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PRRSV Nsp4基因突变株对β2M表达的影响
1
作者
康磊
刘珂
+8 位作者
王建忠
尹才
邱亚峰
魏建超
李蓓蓓
邵东华
李宗杰
粟硕
马志永
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第3期507-514,共8页
[目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp...
[目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测,在其DomainⅡ和DomainⅢ分别筛选出3个和5个不同的氨基酸位点,并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变,再将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒,将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞,并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M表达方面发挥作用。[结果]成功拯救出PRRSV D2-5(Nsp4-A80L)突变毒株,并且在Marc-145细胞上的生长动力学特性与野生毒株SH2020相似;而Nsp4基因其余位点突变则会导致PRRSV生长受到显著抑制从而无法进行试验。Western blot和RT-qPCR试验结果证实PRRSV D2-5毒株能够显著促进β2M在Marc-145和PAM细胞的表达,而野生毒株SH2020则表现出了对β2M表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M表达方面发挥重要作用,并且Nsp4-A80L突变能够显著促进β2M的表达。
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关键词
PRRSV
NSP4
Β2M
反向遗传平台
突变毒株
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题名
PRRSV Nsp4基因突变株对β2M表达的影响
1
作者
康磊
刘珂
王建忠
尹才
邱亚峰
魏建超
李蓓蓓
邵东华
李宗杰
粟硕
马志永
机构
南京农业大学动物医学院免疫学研究所/教育部动物卫生与食品安全国际联合研究实验室/江苏省动物免疫学工程实验室
中国
农业
科
学院
上海兽医
研究所
苏州市相城区
农业
技术综合服务中心
宁夏回族自治区
动物
疾病预防控制中心
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第3期507-514,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31972693,32273024)
上海市科技重大专项(ZD2021CY001)
农业科技创新计划项目(CAAS-ZDRW202203)。
文摘
[目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测,在其DomainⅡ和DomainⅢ分别筛选出3个和5个不同的氨基酸位点,并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变,再将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒,将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞,并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M表达方面发挥作用。[结果]成功拯救出PRRSV D2-5(Nsp4-A80L)突变毒株,并且在Marc-145细胞上的生长动力学特性与野生毒株SH2020相似;而Nsp4基因其余位点突变则会导致PRRSV生长受到显著抑制从而无法进行试验。Western blot和RT-qPCR试验结果证实PRRSV D2-5毒株能够显著促进β2M在Marc-145和PAM细胞的表达,而野生毒株SH2020则表现出了对β2M表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M表达方面发挥重要作用,并且Nsp4-A80L突变能够显著促进β2M的表达。
关键词
PRRSV
NSP4
Β2M
反向遗传平台
突变毒株
Keywords
PRRSV
Nsp4
β2M
reverse genetic platform
mutation strains
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
PRRSV Nsp4基因突变株对β2M表达的影响
康磊
刘珂
王建忠
尹才
邱亚峰
魏建超
李蓓蓓
邵东华
李宗杰
粟硕
马志永
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
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