处的预期偏倚和预期偏倚的95%可信区间并判断偏倚是否可以接受。结果 批内精密度（CV）为0.94%、1.41%,批间CV为3.00%、2.60%;线性范围5.0~50.0μmol/L,最大稀释倍数为20,临床可报告范围5.0~1 000.0μmol/L;血红蛋白≤5g/L、三酰甘油≤7.8mmol/L、抗坏血酸≤1.7mmol/L、胆红素≤0.68mmol/L,对试验无明显干扰;两种分析仪结果间均呈良好的线性关系,其相关系数r均大于0.975,在医学决定水平处的系统偏倚临床可以接受。结论 该国产同型半胱氨酸测定试剂盒在AU2700全自动生化仪上的分析性能良好,可应用于临床检测。

泛耐药鲍曼不动杆菌中发现β-内酰胺酶基因新的变异型ADC-65、ADC-66

目的调查一组泛耐药鲍曼不动杆菌(PDR-ABA)中β-内酰胺酶基因存在和变异情况。方法收集2010年7月至2010年12月某医院住院患者之痰液标本中分离的泛耐药鲍曼不动杆菌共20株,用分子鉴定法鉴定菌种,再用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析A类～D类共34种β-内酰胺酶基因。结果本组20株泛耐药鲍曼不动杆菌共检出TEM-1型20株(100.0%)、PER-1型16株(80.0%)、OXA-23型20株(100.0%)、OXA-66型20株(100.0%)、ADC-30型16株(80.0%)、ADC基因新的变异型ADC-65型3株(15.0%)(GenBank登录号:JX109941)、ADC-66型1株(5.0%)(GenBank登录号:JX109942)。结论本组鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药主要与产TEM-1、PER-1、OXA-23型、OXA-66型、ADC等β-内酰胺酶基因相关,OXA-23型β-内酰胺酶基因阳性是泛耐药菌耐碳青霉烯类药物的原因。发现ADC基因存在新变异型:ADC-65、ADC-66是国内外首次报道。

CA7000和CA1500全自动凝血仪实验性能评价

目的对日本希森美康(Sysmex)CA7000和CA1500全自动凝血仪进行实验室比对。方法在Sysmex CA7000和CA1500血凝仪上进行不精密度、准确性、检测限、参考范围验证和携带污染率验证,所测指标为凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)和D-二聚体(DD)。结果两台仪器所测指标的变异系数均达到CLIA′88的检测要求。结论两台仪器性能优良,具有可比性。

AU2700生化分析仪检测血清糖化清蛋白的性能评价

目的应用AU2700生化分析仪对酶法测定血清糖化清蛋白(GA)试剂盒进行性能评价。方法依据CLSI-EP有关文件对Lucica GA-L测定试剂盒的精密度、准确度、线性范围及参考范围进行性能评价;比较两种试剂盒(酶法)检测结果的相关性。结果该试剂精密度高(CV<3%);稀释线性良好;GA的平均回收率为97.7%,清蛋白(ALB)的平均回收率为96.43%;两种试剂盒检测结果具有良好的相关性(r2=0.976,P<0.01)。结论 Lucica GA-L测定试剂盒在该实验室AU2700全自动生化仪上分析性能良好与厂家声明一致,可较好的应用于临床。

抗麦胶蛋白抗体和抗肌内膜抗体在麸质敏感性肠病诊断中的应用

目的评价抗麦胶蛋白抗体和抗肌内膜抗体Ig G、Ig A检测在诊断麸质敏感性肠病(gluten sensitive enterpathy,GSE)中的应用价值。方法选择2012年8月至2014年9月我院门诊及住院的GSE患者35例作为GSE组;同时期健康体检者50例作为健康对照组。采用ELISA法和间接免疫荧光法检测所有受试者的抗麦胶蛋白抗体和抗肌内膜抗体,并对实验数据进行统计学分析。结果 GSE组中抗麦胶蛋白抗体Ig G、抗麦胶蛋白抗体Ig A、抗肌内膜抗体Ig G和抗肌内膜抗体Ig A的阳性率分别为25.7%(9/35)、25.7%(9/35)、14.3%(5/35)和28.6%(10/35),均显著高于健康对照组,且差异均有统计学意义(P均<0.05)。抗麦胶蛋白抗体和抗肌内膜抗体联合检测的阳性率分别为45.7%(抗麦胶蛋白抗体Ig G+抗麦胶蛋白抗体Ig A)、37.1%(抗肌内膜抗体Ig G+抗肌内膜抗体Ig A)和48.6%(抗麦胶蛋白抗体Ig G、Ig A+抗肌内膜抗体Ig G、Ig A),均显著高于健康对照组,且差异均有统计学意义(P均<0.05)。抗麦胶蛋白抗体和抗肌内膜抗体单独诊断GSE的特异性和阳性预测值较高,可达100.0%(抗肌内膜抗体Ig G、Ig A),而敏感性均较低。抗麦胶蛋白抗体和抗肌内膜抗体联合检测诊断GSE的敏感性有所提高,其中最高的为48.6%(抗麦胶蛋白抗体Ig G、Ig A+抗肌内膜抗体Ig G、Ig A)。结论抗麦胶蛋白抗体和抗肌内膜抗体联合检测可提高诊断GSE的敏感性,减少漏诊。对GSE高危人群应检测抗麦胶蛋白抗体和抗肌内膜抗体进行筛查和诊断。

适配体技术在分子影像学中的应用现状及展望

分子影像学技术（molecular imaging）是运用影像学手段显示组织水平、细胞和亚细胞水平的特定分子,反映活体状态下分子水平变化,对其生物学行为在影像方面进行定性和定量研究的方法[1].分子影像是医学影像和分子生物学、化学、物理学、放射医学、核医学,以及计算机科学相结合的一门新兴交叉学科.在过去20年中,分子影像学发展迅速.在基础生物学领域,分子影像已被广泛应用于不同分子事件的研究,包括基因表达、分子转运/定位和分子相互作用等;在转化医学领域,分子影像已被常规用于疾病标志物鉴定、药物筛选及诊断[2].

STAT3与肿瘤

信号转导和转录活化因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)是参与一些细胞因子以及生长因子介导的信号转导的转录因子,在正常细胞内调控生长、增殖、分化以及凋亡等一系列生理活动.已有研究表明,JAK/STAT、MAPK、mTOR途径均可激活STAT3,持续的STAT3活化与肿瘤细胞的增殖、抗凋亡、侵袭、转移、血管形成及免疫逃逸密切相关;导致靶向抑制STAT3信号途径的寡核苷酸、小分子抑制剂、肽适配子在抗肿瘤治疗中的应用被广泛地开展.实验表明,它们具有抑制肿瘤的效果.本文重点综述了近几年STAT3在抗肿瘤进程中的功能及其在抗肿瘤治疗中的应用研究进展,并对相关问题进行讨论.

金黄色葡萄球菌毒性休克综合征毒素1核酸适配体的筛选和鉴定

目的:筛选能特异性识别毒性休克综合征毒素1(TSST-1)的DNA适配体,为金黄色葡萄球菌感染的治疗奠定实验基础。方法:体外合成含有25个随机序列全长为63个碱基的单链DNA(ss DNA)文库,以TSST-1为靶标,利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX),从ss DNA文库中筛选TSST-1适配体,利用生物信息学方法对适配体进行序列分析和结构预测,荧光定量法分析适配体的亲和力及特异性。结果:经过8轮筛选,文库的亲和力不断升高,获得了能识别TSST-1的DNA适配体T-7,它可选择性地与TSST-1结合,并测定其Kd值为103.8 nmol/L。结论:新型适配体T-7能选择性识别TSST-1,在金黄色葡萄球菌感染的治疗和诊断方面具有应用前景。

γ-catenin在白血病细胞中的表达

目的检测白血病骨髓标本及白血病细胞株中γ-catenin的表达情况,探讨γ-catenin在白血病细胞中的作用。方法以RT-PCR检测76例白血病骨髓标本、8例正常骨髓标本和白血病细胞株K562、HL-60、U-937、Jurkat中γ-catenin的mRNA表达情况,以Western blot和免疫细胞化学法检测上述白血病细胞株中γ-catenin蛋白表达及其分布情况。结果正常骨髓标本中γ-catenin表达阳性率为0(0/8),急性髓细胞白血病(AML)骨髓标本中γ-catenin表达阳性率为40.0%[12/30,其中M2型的阳性率为50.0%(7/14)],慢性髓细胞白血病(CML)骨髓标本中γ-catenin表达阳性率为13.6%(3/22),急性淋巴细胞白血病(ALL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)骨髓标本中γ-catenin表达阳性率均为25.0%(3/12)。白血病组γ-catenin表达阳性率与正常组相比,AML组有显著性差异(P<0.05,其中M2型最为显著),其余各组均无显著性差异(P>0.05)。RT-PCR及免疫组化检测可见HL-60和K562细胞γ-catenin呈强阳性,U-937和Jurkat细胞呈弱阳性表达,且γ-catenin主要表达于细胞质中。Western blot检测见K562和HL-60细胞γ-catenin呈阳性表达,而U-937和Jurkat细胞未见表达。结论作为细胞内信号传导分子,γ-catenin表达于AML组、HL-60及K562细胞中,可能与急性髓细胞白血病(特别是M2型)的发生有关。

稳定过表达幼虫巨大致死基因2(LLGL2)的食管鳞癌细胞系的建立

目的构建人幼虫巨大致死基因2(LLGL2)慢病毒表达载体,并建立稳定表达的人食管鳞癌KYSE450细胞系和TE-1细胞系。方法 PCR扩增人LLGL2全长基因序列,连接插入至pCDH-CMV-IRES-GFP-EF1-Puro慢病毒载体中,并对重组质粒进行双酶切及测序验证。将重组质粒pCDH-CMV-LLGL2-IRES-GFP-EF1-Puro和PHR、水疱性口炎病毒G蛋白(VSVG)共转染HEK293T细胞进行病毒包装,利用该病毒液感染KYSE450细胞和TE-1细胞。经嘌呤霉素筛选建立LLGL2稳定过表达的KYSE450细胞系和TE-1细胞系,用Western blot法检测LLGL2的表达情况。结果双酶切和测序分析,成功构建pCDH-CMVLLGL2-IRES-GFP-EF1-Puro慢病毒表达载体质粒。Western blot法检测结果显示,与对照组相比,感染病毒液的细胞LLGL2蛋白水平明显增高。结论成功建立了稳定过表达LLGL2基因的KYSE450细胞系和TE-1细胞系。

MYH9异常的实验室和临床诊断策略

肌球蛋白重链9（MYH9）异常是一组由MYH9基因突变引起的遗传性血小板减少症，包括May—Hegglin异常、Epstein综合征、Fechtner综合征和Sebastian综合征。MYH9异常常被误诊为原发性血小板减少性紫癜。本文对其发病机制、临床体征、实验室检查和鉴别诊断进行阐述，以进一步加深临床和实验室对MYH9的认识，同时引起临床的足够重视。

适配子技术在自身免疫性疾病研究中的应用

适配子是能通过特定三维结构与多种靶标紧密结合的寡核苷酸或肽。由于具有亲和力高，特异性好，分子量小，免疫原性低，结构稳定，易合成等优点，适配子替代传统抗体，在多种疾病的基础研究、药物筛选、临床诊断及疾病治疗中具有广泛的应用前景。现对适配子技术在自身免疫性疾病的诊断、治疗和致病机制研究中的应用现状及进展进行阐述。（中华捡验医学杂志，2012，35：212．215）

泛耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药基因的指标聚类分析

目的调查一组泛耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药相关基因与可移动遗传元件的关系,以了解它们之间是否存在关联。方法收集2010年7-12月某医院住院患者痰标本中分离的泛耐药鲍氏不动杆菌共20株,用gyrA和parC基因的分子鉴定法鉴定菌种,再用聚合酶链反应(PCR)方法分析50种水平转移获得的β-内酰胺类、氨基糖苷类获得性耐药基因和13种接合性质粒、转座子、插入序列、整合子等可移动遗传元件遗传标记检测等。结果 20株泛耐药鲍氏不动杆菌共检出5种获得性β-内酰胺类耐药基因、5种获得性氨基糖苷类耐药基因、2种抗菌制剂外排泵基因、5种可移动遗传元件的遗传标记,连锁检测ISaba1-ADC、ISaba1-OXA-23均呈阳性,而ISaba1-OXA-66均呈阴性;获得性耐药基因TEM-1、ADC、OXA-23、OXA-66、ant(3")-Ⅰ、aph(3')-Ⅰ,adeB、qacE△1与可移动遗传元件intⅠ1、tnpU、tnp513、IS26、ISaba1高度相关。结论泛耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药基因与可移动遗传元件一定的关联度,菌株携带的获得性耐药基因可能由可移动遗传元件介导。

基于酵母重组人细胞核抗原的多种自身抗体复合斑点胶体金法的研发与评价

目的建立一种简便快速的自身免疫抗体复合斑点胶体金法。方法将7种人细胞核抗原Sm D1、Sm B′、SSA52、SSA60、SSB、U1RNP 70K、Jo-1用毕赤酵母表达纯化后,点样于硝酸纤维素膜(NC)上,以此检测血清中相应的多种自身抗体,用SPSS 11.0统计软件分析,总符合率及7个组间符合率的比较用χ~2检验。结果与欧蒙自身抗体酶联免疫吸附法(ELISA)检测为不同自身免疫性疾病阳性血清291份和正常人血清60份比对,复合斑点胶体金法阳性符合率分别为:抗Sm D1 93.7%(59/63),抗Sm B′91.7%(55/60),抗SSA52 91.0%(81/89),抗SSA60 90.5%(76/84),抗SSB 98.6%(70/71),抗U1RNP 70K 93.6%(73/78),抗Jo-1 91.1%(51/56);阴性符合率为100%(60/60);总符合率为92.8%(465/501),统计学检验均无显著性差异(P<0.05)。结论复合斑点胶体金法简便、快速、准确,可满足临床对自身免疫性疾病联合诊断的需求。