致仔猪脑膜炎猪链球菌的分离鉴定

旨在从脑膜炎症状仔猪的脑组织及其他脏器中分离鉴定病原菌。采集患病仔猪脏器分离病原,通过PCR及血清凝集试验鉴定其种属及血清型;透射电镜观察分离株的超微结构;经多序列位点分型分析,鉴定其ST型;通过测定最小抑菌浓度分析其耐药性;经小鼠攻毒试验分析其毒力。结果:最终从患脑膜炎仔猪的脑组织中分离到一株猪链球菌,血清型为9型,将其命名为WH1609。电镜结果显示WH1609有荚膜结构。多位点序列分型结果表明WH1609属于一个新的ST型。耐药性试验结果表明WH1609对多种抗生素耐药;对万古霉素、青霉素及氨苄西林敏感。BALB/c小鼠毒力试验测得LD50为1.89×10~2 CFU·mL^(-1),病理组织学观察结果显示WH1609感染小鼠可出现明显的脑组织病变。本研究从患脑膜炎的仔猪脑组织中分离到一株猪链球菌9型强毒株,其在BALB/c小鼠的半数致死量为已发现的猪链球菌强毒株的10~5倍以上,对猪链球菌致脑膜炎分子机制的研究有重要的意义。

一种新的猪链球菌整合性接合元件的鉴定及环化分析

[目的]本试验以猪链球菌Chz型的2株临床分离株AH681和HN136为研究对象,通过分析鉴定其整合性接合元件(integrative and conjugative element,ICE)和检测其环化活性,探讨猪链球菌ICE与耐药基因转移的关系和多重耐药机制。[方法]采用最小抑菌浓度法测定猪链球菌AH681和HN136的耐药性。建立生物信息学方法预测细菌基因组中整合性接合元件,结合已报道猪链球菌ICE的位置特点对其进行定位;用环化试验和接合试验检测所预测ICE的活性;构建进化树分析猪链球菌中ICE的进化关系。[结果]AH681和HN136均为多重耐药菌株,其基因组中存在明显外源插入的基因岛,其中大小为73 kb和115 kb的基因岛具备整合性接合元件的典型特点,且这2个基因岛对应的ICE(ICESsuAH681和ICESsuHN136)属于ICESa2603家族。进一步分析发现,ICESsuAH681中存在四环素类抗生素耐药基因tet(O)、大环内酯类抗生素耐药基因erm(B)、氟喹诺酮类药物出口ATP接合蛋白基因、细菌素操纵子和砷酸盐还原酶基因等;ICESsuHN136中存在tet(O)、erm(B)和细菌素基因簇等。环化试验证实ICESsuAH681可自主地从基因组上切离并成环,但未在P1/7菌株上获得ICESsuAH681的接合子;未检测到ICESsuHN136的切离和成环。进化分析结果表明猪链球菌中已明确位置的ICE在进化关系上有6个大分支,ICESsuAH681与ICESa2603家族ICE的亲缘关系更近。[结论]猪链球菌Chz型多重耐药菌株AH681中存在1个73 kb的携带tet(O)、erm(B)和arsc等抗性基因的ICESsuAH681,它可从基因组上切除并环化,是一个有环化活性的ICE。

好氧堆肥高温期灭活病原菌的效果和影响因素研究

畜禽粪便和秸秆等农业有机废弃物中存在大量具有致病风险的人体和动植物病原菌,好氧堆肥高温期对病原菌的消减效果和影响病原菌存活的理化因子需探明。首先检测了市售25种商品有机肥料中病原菌存活的情况;其次考察了好氧堆肥高温阶段病原菌的灭活效果,并探究温度、pH、铵浓度对2种模式病原菌(大肠杆菌与青枯菌)存活的影响。调查的25种商品有机肥中有3个样品检测出存活的潜在病原菌,表明市售商品有机肥仍存在环境风险。好氧堆肥高温期对病原菌的灭活试验表明,高温期后堆体中仅检测出丰度极低的病原菌DNA。室内试验表明随着温度的升高,2种模式病原菌的存活能力减弱,灭活的时间缩短;pH对2种病原菌的灭活效果不同;铵浓度越高,对2种病原菌生长的抑制效果越强。高温期是好氧堆肥过程中病原菌灭活的重要阶段,堆肥高温期可有效消减畜禽粪便堆肥原料中的大部分病原菌,达到相关行业标准的要求。堆体温度、pH和铵浓度是影响病原菌存活的重要因素。