小鼠杂交细胞生物学特征的观察

本文用小鼠NS—1骨髓瘤细胞与小鼠脾淋巴细胞经PEG介导进行融合,通过HAT选择,有成效地获得了同种杂种细胞。在融合后第30、50、70、90天观察了杂种细胞的染色体畸变和间期细胞核损伤,并对亲本和杂种细胞的染色体核型、带型(G带、C带)进行了比较。 结果表明:NS—1细胞系的染色体平均数为64.2条,有一条标记性的亚中着丝粒染色体及一条微小染色体。小鼠脾淋巴细胞染色体为2n=40,全部为端着丝粒染色体。NS—1/小鼠脾淋巴细胞融合后的杂种细胞,染色体平均数随融合后杂种的传代而逐渐减少。到第70天时已稳定,平均为80.7±6.2条。同时,随融合后传代,杂种细胞染色体畸变率和核碎裂也增加。 最后对染色体丢失的机理及意义以及饲养细胞在融合中的作用进行了初步讨论。

赤麂SRY基因的测序及其与部分偶蹄目动物SRY基因序列的比较

采用人SRY基因的一段保守序列的引物 ,通过PCR在雄性赤麂中扩增出了赤麂SRY基因的特异片段 ,通过DNA斑点杂交证实其扩增产物与人SRY基因有着较高的同源性。将PCR产物克隆到载体 pGEM TVec tor中 ,转化DH5α菌 ,经与人SRY基因探针进行菌落杂交筛选出赤麂SRY基因的阳性克隆 ,并对其进行了测序 .将其序列与基因库中录入的所有偶蹄目动物的SRY基因序列进行同源性比较 ,用UPGMA法构建了其系统进化树 ,从分类和进化上对赤麂SRY基因进行分析。

三例氨基糖甙类抗生素致聋患者的线粒体DNA测序分析

应用PCR扩增产物直接对3名氨基糖甙类抗生素致聋患者的线粒体DNA进行序列分析，结果表明，他们的线粒体DNA均存在第1555位核苷酸A－G的突变．因此认为该突变是人体对氨基精甙类抗生素致聋遗传易感性的分子基础，与氨基糖甙类抗生素共同作用造成耳聋。

高效电转化率条件的探索

对影响 DNA电转化效率的主要因素进行探索 .结果表明 :在相同的电场强度、电阻和电容条件下 ,电脉冲时间的长短对电转化效率有较大影响 ,电脉冲时间太长或太短均使转化效率降低 ;用对数生长早中期的细菌制备感受态细胞 ,经液氮速冻后储存于 - 70℃ ,能获得高转化效率 .

线粒体基因突变与NIDDM发生的关系

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ及ＰＣＲ产物直接测序等技术对９０例ＮＩＤＤＭ（即非胰岛素依赖型糖尿病）及８０例正常对照个体的血细胞线粒体ＤＮＡ进行了突变分析。结果在２例患者中发现线粒体ＤＮＡ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡ，ｍｔＤＮＡ）ＮＤ１（ＮａＤＨＤｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓｕｂｕｎｉｔＩ）基因上３３１６位点存在Ｇ→Ａ的点突变，导致丙氨酸错义突变成苏氨酸，而在８０例正常对照个体中均不存在此位点突变。国内外已证实的和１５％ＮＩＤＤＭ发生有关的ｍｔＤＮＡｔＲＮＡＬｅｕ［（ＵＵＲ）］基因上３２４３位点Ａ→Ｇ的突变在本实验中并未发现。由此推断，３３１６位点Ｇ→Ａ的突变可能与ＮＩＤＤＭ的发生有关，３２４３位点Ａ→Ｇ的突变率确实很低，可见糖尿病的发生在线粒体遗传上具有广泛的异质性。

Leber氏病的mtDNA突变

Leber氏病是一种典型的母系遗传病,表现为急性、亚急性视神经萎缩,Wallace于1988年首次证实了此病患者中存在mtDNA的特异性改变——Walllce突变。我们研究了8个独立来源的中国汉族人Leber氏病患者,其中在4个患者中找到了mtDNA的Wallace突变,支持了Wallace关于Leber氏病发病机理的假说。

应用PCR产物直接银染测序技术检测大肠癌p53基因点突变

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ结合ＰＣＲ产物直接银染测序技术对２４例大肠癌ｐ５３基因第５～７外显子进行点突变的研究。结果检出５例（２６７％）阳性，均为错义突变；其中３例为碱基ＧＣ到ＡＴ的转换，１例为ＧＣ到ＴＡ的颠换，另１例为ＡＴ到ＣＧ的颠换，后者尚未见报道。突变位点分布在ｐ５３基因第１４１、１７５、２４５、２４８和２５８位密码子，其中４例发生在ＣｐＧ位点。本文对ｐ５３基因点突变谱的分析为大肠癌的病因学研究提供了科学依据，并讨论了ＰＣＲ产物直接银染测序技术的优越性。

大肠癌中p53基因突变的研究

应用聚合酶链反应（PCR）──单链构型多态性（SSCP）结合银染法对14例大肠癌p53基因的第4、第5－6和第7外显子进行了点突变的研究，结果共检测出6例点突变，而且发现各外显子的突变频率存在差异。另外，利用购自ATCC的两个探针（p53cDNA探针和pYNZ22探针）对大肠癌中p53基因的杂合性丢失进行了研究，在14例大肠癌中共检出6例杂合性丢失。将点突变检测结果同杂合性丢失结果进行比较分析，并着重探讨了大肠癌中p53基因失活导致肿瘤的作用方式。

母系遗传性聋大家系全基因组扫描研究

目的 探索与母系遗传性非综合征性耳聋相关的核基因。方法 选择常染色体上 36 5个短串联重复序列标记 ,应用DNAPooling方法对一母系遗传性聋家系进行全基因组扫描。分析比较患者基因池与患者亲属基因池、家系配偶池等位基因频率的差异 ,对扫描所得的部分阳性位点进行连锁分析。结果 在全基因组中发现 45个患者基因池某一等位基因频率远高于患者亲属基因池和家系配偶池的位点 ,对其中部分位点的研究未发现紧密连锁证据。结论 本文经全基因组扫描所确定的 45个阳性位点可作为本家系连锁分析的候选位点。

Leber氏遗传性视神经萎缩病——一种因线粒体DNA突变引起的疾病

本文研究了8个独立来源的中国汉族人Leber氏病家系的患者,其中在4个家系的患者中找到了这种突变。这种转换突变使NADH脱氢酶第4个亚单位(ND_4)的第340位编码子的精氨酸转变为组氨酸,并使SfaNI酶的切割位点消失,因此可提供一种简单的诊断方法。

快速检测尖锐湿疣组织中人乳头瘤病毒6型和11型DNA的研究

本文应用聚合酶链反应技术对30例人生殖器尖锐湿疣组织中HPV6,11 DNA的存在进行了检测研究。结果发现HPV6,HPV11 DNA的阳性率分别为60％,90％HPV6,HPV11 DNA双重检出率为53.3％,总阳性率达96.7％,本文结果证实HPV6,11的感染和尖锐湿疣的发生密切相关。本文检测方法具有快速,灵敏、特异性强的优点,为HPVDNA的检测及其分型研究提供了有效的手段。作者还对两例女阴假性湿疣进行PCR扩增,结果似乎不支持女阴假性湿疣的HPV感染的病因学。

线粒体DNA缺失与神经肌肉性疾病的研究

应用 PCR 技术对13例神经肌肉疾病患者的线粒体 DNA 缺失进行了研究。结果表明,其中二例肢带型肌营养不良症患者的骨骼肌组织和一例帕金森氏病患者的血细胞线粒体 DNA 中存在至少526bp的缺失.提示线粒体突变在一些神经肌肉性疾病的发生中起一定的作片用.

人癌基因c—sis 的RFLP_s在肝癌和正常组织中的分布

作者用人 c-sis 基因1.7kb 探针(BamHⅠ—BamHⅠ)研究了 c-sis 基因的 RFLps在肝癌和正常组织中的分布。并首次报道 c-sis 基因对 HnidⅢ、EcoRⅠ、SacⅠ、PstⅠ、PvuⅡ和 MspⅠ六种限制酶有多态性,其中用 EcoRⅠ、PatⅠ、PvuⅡ、和 MspⅠ四种限制酶、发现的 c-sis 基因 RFLPs 在肝癌和正常组织中无明显差别。本文还对 c-sis 基因甲基化问题进行了讨论,并表明 c-sis 基因的 GGCC 顺序甲基化程度较低且无组织特异性:

中国人散发性大肠癌中微卫星DNA不稳定的研究

目的：探讨中国人散发性大肠癌中微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 不稳定及复制差错与大肠癌生物学行为的关系。方法：选择１０ 个微卫星位点， 应用 Ｐ Ｃ Ｒ－ 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对３９ 例散发性大肠癌组织进行检测。结果：在多个位点上发现了较高的微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 不稳定（ Ｍ Ｉ） ，其中 Ｄ３ Ｓ１３１７ 位点上 Ｍ Ｉ为４４ ％ ， Ｄ３ Ｓ９６６ 上 Ｍ Ｉ为２６ ．６ ％ ， Ｄ２ Ｓ１２３ 和 Ｄ２ Ｓ１１９ 上 Ｍ Ｉ分别为３６ ％ 和２５ ．７ ％ 。结论： Ｍ Ｉ阳性率和肿瘤组织学分类无明显相关性，而与肿瘤组织的分化程度、浸润程度等有显著的相关关系，因而微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 可以为肿瘤的早期诊断及患者预后判断提供帮助。同时，在散发性结肠癌中也存在较高的微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 不稳定，这可能与某种 Ｄ Ｎ Ａ 错配修复基因发生突变有关。

辅助噬菌体扩增与定量条件的研究

对辅助噬菌体扩增、定量及保存条件进行研究。结果显示：分区划线接种辅助噬菌体可获得分隔良好的噬斑；大肠杆菌ＸＬ１－ｂｌｕｅ易发生变异，单个菌落接种于１０ｍｌＳＢ培养基，经３７℃１７０ｒ·ｍｉｎ１振荡培养４～７ｈ之间的细菌，应通过微量菌斑形成实验鉴定敏感性后，再用于测定辅助噬菌体滴度，均可形成分隔良好的噬斑，不必精确测定细菌ＯＤ６００值，该菌液４℃储存可使用１星期不影响结果。辅助噬菌体应保存于－２０℃。

单管中进行反转录－PCR检测肠道病毒RNA

采用改进的异硫氰酸胍－酚－氯仿一步抽提法提取肠道病毒ＲＮＡ，通过反复试验，建立了单管一ＲＴ一ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）反应体系。结果表明，此法较常规的分步法简便快速、可靠，为临床检测和流行病学研究提供了较理想的方法。

5’-非编码区型特异性引物检测HCV基因型

我们探索建立一种 HCV基因分型方法 ,用 5’非编码区 (5’NCR) 1,2 ,3,1b型特异性引物 ,应用逆转录套式 PCR,对 HCV RNA阳性血清进行分型。对 6 5份 HCV RNA阳性血清的分型率为 90 .8% (5 9/6 5 )。 5 9例中混合感染 7例 ,1型 5 0例 ,其中 1b亚型 46例 ;3型 2例。从而认为 :所用的型特异性引物可成功地对 HCV基因分型 ,分型结果证实南京市 HCV流行优势株为 1b亚型。

一个氨基甙类抗生素致聋家系线粒体DNA序列分析

目的：通过对一个氨基甙类抗生素致聋家系１１名成员的线粒体ＤＮＡ进行分析，探讨该病的遗传方式及与线粒体ＤＮＡ突变的关系。方法：对１１名成员外周血线粒体ＤＮＡ进行ＰＣＲ－ＲＦＬＰ及测序分析。结果：８例标本的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ结果异常，测序表明其均存在１５５５位点Ｃ－Ｔ突变。结论：氨基甙类抗生素致聋与线粒体ＤＮＡ突变有关，该家系呈典型母系遗传。

一步法分离提取组织细胞总RNA

提取纯度高,完整性好的总 RNA 对完成Nor(?)hern 印迹,cDNA 合成及体外翻译等过程至关重要。总 RNA 的分离提取多采用胍—热酚法或胍—氯化铯法。我们参照国外实验室有关方法,采用异硫氰酸胍—酚—氯仿混合物,建立了一步法从肿瘤组织中快速提取细胞内总RNA 的新技术。结果表明一步法优于常规总RNA 分离提取方法。

一个非氨基糖甙类抗生素致聋家系mtDNA突变研究

目的：对１ 个有明确母系遗传的非氨基糖甙类抗生素致聋“线粒体耳聋”家系致病的分子生物学机制进行探索。方法：应用 Ｐ Ｃ Ｒ、 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ 和 Ｄ Ｎ Ａ 序列分析等分子生物学技术对其线粒体 Ｄ Ｎ Ａ突变进行研究。结果：家系中全部患者和１ 个母系亲属存在线粒体 Ｄ Ｎ Ａ１２ Ｓｒ Ｒ Ｎ Ａ 基因１５５５ 位点 Ａ Ｇ 的突变，家系中的正常后代和２０ 个正常对照个体未发现突变。结论：线粒体 Ｄ Ｎ Ａ Ａ１５５５ Ｇ 点突变是导致该家系耳聋的主要因素之一。