海生素对AA肉鸡免疫器官发育的影响

研究了饲料中添加海生素对AA肉鸡免疫器官发育的影响。144只AA肉鸡，随机分为2组，分别在饲料中添加0、200ms／kg海生素，试验期42d，每周末每组取试验鸡6只，颈动脉放血致死。取胸腺、腔上囊、脾脏，Bouin液固定，制作石蜡切片，HE染色，显微观察并摄影。结果：7日龄和42日龄试验组的胸腺指数高于同日龄的对照组，差异极显著（P〈0．01）；7日龄试验组腔上囊的器官指数升高，差异显著（P〈0．05）；35日龄试验组脾脏的器官指数升高，差异显著（P〈0．05）。1～6周龄试验组中，胸腺、腔上囊和脾脏的组织结构也有不同程度的变化。其中脾的组织结构变化比较明显．尤其是脾小体变化甚为明显。试验表明：添加海生素能部分增加肉鸡免疫器官指数，促进免疫器官发育。

猪痢疾诊断技术研究进展

猪痢疾（swine dysentery，SD）又称血痢，黏液性下痢或细菌痢疾等，是由猪痢疾短螺旋体（B．hyodysenteriae）引起的一种肠道传染病。Whiting（1921）首次报道本病，1971年才确定其病原体为猪痢疾密螺旋体，现归为短螺旋体属。目前该病遍及世界主要养猪国家。我国于1978年由美国进口种猪时发现本病，上海市畜牧兽医研究所经临诊观察、粪便及大肠黏膜检查、病原分离培养、动物接种等确诊为猪痢疾。

猪群免疫力低下的原因及临床表现

根据影响猪场猪群免疫力低下的原因,如饲料营养、应激、疫苗接种、疾病、环境管理、药物和防疫消毒等因素,提出提高猪免疫力的一些措施,如提高饲料营养水平、消除应激因素、做好免疫工作,制定科学合理的免疫程序、改善猪场环境、建立人性化、合理的管理方式、合理使用药物和严格消毒制度等,提出养猪的一些见解。

猪细小病毒病诊断与防制的研究进展

猪细小病毒 (PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一。PPV最早是从培养细胞中发现并分离得到的一种小DNA病毒。研究表明 ,PPV不仅是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一 ,而且能够引起多种猪病。随着对猪细小病毒研究的不断深入 ,目前已经在猪细小病毒病原学、诊断与防制以及分子生物学等方面取得了进展。

副溶血弧菌TDH蛋白高效表达、免疫原性分析及初步应用

副溶血弧菌是引起细菌性食物中毒的主要食源性致病菌,耐热直接溶血毒素(theromostable direct hemolysin,TDH)是其公认的主要致病因子。本研究根据已发表基因序列(Gen Bank登录号:M10069)设计引物,以副溶血弧菌SHJLA株基因组DNA为模板,扩增编码TDH蛋白的基因,克隆至表达质粒p ET28a(+)中,重组质粒经限制性酶切鉴定后测序,结果表明插入片段长度为576 bp。重组原核表达质粒p ET28a-tdh转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经诱导可表达分子量约为27 k Da的融合蛋白,主要以包涵体形式表达。对包涵体进行复性,Western blot分析表明经过复性后的重组蛋白能够被感染副溶血弧菌SHJLA株的小鼠血清识别。重组蛋白免疫家兔,ELISA检测多抗血清效价在1:256 000以上。将该多抗初步应用于斑点-ELISA(DotELISA)方法的建立,TDH阳性的致病性副溶血弧菌检测到阳性斑点,而TDH阴性的副溶血弧菌及其他细菌未检测到特异性斑点。本研究可为深入研究TDH的蛋白功能,建立致病性副溶血弧菌免疫学快速诊断方法以及保护性疫苗的研制提供研究基础。

CpG寡核苷酸对IBDV VP2基因真核表达质粒免疫增效作用

以传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP2蛋白基因表达质粒 DNA为免疫原 ,以 Cp G的寡核苷酸 (Cp G- ODN)为免疫佐剂 ,肌肉注射于 14日龄 SPF鸡 ,1周后加强免疫 1次 ,2次免疫后 15 d和 2 1d分别测定血清 EL ISA抗体效价 ,并于免疫后 2 1d用 IBDV99J1强毒株攻毒和进行病理学观察。结果显示 ,(1) VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组的 EL ISA抗体水平明显高于 VP2重组质粒免疫组 ;(2 ) IBD弱毒苗与 VP2重组质粒免疫组抗体水平明显高于 VP2重组质粒免疫组 ,且比 VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组略高 ;(3) VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组及 IBD弱毒苗与 VP2重组质粒免疫组可明显降低 IBDV强毒攻击后引起的急性发病率和死亡率。由此表明 ,Cp G寡核苷酸对 IBDV VP2蛋白基因真核表达质粒免疫具有明显增强作用 ,有很大的应用前景。

猪瘟病毒E2亚单位蛋白与集落刺激因子的融合表达及其免疫效果分析

优化了工程菌BL21-E2 A/D-GM-CSF(含有783 bp的E2 A/D-GM-CSF融合基因)的原核表达条件,结果表明诱导的最佳时间和诱导剂IPTG的最佳用量分别为4 h和0.8 mmol/L。在此基础上,大量诱导表达融合蛋白后经Ni-IDA蛋白质层析柱纯化,Western-blot鉴定纯化蛋白具有抗原活性。将融合蛋白与福氏佐剂制成亚单位疫苗后免疫试验小鼠,并与E2 A/D蛋白、猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)进行免疫效果比较,结果显示E2 A/D-GM-CSF亚单位疫苗免疫小鼠后能够产生抗猪瘟抗体,并且抗体水平明显高于E2-A/D免疫组和HCLV免疫组。研究表明GM-CSF经融合表达后对E2-A/D蛋白有显著的免疫增强作用。

2008～2010年华东部分地区猪圆环病毒2型感染血清学调查

为了解华东地区近三年来猪圆环病毒病(porcine circovirus disease,PCVD)的流行状况,以便更好地控制该病的发生,2008年1月～2010年9月在华东地区5个省、直辖市及河南省的68个规模化猪场(均未免疫商品化猪圆环病毒疫苗)共收集1017份猪血清样品,应用商品化猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)抗体诊断试剂盒(PCV2-ELISA),对送检血清样品进行PCV2抗体水平检测。结果显示:送检猪血清中抗体阳性总数为609份,总阳性率为59.88%;2008、2009和2010年送检样品的阳性率分别为53.4%、35.33%和80.63%,PCV血清抗体阳性率呈先下降后上升的趋势;成年猪血清阳性率最高为81.40%,保育猪血清阳性率最低为41.48%,仔猪和育肥猪血清阳性率相近,分别为57.95%和52.20%,说明仔猪断奶后随母源抗体下降其抗体阳性率亦下降,但随猪龄的增长而感染逐渐加重后其抗体阳性率又升高,且不同生长阶段PCV毒抗体阳性率有明显差异。

4种商品化试剂盒检测猪瘟病毒抗体的比较分析

猪瘟（CSF）是由猪瘟病毒感染引起的猪的急性、热性、高度致死性传染病,是严重影响养猪业发展的主要疫病之一。世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类l6种传染病之一,我国亦将其列为一类传染病,是发生最多、危害最大、流行最广的动物传染病之一。

副猪嗜血杆菌间接ELISA抗体检测方法的建立

采用福尔马林灭活的副猪嗜血杆菌全菌体作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。经试验确定副猪嗜血杆菌全菌体的包被浓度为2·24×107CFU/孔、检测血清为1∶200稀释,同时确立了间接ELISA的最佳反应条件。该方法有很高的特异性和重复性,14个发病猪场100份血清检测结果Hps抗体阳性检出率为94%,明显高于细菌分离鉴定检测结果。

PRRSV抗体竞争ELISA检测方法的建立与标准化研究

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)基因的原核表达产物重组N蛋白为包被抗原,利用兔抗重组N蛋白血清和PRRS猪血清竞争该抗原,建立间接竞争ELISA方法检测PRRS抗体。经研究确定重组N蛋白的包被浓度为0·3μg/mL,检测血清不用稀释,兔抗重组N蛋白血清的工作浓度为1∶3000,酶标抗体的工作浓度为1∶10000,包被液为0·05mol/L、pH9·6的碳酸盐缓冲液。该方法特异性强,稳定性和重复性好,整个检测过程可在3h内完成。以IDEXX试剂盒的检测结果为参照标准,该方法的敏感性为79·76%,特异性为90·9%,符合率为83·59%。将该方法按试剂盒要求标准化,4℃放置5个月,检测效果不变。

致病性副溶血弧菌三重PCR检测方法的建立和评价

根据副溶血弧菌种特异性基因(tox R)、耐热直接溶血素基因(tdh)和相对耐热直接溶血素基因(trh)为靶基因分别设计引物,进行PCR扩增及反应条件的优化,建立了检测含有溶血素毒力基因的致病性副溶血弧菌的多重PCR方法。3对引物能分别特异性地扩增出368、269、486 bp的目的片段。副溶血弧菌均能扩增出tox R基因,不含溶血素基因的菌株(tdh-/trh-)仅扩增出1条目的片段,而含不同溶血素基因的致病性副溶血弧菌则分别扩增出2条(tdh+/trh-或tdh-/trh+)和3条(tdh+/trh+)特异性条带。检测其他非副溶血弧菌的供试菌,则不出现任何扩增条带。人工模拟样品检测结果显示对致病性副溶血弧菌的最低检测浓度为103CFU/m L。结果表明该多重PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏性,对检测致病性副溶血弧菌有重要意义。

伪狂犬病病毒UL24基因的原核表达及抗UL24蛋白抗体的制备

为了给伪狂犬病病毒(PrV)UL24蛋白的细胞定位和功能研究提供参考依据,据GenBank公布的PrVUL24基因序列(登录号NC006151)设计1对引物,以质粒pUL24-GFP为模板,用PCR方法扩增出部分缺失的基因片段mUL24(modified UL24)。将mUL24片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建融合表达载体pET-UL24。阳性质粒转化宿主菌E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导,重组蛋白(His)6-UL24以包涵体的形式获得表达。用纯化后的pET-UL24融合蛋白免疫家兔,ELISA分析表明,在血清效价达到1∶2 560以上,Western-blot分析制备的抗体可以和pET-UL24表达产物发生反应,具有良好的免疫特异性。

猪繁殖与呼吸综合征病毒Resp株单克隆抗体的研制

利用Marc1 4 5细胞增殖和凝胶层析纯化的猪繁殖与呼吸综合征 (PRRSV)Resp株 ,建立了酶联免疫吸附试验 (ELISA)单克隆抗体筛选技术。在猪肺泡巨噬细胞 (PAM)上增殖、浓缩、纯化PRRSV并免疫Balb/c小鼠 ,用PEG - 1 50 0进行细胞融合。结果表明 ,细胞融合率为 70 6 % ,初检PRRSV抗体阳性率为 6 3 %。经 2次亚克隆获得了 2株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,其单抗间接荧光抗体试验 (IFA)可用于检测细胞培养物中的PRRSV抗原 。

猪链球菌2型溶血素重组亚单位疫苗的研制

根据已报道的猪链球菌2型(Streptococcus suistype 2,SS2)重要毒力因子溶血素的基因序列,利用DNAstar软件选择抗原性好的一段基因序列,设计并合成该段序列的1对特异性引物。以四川强毒株ZY05719的基因组为模板,PCR扩增后定向克隆至pET-32 a表达载体中;重组质粒转化至原核系统大肠杆菌B21中,经诱导表达目的蛋白后,利用小鼠进行免疫效果的测定和佐剂筛选,结果使用ISA206佐剂的溶血素(Hly)蛋白亚单位疫苗保护率高。