hLRH-1调控结肠腺癌细胞SW480增殖的分子机制

目的初步探讨人核受体hLRH-1在结肠癌发生发展中可能的生物学功能。方法真核表达质粒pcDNA3-hLRH-1经脂质体介导转入SW480细胞中,RT-PCR和Western blot法分别检测外源基因mRNA及蛋白水平的表达;MTT法分析hLRH-1过表达对SW480细胞生长增殖的影响,同时行实时定量RT-PCR法分析细胞生长增殖相关基因Cyclin E1和Cyclin D1、以及凋亡调控相关基因Pten和Rb1的表达。结果hLRH-1过表达的SW480细胞增殖速度明显加快,同时其Cyclin E1基因的表达显著增高,而Pten和Rb1在hLRH-1过表达的SW480细胞中均呈明显的表达下调。结论外源hLRH-1的表达既通过上调Cyclin E1基因的表达而促进SW480细胞增殖,还可能通过调节Pten和Rb1基因的表达而参与细胞凋亡的调控。

人甲胎蛋白基因启动子siRNA表达载体的构建及效应鉴定

目的:探索基于人甲胎蛋白基因启动子构建的siRNA表达载体介导目的基因RNA干扰的可行性,为实现肝癌细胞靶向RNAi治疗作一初步研究。方法:PCR法扩增获得人甲胎蛋白基因启动子并插入pSilencerl．0-U6中以置换其U6启动子;依据hLRH-1基因RNAi靶位点设计出siRNA模板DNA,体外合成相应寡核苷酸片段后经退火形成短双链,再克隆构建成靶向人hLRH-1基因siRNA表达载体;脂质体转染法将上述重组质粒转入HepG2细胞中,实时定量PCR法初步分析所建系统在AFP表达细胞中触发靶基因hLRH-1的RNAi效应,以及hLRH-1调控下游靶基因的表达改变。结果:获得人甲胎蛋白基因启动子驱动的siRNA表达载体pSiAFP。所建的RNAi载体系统可在表达AFP的HepG2细胞中有效诱导靶基因hLRtH-1表达下调,抑制率约达85%;同时调控hLRH-1下游靶基因CyclinE1与Oct 4的表达相应下调。结论:人甲胎蛋白基因启动子驱动的siRNA表达载体可在表达AFP的HepG2细胞中有效介导靶基因的RNAi效应。

先天性心脏病胎儿心肌转录因子GATA-4基因突变检测

目的分析先天性心脏病胎儿中GATA-4基因的突变情况,期望为进一步阐明先天性心脏病发病的分子机理提供新的实验依据。方法应用PCR-DNA测序技术在20例先心病胎儿病变部位的心肌组织中筛查GATA-4基因突变。结果20例中,在1例先心病胎儿(ASD、VSD)中检测到一个突变(V267M),位于外显子4;在3例先心病胎儿中发现编码241位氨基酸(半胱氨酸)密码子的第三位碱基均存在杂合同义突变(C→T),位于外显子3,并证实是一个单核苷酸多态性(SNP)位点(rs1062215)。结论GATA-4基因突变(V267M)可能与胎儿先天性心脏病发病有关;GATA-4723C/T基因多态性(rs1062215)与胎儿先天性心脏病的关系有待进一步证实。

基于载体的RNA干扰介导人核受体hLRH-1表达稳定抑制肝癌细胞BEL-7402的基因表达谱分析(英文)

为建立一hLRH-1表达稳定抑制的细胞系,我们构建了hLRH-1基因靶向的稳定RNA干涉载体(pSineohLRH-1)并导入肝细胞癌细胞BEL-7402。通过半定量RT-PCR分析发现,携有pSineohLRH-1的BEL-7402细胞其hLRH-1基因mRNA的表达抑制率达60％。此外,微阵列法基因表达谱分析结果表明,与未干涉的对照细胞相比,包括一些肿瘤相关的基因如Gadd45β和PTEN在内的405个基因在hLRH-1基因表达稳定下调的BEL-7402细胞中呈明显的表达差异,意示hLRH-1具比已知更为广泛的生物学功能。尽管hLRH-1与这些差异表达基因的确切关系尚有待进一步的实验探究,我们的发现仍为hLRH-1在肿瘤发生发展中可能的作用机制的揭示提供了新的线索。

人肝受体同系物1（hLRH-1）不同变异体在人胚胎组织的表达谱

目的分析人肝受体同系物1（hLRH-1）不同变异体在人胚胎组织的表达谱。方法通过设计特异引物，并经常规RT—PCR方法检测hLRH-lvl和hLRH-1在三例引产胎儿各组织中的表达情况；同时以实时荧光定量RT—PCR法分析总hLRH-1的mRNA的相对表达丰度。结果hLRH—lvl在人类各不同发育阶段的胎儿组织广泛表达，而hLRH-1则仅局限于肝、胃、小肠和胰腺组织。结论hLRH—lvl和hLRH-1在人胎儿组织表达谱的差异提示它们在早期胚胎发育中可能起不同的作用。

hLRH-1不同变异体在人胚胎组织的表达谱(英文)

目的分析hLRH-1不同变异体在人胚胎组织的表达谱。方法通过设计特异引物,并经常规RT-PCR方法检测hLRH-1v1和hLRH-1在三例引产胎儿各组织中的表达情况;同时以实时定量RT-PCR法分析总hLRH-1的mRNA的相对表达谱。结果检测的结果显示,hLRH-1v1在人类各不同发育阶段的胎儿组织广泛表达,而hLRH-1则仅局限于肝、胃、小肠和胰腺组织。结论hLRH-1v1和hLRH-1在人胎儿组织表达谱的差异提示它们在早期胚胎发育中可能起不同的作用。

人核受体hLRH-1不同变异体在多种肿瘤组织和细胞系中的表达

目的:初步分析人核受体hLRH-1不同变异体在多种肿瘤组织和细胞系中的表达。方法:常规RT-PCR法分析hLRH-1v1和hLRH-1在肝癌等多种肿瘤组织和HepG2等肿瘤细胞系中的表达情况,实时定量PCR法分析hLRH-1v1,hLRH-1和hOct4在HepG2,SMMC-7721和BEL-7402三株肝癌细胞系的表达水平。结果:hLRH-1v1的表达见于所有检测的12种类型肿瘤和8种恶性肿瘤细胞系,hLRH-1的表达则仅在12种类型肿瘤中的6种肿瘤组织中可检测到,但8种恶性肿瘤细胞系均为hLRH-1阳性表达;在HepG2,SMMC-7721和BEL-7402三株肝癌细胞系中hLRH-1v1和hOct4的表达呈正相关。结论:hLRH-1v1在肿瘤中广泛表达,可能在维持肿瘤干细胞的自我更新中发挥重要作用。