土壤微生物分子生态学研究中总DNA的提取

建立了一种土壤DNA提取方法。根据DNA产量和纯度2个评价指标,从3种手提土壤DNA方法中优选出方法B为手提DNA方法(Labmethod),它包括样品预处理,细胞裂解,粗DNA纯化,其中细胞裂解组合了玻璃珠击打,SDS裂解,溶菌酶裂解。进一步应用PCR-限制性片段长度多态性(Restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)技术及PCR-温度梯度凝胶电泳(Temperaturegradientgelelectrophoresis,TGGE)技术,结合DNA产量、纯度、片段大小以及所反映的微生物群落结构特性等指标评价了手提方法(Labmethod)得到的总DNA质量,并将这些结果与2种应用较广的商业试剂盒(MoBioUltraCleanSoilDNAKit和Bio101FastDNASPINKit(ForSoil))所得DNA的各种指标进行了比较。结果表明,手提方法(Labmethod)的粗DNA产量低于Bio101Kit的,但高于MoBioKit的。这些方法所得DNA的长度都在21kb左右,Labmethod提取的DNA没有严重被剪切现象,而2种试剂盒提取的DNA都有不同程度的剪切。手提方法得到的DNA经纯化后,应用细菌及真菌特异引物进行PCR扩增,均能获得目的片段,表明该方法能从土壤中同时有效提取细菌和真菌总基因组DNA。并且,手提方法所得DNA的细菌16SrDNA和真菌18SrDNA的PCR-RFLP图谱与两种商业试剂盒的图谱基本相似,但3种方法提取的DNA在细菌16SrDNAV3区和真菌28SrDNA片段的PCR-TGGE图谱上都存在一定差异,主要表现在一些弱势条带的有无或强弱上。这说明手提方法提取的总DNA与2种商业试剂盒一样,在一定程度上能反映微生物群落的多样性和组成。总之,手提DNA方法(Labmethod)所用试剂普通,价格便宜,能在4h以内获得够质够量的土壤DNA用于微生物分子生态学研究,较适合于广大普通实验室进行土壤DNA提取工作。

秸秆还田后土壤微生物群落结构变化的初步研究

通过实验室条件下的小麦秸秆粉和油菜秸秆粉的还土试验,结合常规的分析手段和基于DNA的分子技术(变性梯度凝胶电泳(DGGE)及测序技术),初步研究了秸秆粉还田后土壤物理化学特性及生物学特性的变化。结果表明,培养60d后,秸秆还田土壤的肥力明显提高,其纤维素酶活性明显增强。DGGE图谱表明,对照土壤(S)以及处理土壤(SW和SR),在培养过程中,β-Proteobacteria类细菌组成都在发生变化。对其中一个样品的DGGE条带进行了割胶测序,测序结果表明,大部分条带代表的微生物是未培养的或不可培养的。采用传统分离培养技术,从秸秆还田土壤中分离了2株纤维素降解菌。以上结果说明,秸秆还田具有良好的土壤综合效应。

除臭微生物分离和筛选方法的改进与应用

为减轻大量的禽畜废弃物对环境的污染和促进其有机肥转化的进程,在以往大量研究的基础上,改进了分离和筛选除臭微生物的方法。应用该简便方法,快速地从环境中分离和筛选出除臭微生物F468,能够降低新鲜鸡粪氨气和硫化氢释放量分别在67%和56%以上,降低风干鸡粪氨气和硫化氢释放量分别在90%和52%以上。通过形态学方法鉴定,F468初步被鉴定为绿色木霉。

一氯苯的微生物厌气降解及其降解性质粒的研究

以一氯苯为唯一碳源，从某化工厂废水处理厂的活性污泥中分离得一株一氯苯降解菌，初步鉴定属于气单胞菌属（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）。用气相色谱法测得该菌在３周内的氯苯降解率为３３％。不同的质粒消除试验结果表明，该菌质粒很稳定。已成功地将质粒转移到大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉＪＦ８０３）中。该转化子能利用一氯苯为唯一碳源生长，且转化子中有与原菌株电泳迁移率相同的质粒。因此，可以认为该质粒携带有降解一氯苯的基因。

分子生态学方法在微生物肥料质量监测中的应用

应用PCR—DGGE技术对某微生物肥料的质量进行了跟踪监测，并结合分离培养和克隆文库分析对其菌种组成进行了检测。结果表明，同一生产批次3个不同包装样品的细菌和真菌DGGE（denaturing gradient gel eleetrophoresis）图谱相似性为80％-100％，3个不同生产批次之间DGGE图谱相似性为80％-88％，表明该微生物肥料的菌种组成的稳定性较好。但分离培养和克隆文库分析结果显示样品的菌种组成与产品标签说明之间存在较大差异。对于产品标注的6种微生物组成，只有Lactobacillus属的微生物可与之对应，其他检测到的Bacillus、Monascus、Brevibacillus、Psudomonas和Penicillium属的微生物并未包括在产品说明中。研究表明用分子生态学方法可以比较客观准确的对微生物肥料质量进行评估和峪测。

活性微生物与农药的降解

本文讨论了农药微生物降解的研究进展。着重探讨了农药分子结构。

微生物来源的抗真菌抗生素的研究进展

近年来,随着真菌感染性问题的日趋严重,研究开发安全、新型和有效的抗真菌药物显得尤为重要。抗真菌药物根据其作用靶位分为抑制真菌细胞膜、细胞壁、蛋白质和核酸合成及抑制电子传递等5种类型。现从这5个方面对微生物来源的抗真菌抗生素研究进展作一概述。

两种土壤微生物生物量对外源镧的反应

在实验室条件下研究了黄潮土、水稻土微生物生物量对外源镧的反应。外源镧对两种土壤微生物生物量均表现为抑制的影响并随着浓度增加抑制作用增强。镧对黄潮土微生物生物量的抑制作用要高于水稻土,这可能与黄潮土有机质含量和阳离子交换量较低有关。土壤微生物生物量氮对外源镧的反应较生物量碳更为敏感。外源镧使土壤微生物群落向C/N比高的微生物方向发展。

化学农药的微生物降解及其机制

微生物因其种类繁多且代谢多样性在农药降解中表现出独特的优势，可以有效地的用于化学农药的降解。通过研究微生物降解农药的途径及机制，可以丰富对微生物生理生化及遗传的了解。本文综述了近年来化学农药微生物降解方面的有关进展。

外源镧对土壤微生物碳源利用的影响

用14 C标记葡萄糖法研究了外源镧对土壤微生物碳源利用的影响。结果表明 :外源镧在低浓度下可增强土壤微生物利用碳源进行呼吸作用 ,而高浓度下则产生显著抑制作用 ,最大抑制率为 3 3 %。土壤微生物呼吸产生的14 CO2 主要是培养初期释放的 ,培养 14d后14 CO2 释放已非常少。外源镧可增强土壤微生物利用碳源合成自身的生物量 ,最大增幅为 2 5 %。

胶孢炭疽菌菟丝子专化型的生物学特性

胶孢炭疽菌菟丝子专化型生长和产孢的最适温度范围分别为25～30℃和28～30℃,最适pH值分别为5 0和6 0,最适C/N分别为35 0～52 5和35 0～58 4。大豆菟丝子汁对该菌的生长、产孢和孢子萌发均有显著的寄主营养诱导作用,首次对该菌的分生孢子萌发生物学特性进行了较为系统的研究。

生物除草剂菟丝子胶孢炭疽菌生物学特性的研究

研究表明 ,菟丝子胶孢炭疽菌在 10～ 35℃能够生长 ,以 2 8～ 30℃为最佳 ;在光暗交替条件下菌丝体生长最快 ;在黑暗条件下 ,分生孢子萌发率最高 ,为 88.1% ;持续光照时 ,菌丝体生长速率和分生孢子萌发率均最低 ;蔗糖最利于其生长 ,淀粉对菌丝体生长有明显抑制作用 ;pH值 5～ 9时均可生长 ,以pH值 5～ 7为宜 ;相对湿度在 90 %以上时 ,分生孢子的平均萌发率为 74 .2 % ,相对湿度以 97.5 %～ 10 0 %为最佳 ;表面活性剂 0 .1%吐温 2 0和 0 .1%吐温

氯苯、对硝基酚对土壤生物活性的影响

本文通过对土壤呼吸强度、各微生物生理群的数量以及土壤酶活性的测定，研究了氯苯、对硝基酚对土壤生物活性的影响。实验表明氯苯、对硝基酚对土壤生物活性的影响是复杂的。氯苯在200mg／kg以下对土壤呼吸强度，细菌、放线菌及真菌的数量都有一定的刺激作用；而对氨化细菌、硝化细菌以及反硝化细菌则表现出抑制作用：对脲酶、脱氢酶也具有刺激作用，对庶糖酶则具有轻微的抑制作用；对硝基酚对上述几种酶的活性及各微生物类群大多表现出抑制作用。

根瘤菌结瘤因子的微量生物检测法

在豆科植物根系分泌物诱导下，根瘤菌在自生状态下能产生胞外寡糖胺类物质─—结瘤因子，其生物学功能之一是引起某些豆科植物根毛卷曲。结瘤因子与根毛接触４ｈ后，即使去除结瘤因子，３～６天后根毛即能发生变形。据此设计出一种结瘤因子微量生物检测法。该法操作方便，并且只需耗用微量结瘤因子。

吸水链霉菌NND-52-C基因工程宿主载体系统的构建

吸水链霉菌NND 5 2 C菌株是大环内酯类抗生素 阿扎霉素B的高产菌株。采用原生质体转化技术 ,将来自变铅青链霉菌TK2 4菌株的pIJ70 2质粒转化吸水链霉菌NND 5 2 C菌株的原生质体 ,建立了吸水链霉菌NND 5 2 C菌株的基因工程宿主载体系统。确定了NND 5 2 C菌株原生质体制备和再生的条件 ,其原生质体形成率达到 1 0 8个 mL ,再生率约为 0 2 % ,转化率为 1 0 2 ～ 1 0 3个转化子 μg质粒DNA。

吸水链霉菌NND-52中小组分抗生素M2的结构鉴定及生物活性

目的确定吸水链霉菌NND 5 2所产生的小组分抗生素M2的结构 ,并检测其体外生物活性。方法通过紫外吸收光谱、红外光谱和核磁共振谱波谱分析确定结构 ;用棋盘微量稀释法测最小抑菌浓度 (MIC) ;稀释法测后效应。结果M2与尼日利亚菌素同质 ,对革兰阳性细菌 (包括耐药性的临床致病菌 )作用敏感 ,2MIC下 2 4h内能杀死绝大部分细菌 ;有较长的后效应。结论M2对耐药菌作用敏感 ,可作为解决日益严重的细菌耐药性的一个新选择。

短链脂肪酸对阿扎霉素B生物合成的调节

研究了短链脂肪酸和长链脂肪酸对吸水链霉菌NND-52-C菌株阿扎霉素B生物合成的影响。结果表明,短链脂肪酸普遍具有促进阿扎霉素B的合成作用,而长链脂肪酸的作用则相反。在发酵至48h,添加0.1%丙酸钠和0.2%乙酸钠,阿扎霉素B的产量分别达到2120mg/L和1861mg/L,比对照提高了58.8%和39.4%。进一步研究表明,丙酸盐可通过诱导丙酸激酶的表达,从而大幅度地提高阿扎霉素B的产量。

磷酸盐对阿扎霉素B生物合成的调节

磷酸钙不仅可以促进阿扎霉素B产生菌的生长,而且对阿扎霉素B的生物合成具有一定的促进作用。在发酵培养基中添加1mmol/L磷酸钙可使阿扎霉素B发酵效价最高达1892mg/L,比对照提高26%;此外添加2mmol/L磷酸钙能够部分解除氨离子对阿扎霉素B生物合成的抑制,解除率为20%。

植物病原原核生物的种类及其分类

分子生物学的迅速发展,使人们对生物的本质和起源有了更深入的了解。也给古老的分类学带来了新的生机。分子生物学方法渗透到原核生物分类学领域,导致了原核生物界的建立和原核生物分类的迅速发展。这些发展对隶属其中的植物病原原核生物的分类无疑有着重大影响。另一方面,植病工作者陆续发现许多新的病原生物。

偶发分枝杆菌MF2和MF96生物转化差异的机理研究

偶发分枝杆菌(Mycobacteriumfortuitum)亲株(MF2)和突变株(MF96)存在生物转化差异,通过静息细胞系统转化研究发现在反应达到平衡后,亲株中产物大部分以雄甾烯二酮(△4-androstenedione,4AD)的形式存在,而突变株中产物大部分为睾酮(testosterone,TS)。为了研究二者的转化差异,采用无细胞系统转化的手段进行了比较研究,结果表明在添加足量的NAD+和NADH后,亲株和突变株的转化产物比例基本相同。由此推测在静息细胞中的转化产物比例不同可能是由于辅酶NAD+与NADH的比例不同引起的。最后通过测定亲株和突变株中辅酶NAD+和NADH的比例证实该推测是正确的。