胡萝卜WRKY69基因(DcWRKY69)的克隆及其对不同植物生长调节剂的响应

以胡萝卜品种‘黑田五寸’(Daucus carota var.sativa‘Heitian Wucun’)为研究对象,采用RT-PCR技术从叶片cDNA中克隆获得DcWRKY69基因片段,并对该基因及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析;同时,采用RT-qPCR技术比较了0.1 mmol·L^-1茉莉酸甲酯(MeJA)、1.0 mmol·L^-1水杨酸(SA)、0.1 mmol·L^-1赤霉素(GA3)和0.1 mmol·L^-1脱落酸(ABA)处理12 h内叶中DcWRKY69基因相对表达量的差异。结果表明:DcWRKY69基因包含1个长度为783 bp的开放阅读框(ORF),编码260个氨基酸;DcWRKY69转录因子氨基酸序列在第52至第110位含有1个WRKY结构域,其锌指结构类型为C2 H2型,理论相对分子质量为30030,理论等电点为pI 4.78;该转录因子含有34个磷酸化位点,无信号肽和跨膜结构,亲水性氨基酸较多,且酸性氨基酸比例最高(27%);该转录因子的二级结构由α-螺旋、β-折叠、延伸链和随机卷曲组成,比例分别为21.92%、4.23%、11.92%和61.92%。序列比对和系统进化树分析结果表明:WRKY转录因子在植物进化过程中具有高度的保守性。RT-qPCR分析结果表明:经MeJA、SA、GA3和ABA处理后,DcWRKY69基因相对表达量的变化趋势不同,分别在处理后8、12、1和4 h达到峰值,且显著高于对照(处理0 h)。研究结果显示:DcWRKY69转录因子属于Ⅱ类WRKY转录因子,为亲水性蛋白,且可能属于非分泌蛋白;DcWRKY69基因可能参与胡萝卜对不同植物生长调节剂的响应过程,但其对不同植物生长调节剂的响应模式存在差异。