动物过敏原牛血清白蛋白表面等离子共振传感器检测方法的建立

[目的]建立一种表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术,用于快速、准确、灵敏、定量检测动物过敏原牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)。[方法]将鼠抗BSA单克隆抗体偶联于SPR生物传感器芯片表面,监测BSA与抗体结合后芯片表面的变化,并基于SPR技术建立快速检测微量BSA的新方法,确定其检出限和最佳线性范围,并进行重复性验证和初步应用。[结果]抗体的偶联水平为18 000,对BSA具有良好的亲和能力;BSA质量浓度在6.25~400 ng·m L^(-1)范围内,与SPR响应值的变化量呈良好的线性关系(R2=0.992),方法检测限为33.68 ng·m L^(-1);用建立的SPR方法检测不同浓度BSA的日内RSD为1.12%~3.42%,日间RSD为0.84%~3.98%,均小于5%;SPR方法与ELISA商业化试剂盒检测不同市售食品中BSA含量的结果比较,差异不显著(P>0.05)。[结论]SPR方法可靠性好、稳定性强,适用于食品中过敏原BSA的高通量实时检测。

^(60)Co-γ辐照对猪血清白蛋白免疫原性及构象的影响

[目的]本文旨在研究^(60)Co-γ辐照对猪血清白蛋白(PSA)免疫原性和蛋白构象的影响。[方法]应用表面等离子共振(SPR)技术、圆二色(CD)光谱、紫外光谱和荧光光谱方法,研究在(10±0.5)℃条件下,1、3、5、7和10 kGy辐照剂量处理对过敏原猪血清白蛋白免疫原性及蛋白构象的影响,并分析过敏原免疫原性与其蛋白质构象的相关性。[结果]过敏原PSA在辐照剂量低于3 kGy时其免疫原性略有降低,之后随着辐照剂量的增加而显著降低(P<0.05)。辐照对过敏原PSA构象的影响则采用CD光谱、紫外光谱和荧光光谱来进行表征。过敏原PSA经辐照处理后其α-螺旋含量明显降低,二级结构发生改变;过敏原猪血清白蛋白的紫外吸收值随着辐照剂量的增加呈上升趋势;而过敏原猪血清白蛋白的荧光光谱强度随着辐照剂量的增加而降低,其最大发射峰还发生蓝移现象。[结论]^(60)Co-γ辐照处理可以通过改变过敏原猪血清白蛋白的蛋白质构象来达到降低其抗原性的目的。