幼畜胚胎体外生产技术的研究进展

家畜JIVET技术采用外源促性腺激素处理幼龄母畜,诱导其卵泡大量发育,并与活体采卵、卵母细胞体外成熟、体外受精技术相结合体外生产胚胎,经胚胎移植后产生后代。本文综述了JIVET技术的研究现状,以及JIVET技术中幼畜的选择、超排方案、卵母细胞采集和体外培养的条件等,并进一步分析了JIVET技术生产胚胎的影响因素及存在的问题。

猪诱导性多能干细胞技术的研究进展及应用前景

猪作为实验材料,具有由于来源方便、基因序列与人类的相近及其在畜牧业中的重要地位等优势,成为国内外研究的热点,但是猪的胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESC)建系方面的研究进展缓慢。诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSC)技术的诞生,开创了体细胞重编程的全新方法。猪iPSC体系的建立将为家畜ESC体系的建立奠定基础,同时也对提高猪转基因克隆的效率,高效育种和保种,乃至生物医学领域均产生深远的影响。文章综述了iPSC技术的主要进展,重点阐述了猪iPSC技术的现状及其在生物医学和畜牧业中的应用前景,以期为从事该领域研究的科研人员提供参考。

哺乳动物早期胚胎的基因表达及其调控

哺乳动物的早期发育包括合子的形成、胚胎基因组的活化和细胞开始分化等。在这段时期, 精蛋白被组蛋白取代; 二倍体形成后甲基化的单倍体亲本基因组经历了脱甲基作用; 母本控制的发育被合子控制所取代。此外, 在染色体调节的转录抑制状态形成之后, 胚胎基因组活化, 但基因的有效表达需要有增强子。这种转录抑制状态的产生很可能发生在染色质结构水平, 因为诱导组蛋白过乙酰化可免除对增强子的需求。早期胚胎的mRNA表达模式与在体内或体外成功发育的关系, 对确定最佳培养条件和核移植程序是必不可少的。

免疫胶体金技术及其在临床诊断上的研究进展

综述了免疫胶体金技术的原理、特点以及斑点金免疫渗滤法、胶体金免疫层析法在临床诊断上的应用研究进展,并分析了该技术存在的问题及发展趋势。

胚胎干细胞的研究进展及其应用

胚胎干细胞 (ES细胞 )是一类从早期胚胎内细胞团或原始生殖细胞分离和克隆出的、具有发育全能性和多能性的细胞。ES细胞在动物克隆、转基因动物生产、细胞工程、组织工程、临床克隆治疗和发育生物学、遗传学以及制作动物疾病模型等的研究应用中起着重要的作用。文章介绍了胚胎干细胞及其生物学特性 ,国内外研究进展和新动态。阐述了建立干细胞系的技术要点。

IVF-ET时影响胚胎着床率的因素分析

胚胎移植成功的标志性事件是胚胎着床。着床是一个高度协调的事件,影响胚胎着床的因素主要有胚胎质量和子宫内膜容受性两方面。

小鼠卵母细胞冷冻技术研究

采用PBS作为冷冻基础液,分别用甘油和二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保护液,在程序化冷冻保存和玻璃化冷冻保存条件下,研究小鼠生发泡期(GV期)卵母细胞的抗冻能力。结果表明,2种冷冻方法对小鼠GV期卵母细胞解冻后形态正常率和存活率无显著影响(P>0.05)。冷冻保护剂种类对小鼠GV期卵母细胞解冻后形态正常率无显著影响(P>0.05);但对存活率有显著影响,玻璃化冷冻采用二甲基亚砜作为冷冻保护液效果极显著优于甘油(P<0.01)。以冷冻效果较好的二甲基亚砜作为冷冻保护液,采用玻璃化冷冻不同发育阶段(GV期和MⅡ期)的小鼠卵母细胞,解冻后形态正常率无显著差异(P>0.05),但存活率GV期要显著优于MⅡ期卵母细胞(P<0.05)。

胚胎干细胞培养体系对早期胚胎发育的影响

目的利用胚胎干细胞(ES)培养体系(饲养细胞+添加条件培养基的胚胎干细胞培养液)培养早期胚胎,建立并优化移植前早期胚胎培养系统,为提高胚胎的着床率与临床妊娠率及植入前遗传学诊断奠定基础。方法将获取的521枚胚胎根据培养液及饲养细胞的不同分为10组,分别比较各组胚胎的体外发育率。结果ES培养体系显著优于传统的胚胎培养体系(P<0.05)。ES培养体系中用SIM小鼠成纤维细胞耐硫代鸟嘌呤和耐乌苷亚系(STO)作饲养细胞培养效果优于小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)饲养细胞,两种饲养细胞效果均显著优于用输卵管上皮细胞(OEC)作为饲养细胞(P<0.05)。结论ES培养体系可以显著提高早期胚胎的发育率,培养体系中STO饲养细胞较MEF饲养细胞有更好的效果。

胚胎干细胞向神经细胞定向诱导分化方法的研究进展

胚胎干细胞具有自我更新和多向分化潜能,有望成为治疗神经系统疾病重要的种子细胞来源。如何高效地诱导胚胎干细胞向特定神经细胞分化是目前研究的热点。本文就胚胎干细胞定向分化成神经细胞的3种方法:RA诱导法、谱系选择法和SDIA法及其移植研究做一综述。

波尔山羊胚胎移植影响因素的研究

试验就胚胎的发育阶段、胚胎保存时间及移植胚胎数等因素对胚胎移植效果的影响情况进行了研究。结果表明，胚胎发育日龄对受体妊娠率没有显著影响（P〉0．05），但移植8～16细胞的胚胎的妊娠率略高于2～4细胞（58．49％VS61．47％）。人员不是影响受体妊娠率的主要因素。胚胎在体外保存0～120min对妊娠率没有显著影响，但以在体外保存0～30min内移植的妊娠率最高（65．619／6）。黄体与移植胚胎的相对位置对受体的妊娠率没有显著影响（P〉0．05），但移植双胚的受体的妊娠率较移植单胚高（61．769／6VS45．17％）。同时，试验统计了经胚胎移植产生的羔羊和自然繁殖羔羊之间的差异，发现经胚胎移植产生的波尔山羊母羔的初生重极显著地高于自然繁殖的母羔（P〈0．01），但公羔间的初生重以及公、母羔间的体高、体长、胸围、死亡率和性别比例与自然繁殖羔羊差异不显著（P〉0．05）。

供体年龄对德国肉用美利奴羊超数排卵及胚胎移植效果的影响

提高绵羊体内胚胎生产的效率对促进优良品种扩繁及良种推广具有重要意义。为充分利用不同年龄段良种德国肉用美利奴羊,试验选用青年（18月龄,配种未受胎）、老龄（60~72月龄,经产）以及幼龄母羊（7月龄,性成熟前）做供体,用改进的程序进行超数排卵,研究供体年龄与超数排卵和胚胎移植效果的关系。结果表明：①青年、老龄组母羊超排后只均可用胚数分别为10.9枚、10.3枚,显著高于幼龄母羊的6.0枚。青年、老龄组母羊的胚胎经移植后受胎率分别为71.6%、58.3%,显著高于幼龄组的41.7%。②幼龄、青年组回收的胚胎中囊胚所占比例显著高于老龄组,说明幼龄、青年组供体的胚胎发育速度显著快于老龄供体。③青年、老龄组母羊超排前预注小剂量FSH,卵巢黄体数目明显增多,说明能提高超排效果。本试验优化了德国美利奴羊的超排程序,证明年龄显著影响德国美利奴羊的超排效果及胚胎质量,为进一步提高绵羊胚胎移植效率提供了参考依据。

波尔山羊胚胎移植影响因素的分析

波尔山羊胚胎移植效果受诸多因素的影响,供体状况、药物、季节等因素使供体超排效果产生较大的差异,而受体状况、胚胎质量等对受体的妊娠率产生较大的影响,这些因素阻碍了波尔山羊胚胎移植的产业化应用。本文对以上影响波尔山羊胚胎移植效果的因素进行了分析,以期为提高胚胎移植效率提供依据,从而促进波尔山羊胚胎移植产业化进程。

小鼠胚胎干细胞单层定向诱导分化为肝样细胞的研究

在建立小鼠胚胎干细胞(ES细胞)无饲养层单层培养体系的基础上,使用丁酸钠(NaB)和表皮生长因子(EGF)作为前期诱导分化剂,诱导分化7 d,再用肝细胞生长因子(HGF)和地塞米松(Dex)诱导分化12 d,建立了体外两步法单层诱导ES细胞分化为肝样细胞的方法,并对诱导分化所得的肝样细胞从形态学、基因表达、蛋白分子标记及细胞功能等方面进行了检测,证明了分化所得细胞为肝细胞,肝细胞分化率为41.67%,为肝细胞来源提供了新的方法。

不同类型绵羊胚胎体外发育率的比较研究

分别利用孤雌激活技术、体外受精技术及体细胞核移植技术生产不同类型的体外胚胎，比较不同类型胚胎的体外发育率和囊胚细胞总数间的差异，研究季节、卵巢保存条件和培养液对孤雌激活胚（PAE）和体细胞核移植胚（SCNTE）发育能力的影响。结果表明：PAE、SCNTE和体外受精胚（IVFE）的卵裂率没有显著差异；PAE的囊胚率（23．4％）显著高于SCNTE（18．2％）；SCNTE的囊胚细胞数（120）显著多于PAE的囊胚细胞数（96），而与IVFE的囊胚细胞数（107）没有显著差异。繁殖季节卵巢PAE和SCNTE的发育率显著高于非繁殖季节。卵巢在14～18℃保存15～17h，没有影响PAE的体外发育，却显著降低了SCNTE的卵裂率，且没有得到囊胚。SOFaa和CR1aa培养基对PAE和SCNTE的早期发育没有显著影响。由此可见，季节和卵巢的保存方式对绵羊胚胎的体外发育率有显著影响，且不同类型胚胎的质量也存在显著差异。

胚胎干细胞研究的新工具:RNA干扰

胚胎干细胞研究是20世纪90年代以来在生物医学领域中最引人注目的热点之一,而新近发展起来的RNA干扰技术,能快速有效地沉默基因表达,将成为胚胎干细胞生物学研究的得力工具。现对RNA干扰的作用机制,以及RNA干扰应用于胚胎干细胞研究的方法与RNA干扰在胚胎干细胞研究领域的进展作一综述,以期为今后这方面的研究提供参考。

Cdx2和aPKC对胚胎早期发育的影响

尾型同源盒转录因子(Cdx2)能促进早期胚胎滋养外胚层(TE)的发育,并在胚胎发育体节的延伸中发挥着重要的作用;非典型性蛋白激酶(aPKC)则控制着细胞对称性和胚胎的极性,以维持哺乳动物神经细胞的功能和干细胞的分化,同时aPKC还参与调节外胚层细胞的发育,此外,Cdx2的表达水平也影响着aPKC在胚胎卵裂球顶端的定位。论文对Cdx2和aPKC在胚胎发育和极性建立方面的作用机制进行综述。

哺乳动物早期胚胎表观遗传的非对称性研究进展

在哺乳动物发育早期,双亲基因组间及胚胎细胞系间均存在表观遗传非对称性,这对胚胎发育调控有重要意义。本文综述了受精卵、囊胚的表观遗传非对称性现象及目前对其机制的研究进展。克隆胚胎的表观遗传非对称性有所丢失,它们中的大部分有发育缺陷,尤其是胚胎和胚外组织发育失衡,这也说明了保持表观遗传非对称性对于胚胎发育的重要性。

胚胎干细胞移植治疗帕金森病的研究进展

帕金森病(PD)是一种以中脑多巴胺神经元丢失为特征的中枢神经系统退行性疾病。综合近几年有关胚胎干细胞(ES)移植治疗PD方面的文献,认为ES细胞是移植治疗PD较为理想的细胞,有着广阔的治疗前景。

奶山羊胎儿成纤维细胞的分离培养及脂质体法转染研究

为获得转基因克隆羊的供体细胞,本试验采用组织块培养法结合胰蛋白酶消化法分离纯化得到奶山羊胎儿成纤维细胞(gFFs),绘制了生长曲线,鉴定了胎儿细胞性别及核型特征,并且研究了脂质体量、质粒量和转染时间对gFFs的绿色荧光蛋白(GFP)转染效率的影响。结果表明:该培养体系可以支持奶山羊胎儿成纤维细胞的体外生长,其细胞形态为梭形,高度汇合后呈火焰状,增殖特性以及核型特征均为正常,性别鉴定显示该奶山羊胎儿细胞为雌性,符合体细胞转基因克隆的基本要求。24孔板中采用脂质体转染试剂4.0μL、质粒DNA 1.2μg,转染6 h可以获得最佳的转染效果,转染效率达4.21%。

不同营养水平对湖羊黄体期血液理化指标及卵泡发育的影响

【目的】研究不同营养水平对湖羊黄体期血液理化指标及卵泡发育的影响。【方法】选择28只经产母羊,于发情周期第6天分别按0.5倍体重维持需要量(R组),1倍体重维持需要量(C组)和1.5倍体重维持需要量(S组)饲喂6 d,第12天每组屠宰6头;剩下的湖羊用于观察发情;分别于发情周期第7、8、10和12天采血。【结果】随着营养水平的提高,≥3.5 mm的卵泡数量显著增加(P<0.05)、2.5—3.5 mm的卵泡数量显著降低(P<0.05),平均发情周期缩短(P<0.05),血液尿素、胆固醇和游离脂肪酸含量显著下降(P<0.05),甘油三酯含量显著提高(P<0.05);S组乳酸脱氢酶活性显著高于C组(P<0.05);血液尿酸、血氨、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白浓度和谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性差异不显著(P>0.05),但尿酸、血氨、低密度脂蛋白含量和谷草转氨酶活性具有时间效应(P<0.05)。【结论】绵羊黄体期不同生理阶段具有不同的营养需求和代谢特点,黄体期限饲抑制卵泡发育与蛋白质和脂类合成降低、分解增强有关。