骨髓间充质干细胞培养及向神经细胞诱导分化的实验研究

目的:体外培养骨髓间充质干细胞(BM-MSC),诱导BM-MSC向神经细胞分化。方法:采用DMEM培养液加胎牛血清(DMEM/FBS)或无血清培养基体外培养人BM-MSC,测定细胞倍增时间;免疫组织化学法分析BM-MSC的表面标记;纤维母细胞集落形成(CFU-F)试验检测BM-MSC增殖能力;应用二甲基亚砜/羟丁苯甲酯(DMSO/BHA)化学因子诱导BM-MSC向神经细胞分化。结果:BM-MSC为单层贴壁生长,呈现规则的集束辐射状排列。在对数生长期,细胞倍增时间约为46 h。CFU-F试验表明,体外培养的MSC的集落形成能力为正常骨髓单个核细胞(MNC)的15 000倍以上。免疫组化分析表明,BM-MSC为CD13和CD105阳性,CD34阴性。DMSO/BHA化学因子能诱导BM-MSC分化为神经细胞,但是分化后即失去增殖能力,并于48 h后逐渐死亡。结论:通过体外培养可以获得大量高度均一的BM-MSC。BM-MSC可向神经细胞诱导分化,但尚缺乏实际应用的可能性。

诱导分化剂和热应激对K562细胞JWA和热应激蛋白70表达的影响

目的 研究诱导K5 6 2细胞分化和热应激过程中 ,JWA表达的特点 ,探讨JWA与热应激蛋白 (Hsp70 )表达的关系以及参与诱导分化和热应激可能的机制。方法 分别建立K5 6 2细胞诱导分化和热应激模型 ,采用Western blot方法检测JWA、Hsp70、热休克转录因子 (HSF1)、HSF2蛋白表达水平。结果 (1)佛波酯 (TPA ,10 0ng ml)、氯化高铁血红素 (hemin ,3× 10 - 5mol L)、阿糖胞苷 (Ara C ,80ng ml)、阿霉素 (adriamycin ,4× 10 - 8mol L)、全反式维甲酸 (ATRA ,1× 10 - 6 mol L)、三氧化二砷 (As2 O3,1× 10 - 6 mol L)分别诱导K5 6 2细胞 4 8h ,JWA、Hsp70蛋白表达水平均明显增加 ;HSF2在hemin、Ara C、ad riamycin诱导下表达增加 ;(2 )在 4 2℃不同时间 (10、2 0、30、4 5、6 0、90min)和不同温度 (39℃、4 2℃、4 5℃ )处理下 ,Hsp70表达水平的变化与JWA蛋白表达水平的变化趋势基本相似 ,且HSF1在热应激早期表达。结论 在诱导分化、热应激过程中 ,JWA与Hsp70蛋白表达水平均明显上调 ,且变化趋势有一定的相似 ,但所涉及的细胞内信号转导通路可能不是惟一的。JWA表达与HSF1或HSF2似乎没有直接的特征性联系。

活性氧在4-HPR诱导膀胱癌细胞T24凋亡中的作用

目的研究4HPR诱导的膀胱癌细胞凋亡,探讨DNA氧化损伤与修复在其中的作用。方法以4HPR处理T24细胞后,检测其生长抑制情况,用荧光分光光度计检测细胞内活性氧(ROS)含量,用流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况,用Westernblot法检测DNA修复蛋白XRCC1的表达。结果4HPR能诱导细胞发生凋亡,2.5、5.0、10.0μmolL4HPR引起的凋亡率分别达到1.8%、4.0%和10.5%,在此过程中伴随着细胞内ROS水平升高(最高达到3倍),并使DNA修复蛋白XRCC1的表达下降,使caspase3激活。抗氧化物质维生素C能有效地抑制4HPR引起的ROS升高,并能部分抑制其引起的细胞生长抑制、凋亡及XRCC1蛋白表达的下降。结论ROS的生成并造成DNA损伤可能是4HPR诱导膀胱癌细胞凋亡的主要机制。

丙烯腈对中国仓鼠肺细胞细胞活力和间隙连接通讯功能的影响

目的 探讨丙烯腈 (ACN)对中国仓鼠肺细胞 (CHL)细胞活力及细胞间隙连接通讯(GJIC)功能的影响。方法 镜下观察细胞形态学改变 ,采用MTT法测定细胞生长半数抑制浓度(IC50 ) ,应用荧光染料示踪技术观测ACN对CHL细胞GJIC的影响。结果 ACN染毒 12和 2 4h ,细胞生长IC50 分别为 435 73和 2 5 1 0 9μg/ml。低剂量组 (12 5和 2 5 0 μg/ml)细胞形态与对照组相比无明显改变 ,较高剂量组 (5 0 0～ 2 0 0 0 μg/ml)细胞轻度受损 (0～Ⅰ级 ) ,高剂量组 (80 0 0 μg/ml)细胞明显受损 (Ⅲ级 )。ACN原形在无明显细胞毒性剂量 (10 0～ 5 0 0 μg/ml)时即可抑制GJIC ,并呈持续抑制作用 ,存在剂量 效应和时间 效应关系。ACN经代谢活化后 ,可加重对细胞GJIC的抑制作用和细胞受损程度 ,但在染毒 12h后停止接触 ,该作用在一定程度上可逆转。牛磺酸作为一种重要的抗氧化剂 ,预处理细胞 (牛磺酸剂量为 10和 2 0mmol/L)可明显抑制ACN对细胞GJIC的下调作用。结论 ACN在较高剂量时对CHL细胞具有毒性作用 ,但在无明显细胞损伤剂量时即能明显抑制细胞GJIC功能 ,该抑制作用在停止接触ACN或有抗氧化剂存在时可逆转 ,提示氧化应激在ACN所致细胞GJIC功能下调中具有重要作用。