小麦赤霉病菌抗药性群体动态及其治理药剂

198 6～ 2 0 0 1年 ,以 10 μg·mL-1多菌灵作为鉴别剂量 ,在PSA含药平板上监测了浙江省、江苏省、上海市和湖北省13个县市共 194 91个小麦赤霉病菌菌株对多菌灵抗药性的群体分布与发展动态。结果表明 ,江浙沪地区的小麦赤霉病菌群体中存在着不同比例的抗药性菌株 ,湖北未发现抗药性。可控制抗药性群体发展的杀菌剂筛选结果表明 ,戊唑醇、咪鲜胺与多菌灵不具交互抗性 ,对赤霉病抗药和敏感菌株均有较好的防治效果 ,使用这两种杀菌剂可阻止对多菌灵抗药病原群体的发展。作者认为戊唑醇和咪鲜胺作为多菌灵的替代药剂单独使用或与多菌灵混配使用 。

南京地区西花蓟马发生调查及其分子检测

以西花蓟马和烟蓟马的线粒体DNA的COI基因设计特异性引物,建立了西花蓟马PCR快速检测方法,该方法可以检测1/120单头成虫,对各种虫态均可进行特异性检测。对南京54种植物花器中蓟马种类进行了调查,通过形态特征和线粒体DNA的COI基因分子检测,均证明西花蓟马已在其中25种植物上发生,西花蓟马种群数量达蓟马总量20%的有11种植物,超过30%的有5种。

中国水稻主产区褐飞虱对3种杀虫剂的抗性监测

2006-2009年,用稻茎浸渍法连续监测了广西南宁市、广东阳江市、湖南东安县、福建福清市、江西上高县、湖北孝感市、浙江金华市、江苏通州市和安徽和县共9个地区褐飞虱种群对吡虫啉、噻嗪酮和氟虫腈的抗性变化。结果表明:褐飞虱种群对吡虫啉的抗性仍处于高水平至极高水平抗性阶段(105.5～459.7倍),但2009年监测到东安、孝感、上高种群对吡虫啉的抗性已有下降趋势;褐飞虱种群对氟虫腈的抗性有增长趋势,2006到2009年褐飞虱种群对氟虫腈由敏感至低水平抗性(<6.9倍)发展到了中水平至高水平抗性(13.5～43.3倍);由于2005年吡虫啉在高抗地区的禁用,褐飞虱种群对噻嗪酮的抗性上升速度加快,2009年已处于低水平至中水平抗性阶段(7.0～14.4倍)。这表明在吡虫啉、氟虫腈被禁用后,大面积单一使用噻嗪酮进行防治,褐飞虱对噻嗪酮的抗性有可能加速发展。

二化螟抗药性监测方法及相对敏感基线

选用安徽太湖县二化螟 (ChilosuppressalisWalker)自然种群 ,用 6种药剂对 6龄幼虫进行毒力测定 ,并与国内外已知敏感品系的LD50 值比较 ,在证实了该种群具有较高的敏感水平后 ,经室内纯化和连续饲养近 2 0代 ,育成相对敏感品系(TH S)。为提高试验准确性 ,简化操作 ,使用 4龄幼虫进行抗药性研究。用于测试的 4龄幼虫形态特征为头宽 (0 86±0 0 4)mm ,体重 (8 5± 1 5 )mg ,前胸与头宽之比 1 19± 0 0 4,体长 (10 0± 0 8)mm。在详细观察 4龄幼虫发育历期和形态特征后 ,选用该龄幼虫 ,建立了包括沙蚕毒素、有机磷、杂环类和生物制剂等类的 6种杀虫剂的相对敏感基线。

褐飞虱对噻嗪酮的抗药性监测

1996—2007年间采用稻茎浸渍法测定了我国8省（区）27个褐飞虱种群对噻嗪酮的敏感性。在1996—2002年间，江苏[江浦（JPZY）、仪征（YZZY）和南通（NTZY）]、安徽[安庆（AQNS）]、广西[南宁（GXNY）和桂林（GLNS）]褐飞虱种群对噻嗪酮均为敏感至敏感性下降（抗性倍数为0．3～3．5倍）。在2005—2007年间，监测到江苏[江浦（JPZY），2005年]和海南[陵水（HNLS），2007年]褐飞虱种群对噻嗪酮达中等水平抗性（抗性倍数分别为28．8倍和19．4倍）；其余种群如广西[南宁（GXNY）和桂林（GLNS）]、湖南[常德（CDTY）]、浙江[余姚（YYLJ）]、江西[新建（XJSM）]、安徽[和县（HXLY）、潜山（QSMC）]及江苏[南通（NTZY）]等地褐飞虱种群对噻嗪酮为低水平抗性（抗性倍数为5．6～9．1倍）；而江西[上高（SGMS）]、浙江[兰溪（LXYC）]和湖北[孝感（XGXC）]3个褐飞虱种群对噻嗪酮仍为敏感至敏感性下降（抗性倍数2．5～4．1倍）。室内饲养22代，用噻嗪酮对1996年采自安徽[安庆（AQNS）]的褐飞虱间断筛选13代，它的LC50下降了30％，筛选前后抗性水平没有明显差异；随后连续筛选15代，抗性倍数达1157．7倍。上述结果表明，褐飞虱对噻嗪酮已产生低到中等水平抗性，如果连续单一使用噻嗪酮，褐飞虱将具有产生高水平抗性的风险。此外，还对褐飞虱的抗性治理进行了讨论。

加拿大一枝黄花对植物化感作用的研究

采用培养皿滤纸法和土培法,研究了加拿大一枝黄花(Solidago canadensis L.)不同浓度水提取液对小麦、玉米、大豆和棉花4种作物以及光头稗、千金子、荠菜、菵草、硬草、大狗尾草、看麦娘、升马唐、日本看麦娘、鳢肠、反枝苋和大巢菜12种杂草的种子萌发及幼苗生长的化感作用。结果表明,加拿大一枝黄花水提取液对供试作物和杂草均产生了不同程度的影响。其中,对大豆、光头稗、硬草和鳢肠的种子萌发没有显著性影响,对大巢菜的种子萌发起促进作用,在高质量浓度(0.1 g.mL-1)时完全抑制菵草的种子萌发;对于幼苗生长,根长受到的抑制作用较芽长强;而植株生长试验中,对植株鲜重的抑制作用最大。上述结果表明,除大巢菜外,加拿大一枝黄花水提液对作物和杂草的种子萌发及幼苗生长均存在显著的化感作用,对其他供试杂草的抑制作用都明显大于作物,高浓度表现强烈的抑制作用,低浓度多表现一定的促进作用,对根长的抑制作用大于芽长,对植株鲜重的抑制作用最大。

植物抗病性信号传导调控基因的克隆与表达检测方法的研究

建立了从不同植物中克隆抗病性信号传导调控基因及检测其表达的方法 ,并优化了相关条件。用RT PCR和PCR方法从拟南芥、烟草、番茄、中华鳖中克隆了 7个信号传导通路中 18个调控基因的cDNA和DNA序列 ,它们分别是 :抗病基因Pto介导的蛋白激酶级联中的Pti4、Pti5和Pti6 ,细胞编程死亡通路中的Hin1和hsr2 0 3,水杨酸介导的系统性获得抗病性通路中的NPR1,乙烯信号通路中的ETR1、ERS1、CTR1、EIN2和ERF1,茉莉酸信号通路中的COI1,核黄素信号通路中的RFBP和LR ,脱落酸信号通路中的ABF3、ABF4和ABH1,以及调控不同信号通路的通调基因NDR1。进一步研究了这些基因表达的定量测定方法 :用细菌激发子harpinEa处理植物 ,提取RNA作为cDNA第1链合成的模板 ,以在真核生物中广泛同源和高度保守的细胞伸长翻译因子基因EF1α为内参 ,用半定量RT PCR法测定基因mRNA的积累 ,可以比较准确地检测不同基因的相对表达水平。

四种不同植物病原真菌与多菌灵抗药性相关基因突变的比较

克隆了小麦赤霉病菌 (Fusariumgraminearum)、油菜菌核病菌 (Sclerotiniasclerotiorum )、辣椒炭疽病菌 (Col letotrichumgloeosporiodies)和番茄灰霉病菌 (Botrytiscinerea) 4种病原菌的 9个菌株的 β 微管蛋白基因 ,进而与典型模式菌粗糙麦孢霉 (Neurosporacrassa)进行序列比较。结果表明 ,4种病原真菌 β 微管蛋白序列与粗糙麦孢霉具高度同源性 ;油菜菌核病菌、辣椒炭疽病菌和番茄灰霉病菌的 β 微管蛋白 198位氨基酸由Glu突变为Ala ,是导致上述病原菌产生对多菌灵 (MBC)抗药性的主要原因 ;突变位点和突变类型与其他抗多菌灵真菌一致 ,且与乙霉威 (NPC)之间存在明显负交互抗性。但小麦赤霉病MBCS 和MBCR 菌株的 β 微管蛋白序列完全一样 ,且与NPC之间不存在负交互抗性。有关小麦赤霉病菌产生抗药性的机制有待于进一步的研究。

2002年江苏省二化螟抗药性检测及治理

20 0 2年应用点滴法普查了江苏常熟、锡山、武进、句容、姜堰、高邮、楚州、宿豫、灌云及连云港 10县 (市 ) 12个二化螟种群 4龄幼虫对 4种 (类 )杀虫剂的抗药性。结果表明 ,供试种群对沙蚕毒素类农药杀虫单已普遍产生抗性 ,且苏南种群的抗性水平高于苏北 ,常熟为最高 ( 16倍 ) ;对有机磷类农药三唑磷苏南地区种群为低水平抗性 ,其他地区均属敏感水平。目前二化螟供试种群对苯基吡唑类农药氟虫腈和抗生素类农药阿维菌素未产生抗药性。本文还对二化螟抗性治理对策进行了讨论。

水质生物评价指数筛选——以南京紫金山地区小水体为例

调查了南京紫金山地区 7个小水体 10个样点的底栖动物 ,采用Pearson相关系数分析了 14个生物指数间的相关性 ,从中筛选出 6个相关性低的指数较适合于紫金山地区小水体生物评价 ,即生物指数 (BI)、总分类单元数、摇蚊 %、摇蚊分类单元数、 (甲壳动物 +软体动物 ) %和ET分类单元数。 6个指数与理化指标总氮 (TN)、总磷 (TP)、高锰酸盐指数 (IMn)、化学需氧量 (CODCr)间的Spearman相关性分析表明 ,TP和BI以及TP和 (甲壳动物 +软体动物 ) %之间均有很高的相关性 (r =0 92 8和r=- 0 985 )。

植物抗病激活蛋白harpin_(Xooc)防治水稻病害的研究

植物抗病激活蛋白harpinXooc由水稻条斑病细菌hrp基因簇中hpa1基因编码。用构建于表达载体pET21a(+)上的hpa1诱导表达产物harpinXooc处理烟草,可激发烟草产生过敏反应,以及激活与烟草抗病信号途径相关的基因PR-1a、hin1和hsr203J的表达;处理水稻后,NPR1、OsPR1a、OsPR1b和PAL被激活。表明harpinXooc蛋白与植物互作后,通过水杨酸信号传导途径激活病程相关蛋白等防卫反应基因的转录表达,从而使植物产生系统获得抗病性。harpinXooc经加工后制成含量达1%的可溶性微颗粒制剂在水稻上进行应用,试验结果显示,harpinXooc蛋白可诱导水稻产生抗病性,防治水稻稻瘟病效果与杀菌剂稻瘟必克(三环唑)相当,防治水稻纹枯病和稻曲病效果与井冈霉素效果相当。对水稻增产的效果主要表现在增加粒实重上,增产达6%以上。

南京大豆根腐病病原物的分离及毒性鉴定

对2005、2006年夏在南京农业大学江浦农场试验田发生的大豆根腐病,采用特异性PCR检测到发病组织中有大豆疫霉,经室内诱捕和分离,从发病田块的土壤和发病植株上共分离到4个大豆疫霉菌株PNJ1、PNJ2、PNJ3和PNJ4。用含有不同抗病基因的14个鉴别寄主测定这4个大豆疫霉菌株的毒力公式,PNJ1和PNJ2为1d,2,3b,3 c,4,6,7;PNJ3为1 a,1b,1 c,1d,1k,2,3b,3 c,5,7;PNJ4为1 a,1b,1 c,1d,1k,2,3b,3 c,4,6,与国际上已经报道的大豆疫霉菌株的毒力公式不同,为新的生理小种。该研究可为抗病品种的选育及利用提供科学依据。

南京郊区小菜蛾抗性测定和几种杀虫剂触杀毒力的比较

研究了南京郊区小菜蛾对拟除虫菊酯类杀虫剂 (溴氰菊酯和氯氰菊酯 )和有机磷杀虫剂 (敌敌畏 )的抗性水平及对有机磷 (甲基毒死蜱 )、沙蚕毒素类 (杀虫单、巴丹 )、氯化烟碱类 (吡虫清 )、苯并吡唑类 (氟虫清 )和阿维菌素(avermectin)等 6种杀虫剂的敏感性水平。抗性测定结果表明 ,与敏感品系相比 ,南京郊区小菜蛾对氯氰菊酯和溴氰菊酯产生了极高的抗性 ,抗性指数分别为 81 41倍和大于 134 15倍 ,对敌敌畏则产生了中等的抗性 ,抗性指数为 10 0 6倍。活体增效试验显示 ,酯酶抑制剂TPP对氯氰菊酯和溴氰菊酯的增效作用分别为 1 46和 1,多功能氧化酶抑制剂PB对氯氰菊酯和溴氰菊酯的增效作用分别为 3 0 2和 1,表明神经敏感性下降可能是小菜蛾对拟除虫菊酯类杀虫剂产生高抗性的主要机制。点滴法测定结果表明阿维菌素、氟虫清、巴丹和杀虫单对抗性小菜蛾的触杀毒力较高 ,LD50 分别为 0 0 0 3,0 0 0 5 ,0 12 2和 0 190 μg/头。这 4种杀虫剂可作为今后防治抗性小菜蛾的替换药剂。

Ⅲ型分泌装置蛋白HrcJ决定条斑病菌在植物上的过敏反应和致病性的研究

【目的】水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xooc)的hrp(hypersensitive response and pathogenicity)基因编码形成的Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,T3SS),将致病性效应分子注入水稻细胞中,但Xooc的hrcJ基因在致病性中的作用以及其如何参与形成T3SS分泌装置,并不明确。【方法】本研究根据标记交换原理对Xooc的hrcJ基因进行了敲除。【结果】发现hrcJ突变体丧失在水稻上的致病性和在烟草上的HR激发能力。酵母双杂交显示,HrcJ蛋白N端脂蛋白结构域可与HrcC互作,HrcJ蛋白C端跨膜结构域可与HrcV互作,提示HrcJ蛋白联接于T3SS装置的内膜和外膜之间。功能互补结果显示,缺失脂蛋白结构域和跨膜结构域的hrcJ基因均不能恢复hrcJ突变体在烟草上的HR激发能力和在水稻上的致病性。RT-PCR结果显示,hrcJ的表达受hrpX基因调控,hrcJ基因突变后不影响效应分子hpa1的表达。【结论】hrcJ基因是水稻条斑病菌致病性和非寄主上激发HR的关键因子,其基因产物参与了T3SS装置的形成。

植物病原真菌对甲基立枯磷的抗药性及风险研究

通过对人工获得的抗甲基立枯磷菌株的抗药水平、在培养基上的生长速度、致病力、对其它杀菌剂的敏感性测定以及对菌核的观察和用药条件等方面分析 ,在实验室内进行了植物病原真菌对甲基立枯磷的抗药性风险研究。结果显示 ,不同的病原菌具有不同的抗药性。抗甲基立枯磷的水稻纹枯病菌菌株对甲基立枯磷的抗药性较强、抗药性风险大 ;小麦纹枯病菌和油菜菌核病菌抗药菌株抗药性较弱、风险小。抗甲基立枯磷的水稻纹枯病菌对菌核净具有高水平正交互抗性 ;抗甲基立枯磷的小麦纹枯病菌对菌核净和扑海因有中等程度正交互抗性 ;这两种真菌的抗药菌株对五氯硝基苯的正交互抗性弱 ,对烯唑醇和异稻瘟净没有交互抗性。甲基立枯磷与二甲酰亚氨类和芳烃类杀菌剂具有相似的抑菌作用。

受细菌诱导的植物启动子的克隆及其在转基因烟草中的活性

从烟草中克隆了受病原物诱导的植物启动子 (pathogen inducibleplantpromoters,PPPs)PPP1、PPP2、PPP3,其长度分别为 130 8,1170 ,2 2 0bp ,序列分析表明它们均含有受细菌诱导的反应元件 (Bac)。资料检索表明 ,PPP3可能是从植物分离的、受细菌诱导的最短的启动子。构建了包括每个PPP启动子和报道基因uidA (编码 β 葡萄糖醛酸酶 ,GUS)的转化单元 ,用它们以及包括来自椰菜花叶病毒 35S启动子和uidA单元 ,在相同条件下分别转化烟草 ,获得了分别含PPP和 35S启动子的 4类转基因烟草品系 ;分子检测表明 ,转化单元在转基因烟草染色体上能稳定整合。根据对转基因烟草GUS组织化学测定 。

植物病原细菌中超氧阴离子释放及其释放位点的研究

实验发现很多植物病原细菌具有自身释放超氧阴离子的现象 ,其释放规律与菌株的致病性可能存在一定的关系。并且植物病原细菌超氧阴离子的释放是多位点的 ,在细胞膜、细胞壁及无菌滤液中用化学方法及电子自旋共振法 (Electronspinresonance ,ESR)都能够检测到超氧阴离子的释放。无论是自然生理状态下 ,还是SOD酶活性被抑制后 ,都显示各组分中无菌滤液的超氧阴离子浓度最高 ,可能是植物病原细菌超氧阴离子释放的主要位点。

甜菜夜蛾对四类杀虫剂的抗药性监测

测定了6个地区甜菜夜蛾幼虫对8种杀虫剂的抗性。用点滴法监测了深圳、湖南、上海、常熟及南京种群3龄幼虫的抗性,结果表明:对高效氯氰菊酯抗性最高,属极高水平抗性(172.1～408.7倍);其次为百树菊酯(42.7～109.8倍)和毒死蜱(21.0～50.3倍),属中等～高水平抗性;而灭多威(2.3～21.0倍)和辛硫磷(3.0～15.1倍)抗性最低,属敏感～中等水平抗性;河北种群除对高效氯氰菊酯为低水平抗性(5.1倍)外,对其余药剂均属敏感(0.6～2.0倍)。浸叶法监测结果表明,除深圳种群初孵幼虫对抑太保为低水平抗性(6.4倍)外,其余种群对抑太保(0.7～3.4倍)、拉威因(1.5～3.9倍)及米螨(1.0～3.1倍)基本属敏感阶段。

水稻白叶枯病菌对噻枯唑的抗药性监测

采用活体寄主法和离体含药平板法 ,测定了 1999年安徽省滁州市田间水稻白叶枯病菌对噻枯唑的抗药性。结果表明 ,在水稻活体上存在噻枯唑抗药突变体 ,其比例为 6 7 6 5 % ,比 1997、1998年有较大程度升高 ,但是离体含药平板上未能监测到抗药突变体。

褐飞虱抗药性机理及其治理研究进展

褐飞虱是一种重要的农业害虫,其对许多杀虫剂都产生了抗药性。化学药剂的大量不合理使用是导致褐飞虱产生抗药性的主要原因。褐飞虱的抗药性机理主要包括代谢抗性和靶标抗性。本文对褐飞虱的抗药性机理进行了综述,并对该虫的抗性治理进行了探讨。褐飞虱的抗性治理策略应包括抗性监测、使用新型药剂、合理使用杀虫剂及抗虫品种等。