水牛唾液蛋白胃蛋白酶解产物中总阿片样生物活性的测定

研究唾液中的生物活性物质是受人注目的领域。许多研究表明 ,唾液中除含有多种激素和细胞因子外 ,还含有丰富的蛋白质。这些蛋白质(特别是粘蛋白)含有脯氨酸富集片段 ,这些片断抵抗蛋白酶的水解。因而推测 ,唾液进入消化道后有可能解放一些活性肽段。本试验旨在探讨唾液蛋白经胃蛋白酶水解是否有阿片样活性物质产生。自5头体重(450±50kg)公水牛口腔采集混合唾液 ,测定蛋白含量。加入胃蛋白酶 ,在 pH1.4 ,39℃孵育2小时后 ,将酶灭活。以孵育前将酶灭活作对照。调 pH7.2,8500×g离心30分钟。取上清液和1640培养液各5ml与生长旺盛的NG108 -15细胞一起在37℃孵育15分钟。收集细胞 ,提取细胞内cAMP,放免测定cAMP的含量。发现NG108 -15细胞膜上有丰富的阿片受体 ,受体激活后可引起细胞内cAMP减少 ,这种作用可被特异性的阿片受体阻断剂纳洛酮(Nal)反转。因此 ,本试验对照组与试验组分别作加Nal和不加Nal2种处理 ,以细胞cAMP与胞浆蛋白比值变化判定酶解液是否具有阿片样生物活性。试验结果表明 ,试验组细胞cAMP含量 :不加Nal显著低于加Nal(20.103±2.473)ng/mg蛋白质vs(25.850±2.461)ng/mg 蛋白质(P<0.01) ;对照组不加Nal差异不显著(27.177±3.738)ng/mg 蛋白质vs(27.337±3.461)ng/mg 蛋白质(P>0.05)。