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非洲猪瘟病毒多重PMA-qPCR检测方法的建立及应用
1
作者
卓玛
钱炳旭
+2 位作者
吴晓东
戴建君
薛峰
《畜牧与兽医》
CAS
北大核心
2023年第4期93-101,共9页
本研究利用叠氮溴化丙锭(PMA)与多重荧光定量PCR(qPCR)技术相结合,建立了一种可以实现非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染性与非感染性(活/死病毒)鉴别的检测方法。通过对ASFV p72、CD2v、MGF110-14L基因保守序列设计特...
本研究利用叠氮溴化丙锭(PMA)与多重荧光定量PCR(qPCR)技术相结合,建立了一种可以实现非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染性与非感染性(活/死病毒)鉴别的检测方法。通过对ASFV p72、CD2v、MGF110-14L基因保守序列设计特异性引物及探针,建立p72、CD2v、MGF110-14L基因的多重qPCR检测方法。结果显示,本研究建立的多重qPCR检测方法具有较强特异性,与其他常见猪病毒性原无交叉反应;同时,该方法具有较高灵敏度,p72、CD2v、MGF110-14L基因的重组质粒标准品最低检出限均为102copies/μL。为弥补qPCR技术不能有效区分样品中活/死病毒的缺陷,本研究将构建的多重qPCR与PMA技术相结合。当加入PMA终浓度为10μg/mL、暗孵育10 min、光照强度40 W、光照15 min时,PMA能够抑制灭活病毒基因的扩增且对活病毒基因的扩增无影响;对比普通qPCR与多重PMA-qPCR的灵敏度可知,两者的灵敏度均为102copies/μL;将多重PMA-qPCR方法用于23份实际样品检测,结果显示,检测活病毒的准确率为100%,说明该方法能有效区分临床样品中具有感染性的ASFV。
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关键词
非洲猪瘟病毒
多重PMA-qPCR
基因缺失株
感染性病毒
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职称材料
题名
非洲猪瘟病毒多重PMA-qPCR检测方法的建立及应用
1
作者
卓玛
钱炳旭
吴晓东
戴建君
薛峰
机构
教育部动物卫生与食品安全国际联合研究实验室
南京农业大学三亚学院
中国动物卫生与流行病学中心
出处
《畜牧与兽医》
CAS
北大核心
2023年第4期93-101,共9页
基金
国家重点研发计划(2021YFD1800500,2020YFA0910200)
海南省科技专项资金(ZDYF2022XDNY248)
+1 种基金
江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(21)2038]
三亚市南京农业大学研究院指导基金项目(NAUSY-ZD08)。
文摘
本研究利用叠氮溴化丙锭(PMA)与多重荧光定量PCR(qPCR)技术相结合,建立了一种可以实现非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染性与非感染性(活/死病毒)鉴别的检测方法。通过对ASFV p72、CD2v、MGF110-14L基因保守序列设计特异性引物及探针,建立p72、CD2v、MGF110-14L基因的多重qPCR检测方法。结果显示,本研究建立的多重qPCR检测方法具有较强特异性,与其他常见猪病毒性原无交叉反应;同时,该方法具有较高灵敏度,p72、CD2v、MGF110-14L基因的重组质粒标准品最低检出限均为102copies/μL。为弥补qPCR技术不能有效区分样品中活/死病毒的缺陷,本研究将构建的多重qPCR与PMA技术相结合。当加入PMA终浓度为10μg/mL、暗孵育10 min、光照强度40 W、光照15 min时,PMA能够抑制灭活病毒基因的扩增且对活病毒基因的扩增无影响;对比普通qPCR与多重PMA-qPCR的灵敏度可知,两者的灵敏度均为102copies/μL;将多重PMA-qPCR方法用于23份实际样品检测,结果显示,检测活病毒的准确率为100%,说明该方法能有效区分临床样品中具有感染性的ASFV。
关键词
非洲猪瘟病毒
多重PMA-qPCR
基因缺失株
感染性病毒
Keywords
African swine fever virus
multiplex PMA-qPCR
gene-deleted strain
infectious virus
分类号
S852 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
非洲猪瘟病毒多重PMA-qPCR检测方法的建立及应用
卓玛
钱炳旭
吴晓东
戴建君
薛峰
《畜牧与兽医》
CAS
北大核心
2023
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