siRNA介导人结肠癌细胞诱骗受体3基因表达抑制的研究

目的:研究siRNA对结肠癌细胞株SW480 DcR3基因表达的影响。方法:化学合成靶向DcR3基因的4组siRNA,用脂质体转染试剂转染结肠癌细胞株SW480,应用噻唑兰(MTT)法检测siRNA对细胞生长的作用,RT-PCR和Western blot方法检测DcR3基因mRNA水平和蛋白表达量的变化。结果:与对照组相比,MTT试验结果显示各组siRNA对细胞增殖均有明显的抑制效应,但此抑制效应随时间延长而减弱。Western blot结果显示DcR3蛋白表达量明显降低。RT-PCR显示,转染后细胞内DcR3 mRNA的表达量与空白对照组相比降低至24%。结论:DcR3 siRNA通过特异、高效地沉默结肠癌细胞DcR3 mRNA的表达,发挥抑制结肠癌细胞生长的作用。

Ro52蛋白的分子生物学研究进展

Ro52蛋白作为靶抗原,存在于多种自身免疫性疾病,如干燥综合征、系统性红斑狼疮、皮肌炎等患者的血清中。Ro52蛋白是TRIM蛋白家族成员(TRIM21),其分子内含有RING-finger、B-box、卷曲螺旋结构域,分别具有不同的生物学功能。Ro52蛋白在免疫防御中的作用日渐为研究者所关注,如Ro52与IgG分子的作用、Ro52作为一种E3泛素连接酶与其他信号分子的作用等。其自身泛素化和广泛的泛素化作用已经在Ro52与干扰素的作用中得到了体现。迄今,Ro52在自身免疫性疾病中的具体致病机制还不清楚。我们尝试通过介绍Ro52的分子生物学特点及其与相关活性分子的相互作用的最新研究进展,初步探索其可能的致病机制。

20株亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌耐药机制及分子流行病学研究

目的对20株亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌耐药机制和分子流行病学进行研究。方法改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型;PCR法检测碳青霉烯酶、Amp C酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因及整合子,并进行测序及BLAST比对确定基因型;脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)分析菌株同源性和遗传相关性;并进行药敏试验结果分析。结果20株菌均携带KPC-2、TEM-1、SHV和CTX-M型基因,未检测到IMP、VIM、OXA和NDM碳青霉烯酶基因和amp C酶基因;20株菌均有I类整合子,其中18株的整合子整合有耐药基因盒,主要整合基因是aad A2。20株菌中19株被PFGE分型为13个型别,其中P1型和P7型各有3株,P2和P 10型各有2株;20株菌中17株为ST11型,其余3株分别为ST290、ST147和ST967型;20株菌呈多重耐药或泛耐药。结论携带KPC-2是20株肺炎克雷伯菌耐亚胺培南的主要原因,多重耐药或泛耐药与其他β-内酰胺酶和整合子有关;院内存在克隆株流行;检出ST290和ST967型别产KPC肺炎克雷伯菌。

20株奇异变形杆菌耐药基因和整合子分布及亲缘关系分析

目的了解该院神经内科病区奇异变形杆菌院内感染状况与耐药机制。方法对20株不重复奇异变形杆菌采用PCR法检测超广谱β内酰胺酶（ESBLs）、头孢菌素（AmpC）酶、碳青霉烯酶（KPC）和金属β内酰胺酶（MBLs）耐药基因并测序;PCR法检测整合子并测序;脉冲场凝胶电泳法分析菌株间亲缘关系;对这20株奇异变形杆菌进行药敏试验并分析。结果从这20株奇异变形杆菌中均检测出TEM-1和CTX-M-14型耐药基因,10株菌中分离出CMY-2型耐药基因。从19株菌中扩增出Ⅰ类整合子,分别整合的基因盒有＂aacA4＋cmlA1＂,＂dfrA12＋orfF＋aadA2＂和＂dfrA32＋ereA＋aadA2＂。脉冲场凝胶电泳结果聚类分析20株菌可分为P1～P11的11个PFGE型别,其中P1～P3的12株菌为同一克隆株。20株菌对美罗培南、阿米卡星、氨曲南、头孢他啶和哌拉西林/他唑巴坦的敏感率高。结论该院神经内科病区出现奇异变形杆菌同克隆株的传播;携带的耐药基因以CTX-M-14和CMY-2型为主;Ⅰ类整合子携带率高,耐药基因盒以＂aacA4＋cmlA1＂和＂dfrA12＋orfF＋aadA2＂为主;菌株对美罗培南、阿米卡星和氨曲南均为敏感;临床科室应同样重视由奇异变形杆菌引起的院内感染,加强感染控制措施。

筛选环孢霉素A适体的SELEX技术的建立(英文)

体外合成一个全长78个核苷酸,中间含35个随机序列的随机单链寡核苷酸序列(ssDNA)文库,运用指数富集的配体系统进化(SELEX)技术,以环孢霉素A(CsA)为靶目标,以磁珠作为筛选介质,利用生物素-链酶抗生物素-辣根过氧化物酶系统,检测每轮ssDNA文库与CsA的亲和力,筛选并鉴定CsA特异性的适体.经过11轮的筛选,ssDNA文库与CsA的亲和力呈上升趋势.将第10轮筛选产物克隆测序并运用相关软件进行一级结构和二级结构分析.随机挑选的19个克隆适体,根据一级结构的同源性可分为5个家族,二级结构预测以茎环(发夹)为主,这可能是适体与CsA作用的部位.CsA特异性的适体将用于酶联法、免疫荧光法等对CsA进行检测.

精子生成障碍患者Y染色体AZFc区部分缺失分析

目的:探讨人类Y染色体无精子症因子C区(AZFc)部分缺失对男性精子生成的影响。方法:选择Y染色体AZFc区9个序列标签位点(STS)sY1258、sY1291、sY254、sY255、sY1201、sY1206、sY1161、sY1197、sY1191,以ZFX/ZFY(X/Y连锁锌指蛋白基因)和SRY(sY14)基因为内对照。对160例Y染色体微缺失筛查均未发现缺失的无精子症及严重少精子症患者,76例正常生育男性DNA进行多重PCR扩增。疑有DAZ基因缺失的个体,采用基因单核苷酸变异分析(single nucleotide variants,SNV)技术,对DAZ基因4个拷贝中的单核苷酸多态位点进行检测,以确定DAZ基因的拷贝缺失类型。结果:160例无精子症及严重少精子症患者(病例组)gr/gr(sY1291)缺失10例,占6.3%;b2/b3(sY1191)缺失14例,占8.8%;新发现sY1291,sY1197缺失1例,占0.6%;b1/b2缺失1例,占0.6%;b1/b3缺失1例,占0.6%。76例正常生育男性(对照组)检出gr/gr缺失4例,占5.3%;b2/b3缺失4例,占5.3%。gr/gr缺失和b1/b3缺失(对照组和病例组)SNV分析均为DAZ1/DAZ2缺失;b2/b3缺失(对照组和病例组)SNV分析均为DAZ3/DAZ4缺失。1例sY1291,sY1197缺失的DAZ-SNVsY587位点缺失,1例b1/b2缺失者DAZ基因未缺失。结论:b2/b3(sY1191)缺失、gr/gr(sY1291)缺失在我国正常人群中多见,为基因组多态性;b1/b2缺失、b1/b3缺失和sY1291,sY1197缺失可能是导致精子生成障碍的高风险因子。

905株阴沟肠杆菌的临床标本分布及耐药性分析

目的:监测我院7年内阴沟肠杆菌的流行状况和耐药特点,为临床合理使用抗生素提供参考。方法:使用西门子公司的Microscan Walkaway 40SI全自动微生物鉴定/药敏测试系统进行鉴定和药敏试验。结果:阴沟肠杆菌主要引起呼吸道感染,对亚胺培南的敏感性最高,但近两年出现耐药菌株;对第一代头孢菌素头孢唑啉和广谱青霉素类的耐药率>90%;对头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/舒巴坦耐药率都在30%左右;对其他抗菌药耐药率>50%。结论:阴沟肠杆菌多重耐药的问题日益严重,应监测其耐药变化趋势,指导临床合理使用抗生素。

甲胎蛋白异质体在诊断肝细胞癌中的价值分析

目的:评价甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在肝细胞癌(HCC)中的诊断价值。方法:收集福州总医院2009年1月至2010年6月住院及门诊患者血清,其中HCC患者114例,Cirrhosis患者53例,Hepatitis患者40例。AFP-L3采用AFP-L3亲和吸附离心管分离,血清AFP和AFP-L3水平采用化学发光法检测,计算AFP-L3的百分含量。结果:HCC、Cirrhosis和Hepatitis3组AFP阳性率分别为62.3%、13.2%、10%,AFP-L3阳性率分别为81.6%、3.8%、7.5%。结论:对于诊断HCC,AFP-L3灵敏度和特异度优于AFP,结合约登指数,显示了AFP-L3在诊断HCC方面能力优于AFP。

金黄色葡萄球菌外毒素B特异性适体的筛选及其应用

目的:利用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术,筛选能与金黄色葡萄球菌外毒素B(SEB)特异、高亲和力结合的单链DNA(ssDNA)适体,并将该适体应用于患者血清标本的检测。方法:从体外合成的96核苷酸随机ss-DNA文库中,以羧基磁珠作为筛选介质,经逐步PCR扩增、筛选,获得针对SEB的高亲和力、高特异性适体;利用荧光素标记适体测定筛选过程中各轮结合力;利用酶连接适体方法检测适体特异性和结合力。结果:经过13轮筛选,ssDNA文库与SEB的结合百分率从1.1%提高到39.8%,增加了36倍;获得的ssDNA适体(A11)针对SEB的特异性强,与金黄色葡萄球菌表面蛋白A(SPA)结合低,并能初步识别患者血清。结论:利用SELEX技术筛选获得了特异结合SEB的高亲和力的ssDNA适体,为金黄色葡萄球菌的临床诊断与治疗奠定了基础。

适配体芯片技术及其应用

适配体（aptamers）是通过指数级富集配体的系统进化技术（systematicevolutionofligandsbyexponentialenrichment，SELEX）筛选而获得的某种单链DNA或RNA分子，这些分子能够折叠成特定的三维空间结构与其所针对的各种靶物质特异地结合，而不是依赖特异性的碱基排列。适配体芯片又称适配体微阵列，是继基因芯片、蛋白质芯片之后发展起来的一种新芯片。

肾移植后并发急性白血病和再生障碍性贫血的5例报告和文献复习

目的探讨肾移植并发急性白血病(AL)和再生障碍性贫血(AA)的临床及实验室检查特征。方法回顾性分析1993年1月到2010年7月该院收治的肾移植患者中并发AL(3例)和AA(2例)的5例报告的临床及实验室检查资料。结果 5例患者确诊血液病后调整免疫抑制剂的用量后自动出院。结论肾移植后并发AL和AA在临床上并不少见,它可能与免疫抑制剂、抗生素的长期使用有关。

SELEX技术在病毒感染诊断和治疗中的应用

指数富集的配体系统进化(SELEX)技术是一种新的组合化学技术,它利用人工合成的随机寡核苷酸文库,通过体外多轮筛选与扩增,获得能与靶物质特异性结合的寡核苷酸适体。适体的靶分子广泛,包括病毒代谢相关产物,且与靶物质结合的亲和力高、特异性强,在体内代谢及稳定性等方面优于抗体。在细胞和动物模型中,适体显示出很多优于抗体的特性,而且已经有适体作为药物进入临床试验阶段。这种体外筛选技术是一种较成熟的技术,由此产生的适体具有较好的理化特征,可以抑制病毒复制感染的各个阶段,而且在病毒感染所引发的相关疾病诊断和治疗等方面具有较好的应用前景。

用SELEX技术筛选环孢霉素A适体

目的:运用指数富集的配体系统进化(SELEX)技术筛选并鉴定环孢霉素A(CsA)特异性适体。方法:合成全长78个核苷酸中间含35个随机序列的随机单链DNA(ssDNA)文库,通过SELEX方法,以CsA为靶标、磁珠为筛选介质,利用生物素-链亲和素-辣根过氧化物酶系统检测每轮ssDNA文库与CsA的亲和力,筛选针对CsA的适体,将最后一轮筛选产物克隆测序,并运用相关软件进行一级结构和二级结构分析。结果:经过10轮筛选,ssDNA文库与CsA的亲和力呈上升趋势,随机挑选的19个克隆适体根据一级结构的同源性可分为5个家族,二级结构预测以茎环(发夹)为主。结论:通过改良SELEX方法筛选得到了CsA特异性的适体。

61例国内外首报的染色体异常核型与临床关系研究

目的了解国内外首报的染色体异常与生育缺陷和小儿智力低下的关系。方法抽取6784例患有生育缺陷和小儿智力低下患者外周血,进行常规染色体分析,部份患者孕中期抽取羊水、脐带血进行染色体核型分析。结果发现染色体异常核型714例,其中61例为国内外首次发现的染色体异常核型。通过对61例特殊患者进行临床病例分析,发现29例患者有习惯性流产史,占总数48%,10例患者为无精子或严重少精子症,占总数16%,5例患者为不育症,占总数0.8%,5例患者精子畸形率>30%,占总数0.8%,3例表现为原发性闭经,占总数0.5%,2例生育畸形儿,占总数0.3%,2例智力低下,占总数0.3%,3例胎儿发育畸形,占总数0.5%,2例平衡易位携带者,占总数0.3%。结论染色体异常是导致生育缺陷和小儿智力低下的遗传因素之一。

耐亚胺培南肺炎克雷伯菌耐药基因检测与分子流行病学研究

目的对耐亚胺培南肺炎克雷伯菌的耐药基因携带情况及分子流行病学特征进行研究,以降低耐药率。方法对2013年10月-2014年5月临床分离的15株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌,采用Hodge试验检测碳青霉烯酶表型;采用PCR法检测碳青霉烯酶、AmpC酶和ESBLs耐药基因及整合子,进行测序及网上比对确定基因型;采用肠杆菌科基因间重复序列(ERIC)和多位点序列分型(MLST)对菌株进行同源性和遗传相关性研究。结果 15株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌均检出KPC-2、TEM-1、SHV和CTX-M型基因,SHV12和CTX-M-24为主要基因亚型;未检测到IMP、VIM、OXA和NDM碳青霉烯酶基因和AmpC酶基因;各带有Ⅰ类整合子,整合的主要耐药基因为aadA2;同源性和遗传相关性分析,15株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌可分为A、B、C 3种ERIC类别,12株A菌为ST11型,2株B菌为ST290和ST147,1株C菌为ST967;15株肺炎克雷伯菌呈多药耐药或泛耐药,仅磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的敏感率>50.0%。结论 15株肺炎克雷伯菌的多药耐药或泛耐药与菌株携带KPC-2碳青霉烯酶、CTX-M型ESBLs和其他β-内酰胺酶及整合子有关;产KPC-2肺炎克雷伯菌在神经外科病区呈克隆传播,ST11型菌株为此次流行的主要株;发现ST290和ST967型产KPC-2肺炎克雷伯菌。

Y染色体无精子因子a区缺失伴三条染色体畸变无精子症一例

患者男性，31岁，结婚多年不育。身高、体重、智力及外阴发育正常。睾丸16mL[正常成年男性睾丸体积：（19．8±7．1）ml，]，3次精液检查均未见精子。血清雌二醇、促黄体激素、睾酮和泌乳素均正常．但促卵泡激素22U／L（正常参考值为5～20U／L）。

嗜麦芽窄食单胞菌410株的分布和耐药分析

嗜麦芽窄食单胞菌是临床常见的非发酵菌，常寄居在人的皮肤、呼吸道中，由于住院患者大量使用广谱抗菌药物和免疫抑制剂，引起的感染日益增多。且其天然耐药和耐药机制复杂，给临床抗感染治疗带来极大的困难。本文回顾性总结2008—2011年南京军区福州总医院分离出的410株嗜麦芽窄食单胞菌，初步分析其感染状况和耐药性，为临床治疗提供参考。

诱骗受体3基因在原发性肺癌的扩增表达及临床意义

诱骗受体3（decoyreceptor3，DcR3）又称为TR6，是20世纪末发现的新肿瘤坏死因子（TNF）受体。DcR3不仅有抗凋亡作用，而且还能调控免疫细胞的活性与分化，及下调机体免疫系统，并与肿瘤免疫逃逸密切相关…。目前，有关原发性肺癌中DcR3基因表达研究报道存在争议。本研究通过对原发性肺癌患者血清和手术肺癌组织中DcR3基因扩增和表达水平的研究，以探讨DcR3基因扩增和表达之间的关系及其临床意义。

幼儿、胎儿染色体异常伴畸型五例

例1胎儿，孕28周。B超检查提示胎儿脊柱裂，心脏畸形，房间隔缺损，主动脉狭窄，消化道、生殖道畸形，颅形异常，前额后缩。行引产手术时取脐带血培养，染色体核型为：46，XX，del（3）（pter→p25：），见图1。父母亲染色体核型正常。