大血小板检测及临床意义探讨

目的 评价ADVIA 12 0血液分析仪对大血小板的检测及大血小板的临床意义。方法 将富含大血小板标本分别用免疫学法、手工法、ADVIA 12 0和Coulter JT血液分析仪计数血小板 ,以免疫学法结果为参考值 ,比较手工法、ADVIA 12 0和Coulter JT与免疫学法的相关性 ;临床分析 2 90例大血小板标本。结果 3种方法与免疫学法比较的相关系数分别为 0 .812 1、0 .930 6和 0 .76 6 9;妊娠和恶性肿瘤患者大血小板分别占 17.9%和 2 0 .0 %。结论 ADVIA 12 0血液分析仪是目前检测血小板较理想的仪器之一 ;

肾上腺脑白质营养不良分子诊断中假基因干扰的排除

在基因组DNA水平 ,应用基因突变分析的方法对肾上腺脑白质营养不良进行分子诊断十分重要 .由于人体内存在多个肾上腺脑白质营养不良假基因的拷贝 ,应用PCR RFLP和PCR产物直接测序等常规方法难以检测一部分的基因突变 .为了排除基因组DNA中假基因的干扰 ,利用扩增阻滞突变系统 ,成功地分析了一个肾上腺脑白质营养不良 (R6 17G突变 )家系成员的基因型 .结果表明 ,扩增阻滞突变系统是排除假基因干扰的有效方法之一 .

毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1的特征研究

目的 研究毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的特征变化。方法 对表达产物行SDS -PAGE ,FPLC离子交换层析和分子筛 ,等电聚焦 ,脱磷酸反应 ,N端氨基酸测序 ,小鼠免疫接种。结果 毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的分子量较原核的大 ,易于纯化 ,等电点较理论值低 ,重组cC1已被磷酸化 ,N端携带了来自载体的 4个氨基酸 ,免疫原性较原核的明显增强。结论 毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的特征较原核的有了明显变化 ,尤其是蛋白易于纯化及免疫原性的增强 ,表明毕赤酵母表达系统非常适合重组亚单位疫苗的生产制备。

脑梗死患者血清S100B蛋白的动态变化及其临床意义

目的 探讨脑梗死患者血清S10 0B蛋白的动态变化及其临床意义。方法 用双抗体夹心(ELISA)法测定 41例脑梗死患者和 99例对照者血清S10 0B蛋白水平 ,同时观察其中 4例患者血清S10 0B蛋白动态变化。结果 脑梗死患者血清S10 0B蛋白水平显著高于对照组 (P <0 .0 0 1) ,发病后 2 4小时开始升高 ,第2～ 3天达到高峰。尤其梗死面积大的中、重型患者明显升高。结论 血清S10

高血压患者心房颤动急性发作后内皮功能生物学标志的改变

目的观察高血压患者发生急性心房颤动(房颤)后其内皮功能生物学标志的改变。方法高血压患者房颤急性发作者37例,在发作时间小于48h内复律,未给予抗凝治疗,复律后窦性心律维持1个月以上。根据是否服用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)和(或)血管紧张素受体拮抗剂(ARB)分为两组:急性房颤1组(使用ACEI/ARB,n=17)和急性房颤2组(未使用ACEI/ARB,n=20),选择20例高血压合并窦性心律者为对照组。急性房颤患者分别于复律前,复律后1、7、14和30天检测血浆内皮素(ET)、一氧化氮(NO)、假性血友病因子(vWF)及可溶性E-选择素水平,并与对照组进行比较。结果两个急性房颤组房颤急性发作时ET、vWF和E-选择素水平均显著高于对照组,NO水平显著低于对照组;两急性房颤组间上述指标无显著差异。复律后ET在急性房颤1组于第7天降至对照组水平,急性房颤2组于第30天降至对照组水平;NO、vWF水平在急性房颤1组于第14天恢复至对照组水平,急性房颤2组于第30天恢复至对照组水平;两组急性房颤患者E-选择素均于复律后第1天迅速上升,于第7天基本恢复到对照组水平。结论高血压患者房颤急性发作时存在内皮功能障碍,复律后其内皮功能障碍可持续相当一段时间,ACEI/ARB类药物有助于其内皮功能的恢复。

革兰阴性杆菌菌种分布及耐药性和分子流行病学研究

目的:了解我院多重耐药革兰阴性杆菌菌种分布、耐药性及分子流行病学状况。方法:收集2004年9月至2006年1月我院住院和门诊患者样本分离出的革兰阴性杆菌,分析多重耐药发生率、菌种分布、样本分布和药物敏感试验结果;用双纸片确证试验检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率;采用肠杆菌科基因间重复序列PCR(ERIC-PCR)检测菌株间的同源关系。结果:多重耐药株发生率为92.37%(605/655);分离率居前3位的菌种为肺炎克雷伯菌(23.05%)、大肠埃希菌(22.29%)和铜绿假单胞菌(15.73%);大肠埃希菌主要分离自尿液,肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌主要分离自痰液;分离的各菌种对美罗培南、亚胺培南、他唑新虽有较高的敏感率,但耐药率呈上升趋势;多重耐药大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs的发生率分别为61.54%(32/52)和47.83%(22/46);存在ESBLs菌株在院内的传播扩散。结论:临床上应重视革兰阴性杆菌引起的感染,合理选用抗生素和严格消毒措施。

肝癌细胞系BEL-7402中siRNA表达载体介导靶向c-myc基因

目的:探索经载体介导的RNA干涉对肝癌细胞cmyc基因表达抑制的可行性。方法:设计并合成2条靶向癌基因cmyc的RNA干涉模板片段,分别将其连接至pSilencer1.0U6载体上构建siRNA真核表达载体;脂质体转染法将上述重组质粒转入BEL7402肝癌细胞株。半定量RTPCR分析cmyc基因的表达抑制效率,以及cmyc基因表达下调细胞中CDK4、hTERT和Gadd45β基因表达的改变。结果:获得2个能在细胞内有效转录生成靶向cmyc基因siRNA的重组载体pSicmyc1和pSicmyc2;其中pSicmyc2可有效介导肝癌细胞BEL7402cmyc基因的表达抑制,抑制率高达90%以上;在cmyc基因经RNAi抑制的细胞中,CDK4和hTERT基因的表达分别下调至85%和57%;而Gadd45β的表达上调约110%。结论:肝癌细胞BEL7402中cmyc基因的表达可被载体介导诱发的RNA干涉有效抑制,进而导致细胞中与增殖和凋亡相关基因的表达改变。

新的肾上腺脑白质营养不良基因突变1例的鉴定

目的 :对 1例肾上腺脑白质营养不良 (ALD)患者及其家系成员的ALD基因的突变类型进行鉴定 .方法 :以外周血RNA为模板 ,采用长链RT PCR技术 ,分 4个片段扩增ALD基因mRNA的编码序列 ,对 4个PCR产物进行直接测序 ,筛查整个基因编码区 .通过限制性内切酶酶切分析患者及其家系成员基因组ALD基因片段 ,以进一步确证所发现的基因突变 .结果 :位于患者ALD基因第 6外显子的第 5 0 8位密码子存在一个新的错义突变CCC→CTC (P5 0 8L) ,患者母亲为突变携带者 ,患者父亲和妹妹不存在此突变 .结论 :发现中国ALD患者一个新的ALD基因突变 ,即P5 0

凝血因子Ⅶ基因突变的检测

目的 为检测福建省福州市一个遗传性凝血因子缺乏症先证者的因子Ⅶ基因突变类型。方法 采有ＰＣＲ结合限制性内切酶ＨｇｉＣＩ，以先证者及其母亲的 ＦⅦ基因片进行分析。结果表明先证者的 ＦⅦ基因为 Ｃ３２９Ｇ纯合子，其母亲为杂合子。结论 该家系为ＦⅦ基因存在Ｃ３２９Ｇ突变的第２个遗传性因子Ⅶ缺乏症家系。

三种简易提取全血基因组DNA方法的比较

目的比较三种快速、简便、适用、低成本的从全血中提取基因组DNA的方法。方法选用快速氯仿-异戊醇法、简化盐析法、改良碘化钾法直接从全血中提取基因组DNA。结果改良碘化钾法提取的DNA纯度及含量最高,快速氯仿-异戊醇法次之,简化盐析法则相对较低。结论改良碘化钾法为较好的提取基因组DNA的方法。

血清甲状腺球蛋白抗体的斑点免疫金渗滤法

血清甲状腺球蛋白抗体的斑点免疫金渗滤法冯修高唐玉钗朱忠勇叶大付杨丽珠①李珍儿＊兰小鹏黄俏佳（南京军区福州总医院全军医学检验中心，福州３５０００１）关键词斑点免疫金渗滤法抗体甲状腺球蛋白血清甲状腺球蛋白抗体（ＴｇＡｂ）的检测，对自身免疫性甲状腺疾病的诊...

血清丙氨酸氨基肽酶(AAP)测定在诊断肝胆疾病中的应用

为观察血清丙氨酸氨基肽酶 (AAP)水平对肝胆疾病的临床诊断价值。用自动分析仪速率法测定 2 2 9名肝胆疾病患者和 70名健康人血清AAP活力。结果显示肝癌、各类肝炎、胆道阻塞病人血清AAP活力明显高于健康对照组 (P <0 0 1) ,且与γ -谷氨酰转肽酶 (γ -GT)、碱性磷酸酶 (ALP)活力呈正相关 ;与血清总胆红素 (T -Bil)、丙氨酸转氨酶 (ALT)不存在明显相关性。结论 :在肝胆疾病诊断中 。

人干燥综合征抗原A毕赤酵母分泌型表达载体的构建

目的:构建表达人干燥综合征抗原A(SSA)的毕赤酵母分泌型表达载体。方法:以人白血病淋巴细胞HL-60株cDNA为模板,PCR扩增目的基因SSA,纯化,双酶切,DNA浓缩回收,插入酵母分泌型表达载体pPIC9k,热冲击法转化感受态大肠杆菌JM109,阳性克隆提取质粒,双酶切鉴定并测序。结果:PCR产物大小符合要求,重组质粒pPIC9k-SSA双酶切鉴定与预期一致,测序结果正确。结论:成功构建SSA毕赤酵母分泌型表达载体,为下一步取代从动物胸腺中人工提取低纯度、低产量的SSA抗原,研制新型抗SSA诊断试剂盒打下基础。

长链RT-PCR在若干遗传病基因突变分析中的应用

目的 以 3个遗传病为例 ,探讨长链 RT- PCR在基因突变分析中的应用。 方法 采用长链 RT- PCR扩增 AL D、ATP7B和 FV的 m RNA编码区。从凝胶中回收预期扩增产物 ,再以分段或全长方式进行二次 PCR。对二次 PCR产物进行直接序列测定 ,查找序列突变。 结果 在长链 RT- PCR中 ,三种 m RNA的编码区全长均得到扩增 ,预期扩增产物分别为 2 4 4 0 ,4 4 80 ,6 789bp。在二次 PCR中 ,分段扩增策略和全长扩增策略均可获得大量的特异性产物 ,后者均可直接用于序列测定。 结论 长链 RT- PCR对于长链 m RNA的序列分析是一个简便可靠的方法。