高效液相色谱法测定猪油甘油三酯中的脂肪酸位置分布

建立了一种采用高效液相色谱法(HPLC)分析猪油甘油三酯中的脂肪酸组成及其位置分布的方法。利用sn 1,3位专一性脂肪酶对甘油三酯sn 1,3位上的脂肪酸进行水解,形成sn 2位甘油单酯和游离脂肪酸;之后,通过甘油三酯中脂肪酸总含量和sn 1,3位上脂肪酸含量之间的差值计算出sn 2位上的脂肪酸含量。利用 2 溴苯乙酮仅同游离脂肪酸作用的特点,将脂肪酸酯化为苯乙酰甲酯,然后进行HPLC分析。分析所用色谱柱为ZORBAXSBC18柱,以十七酸作为内标,甲醇 乙腈 水为流动相,采用梯度洗脱 (梯度洗脱程序为甲醇 乙腈 水由 80∶10∶10(体积比,下同)在 35min内线性变化到 86∶10∶4,然后在 5min内恢复到起始比例,流动相流速为 1mL/min),通过测定苯乙酰甲酯在 254nm处的吸光度值来测定脂肪酸含量。结果表明,猪油甘油三酯中的脂肪酸主要是棕榈酸和油酸(分别占总量的 26 61%和 43 18% ),其中油酸主要分布于sn 1,3位上,而棕榈酸分布于sn 2位上。这些测定结果与传统气相色谱法的测定结果相吻合。该方法简单可行,省去了传统测定中费时的薄层色谱分离步骤,可成为一种有效的实验室分析方法。