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表达GFP基因的马立克氏病病毒(MDV)转移载体的构建及初步应用 被引量:2
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作者 邱亚峰 葛菲菲 +1 位作者 张雪莲 陈溥言 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期11-16,共6页
利用Primerprimer5.0软件设计两条引物,将loxP位点分别引入正、反向引物,以质粒载体pIRESgpt为模板,扩增获得LoxPCMVgptIRESLoxP基因表达盒(约2.9kb),将其克隆入质粒pBUS10(含有MDVUS10区)的BalI位点,获得重组质粒pUSgptIRES(L);对重组... 利用Primerprimer5.0软件设计两条引物,将loxP位点分别引入正、反向引物,以质粒载体pIRESgpt为模板,扩增获得LoxPCMVgptIRESLoxP基因表达盒(约2.9kb),将其克隆入质粒pBUS10(含有MDVUS10区)的BalI位点,获得重组质粒pUSgptIRES(L);对重组质粒pUSgptIRES(L)进行测序分析,发现两同向的loxP位点正确插入到pUSgptIRES(L)中;将含有完整的GFP基因以及polyA尾的基因片段,连入pUSgptIRES(L)中,把gpt基因替换掉,从而获得重组质粒pUSGFPIRES(L)。将转移载体pUSGFPIRES(L)瞬时转染CHO细胞,可以观察到绿色荧光,说明GFP基因获得有效表达;将pUSGFPIRES(L)转染已感染MDVCVI988株的CEF细胞,可以筛选到表达绿色荧光蛋白的重组病毒;通过测定重组病毒在细胞上的生长曲线,发现重组病毒与亲本毒生长曲线相吻合。为进一步探讨MDV在体内的特性奠定基础,同时,为Cre/LoxP重组酶系统在MDV中的应用奠定基础。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 绿色荧光蛋白 LOXP位点 重组病毒
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不同异源启动子与MDVgB启动子及其复合启动子的活性比较 被引量:1
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作者 邱亚峰 葛菲菲 +1 位作者 徐学清 陈溥言 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期314-317,共4页
为了选择适宜的启动子调控外源基因的表达,以改善马立克氏病病毒为载体的重组病毒的免疫保护力。将hCMV立即早期启动子及增强子、SV40早晚期启动子及增强子或hCMV立即早期增强子的部分序列分别与马立克氏病病毒(MDV)自身的囊膜糖蛋白B基... 为了选择适宜的启动子调控外源基因的表达,以改善马立克氏病病毒为载体的重组病毒的免疫保护力。将hCMV立即早期启动子及增强子、SV40早晚期启动子及增强子或hCMV立即早期增强子的部分序列分别与马立克氏病病毒(MDV)自身的囊膜糖蛋白B基因(gB)启动子核心部分在体外杂合,分别构建复合启动子PhCMV-gB、PSV-gB或Pen-gB;将这些启动子与虫荧光素酶报告基因相连,构建表达载体。利用脂质体将以上质粒与内标质粒(pSV-β-LacZ)共转染鸡胚成纤维次代细胞,于转染后48h,将细胞刮下来,利用荧光素酶测定试剂盒和β-半乳糖苷酶测定试剂盒分别测定转染细胞的荧光素酶和β-半乳糖苷酶的活性,通过荧光素酶和β-半乳糖苷酶活性的比值获得虫荧光素酶的相对活性,利用虫荧光素酶的相对活性进行启动子的活性比较。结果表明,复合启动子相对马立克氏病病毒自身的gB启动子,活性有不同程度的提高,其中复合启动子PhCMV-gB的活性最高,而复合启动子PSV-gB和Pen-gB的活性相当;但与商业强启动子相比,复合启动子活性要弱一些或相当。因此,从某种意义上讲,这些复合启动子既具有gB启动子的一些特性,又有商业强启动子的一些特性,为以马立克氏病毒为载体的新兴疫苗的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 复合启动子 虫荧光素酶
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马立克氏病病毒gB部分基因的原核表达 被引量:1
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作者 邱亚峰 葛菲菲 陈溥言 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期62-65,98,共5页
利用PCR技术扩增获得马立克氏病病毒(MDV)囊膜糖蛋白B(gB)基因部分片段,将其克隆入pET-28a载体中,获得表达载体pET-gB,将该载体转化宿主菌BL21,经1.0mmol/LIPTG诱导,外源基因以包涵体的形式获得高效表达。将包涵体溶解于8mol/L的尿素中... 利用PCR技术扩增获得马立克氏病病毒(MDV)囊膜糖蛋白B(gB)基因部分片段,将其克隆入pET-28a载体中,获得表达载体pET-gB,将该载体转化宿主菌BL21,经1.0mmol/LIPTG诱导,外源基因以包涵体的形式获得高效表达。将包涵体溶解于8mol/L的尿素中,利用His·Bind试剂盒获得纯化的蛋白,将纯化的蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,间接ELISA法测得抗体的效价为1×10-5。此外,通过Western blot实验表明,该抗体具有较高的特异性,为进一步探讨MDVgB所引起的特异的免疫反应奠定基础。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 原核表达 囊膜糖蛋白 表位
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表达LacZ基因的重组CVI988病毒的构建及特性研究
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作者 邱亚峰 葛菲菲 +2 位作者 张雪莲 徐学清 陈溥言 《中国病毒学》 CSCD 2006年第1期71-74,共4页
The LacZ gene controlled under the Marek’s disease virus(MDV)glycoprotein B(gB)promoter was excised from plasmid pSK-gB-LacZ and inserted into US10 gene.Two plasmids were constructed,pUS-gB-LacZ(L)and pUS-gB-LacZ(U))... The LacZ gene controlled under the Marek’s disease virus(MDV)glycoprotein B(gB)promoter was excised from plasmid pSK-gB-LacZ and inserted into US10 gene.Two plasmids were constructed,pUS-gB-LacZ(L)and pUS-gB-LacZ(U)),which differ with regard to the orientation of the expression cassette.Then pUS-gB-LacZ(L)was transfected into secondary Chicken embryo fibroblasts(secondary CEF)cells and super-infected with the MDV CVI988 strain.The recombinant virus(rCVILacZ)expressing the lacZ gene was isolated and purified in secondary CEF.The growth curve of rCVILacZ was similar to that of the parent virus in CEF. 展开更多
关键词 重组病毒 马立克氏病毒 LACZ基因 启动子
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病毒与细胞中参与mRNA加帽过程的酶
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作者 张庆华 陈继明 《生命的化学》 CAS CSCD 1998年第5期33-34,共2页
病毒与细胞中参与mRNA加帽过程的酶张庆华陈继明(南京农业大学动物疫病诊断与免疫重点实验室,南京210095)关键词mRNA加帽酶病毒与真核细胞的mRNA的5′端m7GpppN帽子结构有增加mRNA稳定性等重要功能,... 病毒与细胞中参与mRNA加帽过程的酶张庆华陈继明(南京农业大学动物疫病诊断与免疫重点实验室,南京210095)关键词mRNA加帽酶病毒与真核细胞的mRNA的5′端m7GpppN帽子结构有增加mRNA稳定性等重要功能,并为核糖体识别所必需。这一帽子结构... 展开更多
关键词 MRNA 加帽过程 病毒 细胞
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T细胞表位研究进展 被引量:27
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作者 陈继明 龚晓明 陆承平 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期78-82,共5页
T细胞表位研究进展陈继明龚晓明陆承平T细胞表位(Tcelepitope)是抗原经过抗原提呈细胞(APC)加工后,由MHC分子提呈给T细胞抗原受体(TCR)的短肽。1971年,Mitchison发现了半抗原载体现象,提... T细胞表位研究进展陈继明龚晓明陆承平T细胞表位(Tcelepitope)是抗原经过抗原提呈细胞(APC)加工后,由MHC分子提呈给T细胞抗原受体(TCR)的短肽。1971年,Mitchison发现了半抗原载体现象,提出了B细胞识别半抗原决定簇(hap... 展开更多
关键词 T细胞表位 感染 免疫
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