Seminar教学模式在卫生毒理学中的应用

以卫生毒理学的教学实践为依据,从教学实施方式、内容、教学效果以及存在问题等方面进行了综合分析,得出在卫生毒理学中通过开展Seminar教学,增进了教师和学生在课堂上的互动与交流,使学生们有更多独立思考的机会,希望今后这一新的教学模式能在教学中得到发展和推广。

南京地区人群CYP2E1基因多态性及吸烟、饮酒与前列腺癌易感性

目的:探讨Ⅰ相代谢酶细胞色素P450 2E1(CYP2E1)基因RsaⅠ和PstⅠ位点多态性及吸烟、饮酒习惯与前列腺癌(PCa)发病风险的关系,并探讨基因与生活习惯在PCa发病中的联合作用。方法:采用PCR-RFLP技术检测109例原发性PCa患者及202例年龄匹配的男性非肿瘤患者外周血CYP2E1基因RsaⅠ和PstⅠ多态位点的基因型。结果:深吸烟(OR=2.29,95%CI:1.28～4.09)、重度吸烟史(OR=1.81,95%CI:1.02～3.22)等生活习惯为PCa易感因素。CYP2E1 C1/C1基因型与PCa易感性有显著相关(OR=1.71,95%CI:1.04～2.82),且与饮酒的联合作用明显与PCa易感性相关(OR=2.21,95%CI:1.06～4.59)。重度吸烟人群中,携带CYP2E1易感基因型(C1/C1)与不吸烟且携带非易感基因型(C1/C2或C2/C2)个体相比PCa的发病风险显著增高(OR=2.80,95%CI:1.20～6.56)。结论:携带CYP2E1易感基因型(C1/C1)并有烟酒嗜好者PCa的发病风险显著增高,且与烟草的暴露呈显著剂量反应关系。

量子毒理学在药理学和毒理学上的潜在发展与应用

随着量子科学的发展以及新材料技术的出现,量子毒理学已成为毒理学研究领域的一个新的分支。量子毒理学主要研究药物、化学品和量子等的毒理作用机制。量子毒理学在药理学和毒理学领域有着潜在的发展前景。本文简介了量子毒理学的概念、研究方法以及其在药理学和毒理学方面的发展前景。化学反应的量子效应会增强毒理效应,这是预测量子和纳米化合物的毒性以及其他毒理机制的重点。量子毒理学研究外源物质与机体靶标分子之间的相互作用和结构-效应关系,采用量子化学、量子生物学和量子药理学等的理论和方法研究毒理机制及毒性防治方法。

21世纪毒理学的新方向——绿色毒理学与计算毒理学

随着世界科技的发展,人们越来越重视生态环境及工农业生产的可持续性发展,美国化学会(ACS)10年前提出“绿色化学”的概念,目前得到世界各国的广泛响应,它是指利用化学技术减少或消灭对人体健康、社会安全和生态环境有害的原料、催化剂、溶剂和试剂以及产物和副产物等的应用和生产。因此,相应地出现了绿色毒理学,由于“绿色化学”需从源头做起,从化学物质的设计开始,选择生产何种化学物质,用何种原料、催化剂、溶剂和试剂,以及它的产物和副产物如何,都离不开计算毒理学(又称预测毒理学)。计算毒理学对指导“绿色化学”的生产起着重要的作用。因此,绿色毒理学与计算毒理学是21世纪毒理学的一个方向。

延胡索乙素对小鼠坐骨神经CCI模型背根神经节Cav1.2表达的影响

目的探讨延胡索乙素对小鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)所致神经病理性疼痛的镇痛作用以及对背根神经节Cav1.2表达的影响。方法♂C57BL/6小鼠40只,随机分为5组,分别为假手术组(S组)、CCI组(C组)、延胡索乙素组(L组)。建立稳定的小鼠坐骨神经慢性压迫性损伤致神经病理性疼痛模型。按照神经病理性疼痛的诱发和持续时间,又将L组分为诱导期组、诱导维持期组、长程低剂量组。诱导期组于疼痛诱导期(0~5 d)、诱导维持期组于疼痛诱导期及维持期(0~5 d、14~19 d)腹腔给予延胡索乙素45mg·kg^(-1),每日1次;长程低剂量组从术后即刻开始腹腔给予延胡索乙素15 mg·kg^(-1),每日1次,给予19 d。监测小鼠行为学变化,检测小鼠机械痛阈和热痛阈,Western blot及免疫组织化学方法测定背根神经节中Cav1.2表达。结果脊髓背根神经节Cav1.2在C组表达水平最低,S组表达水平最高,在诱导期组、诱导维持期组及长程低剂量组表达明显上调,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与C组比较,诱导期组、诱导维持期组高剂量以及长程低剂量组长程低剂量给予延胡索乙素可以明显缓解神经病理性疼痛诱导的机械痛敏和热痛敏(P<0.05,P<0.01)。高剂量延胡索乙素可以缓解诱导期、维持期的机械痛敏及维持期的热痛敏(P<0.05),低剂量延胡索乙素对诱导期机械痛敏和热痛敏均无明显作用(P>0.05)。结论小鼠CCI模型疼痛的诱导期、诱导维持期应用高剂量以及长程应用低剂量延胡索乙素可明显缓解坐骨神经慢性压迫性损伤所致神经病理性疼痛,其可能机制之一是延胡索乙素通过上调脊髓背根经节Cav1.2亚基的表达来发挥镇痛作用。

缺血性脑卒中相关危险因素的病例对照研究

目的评价传统与新型相关危险因素与缺血性脑卒中发病风险的关系。方法采用病例对照研究方法,在华东地区选择401例缺血性脑卒中病例,其中脑血栓形成158例,腔梗243例。和442例正常对照组人群。用问卷调查和体检的方式对缺血性脑卒中相关因素进行收集和分析。结果单因素分析显示:BMI,脑血管病家族史,既往史中的TIA、高血压、糖尿病、冠心病、肾脏疾病,目前血压值(包括收缩压和舒张压),血常规中的白细胞数、中性粒细胞比例,生化指标中的血糖、TG、HDL-C值均提示能增加缺血性脑卒中的发病风险(P<0.05)。Logistic回归分析显示:TIA史、高血压、糖尿病、冠心病等既往史能显著增加缺血性脑卒中的患病风险。结论缺血性脑卒中需要采取综合干预措施。新的危险因素不容忽视。影响疾病发生发展的其它危险因素尚需要进一步探讨。

酶免疫法测定尿液生殖激素在正常和体外受精周期中的应用

目的 :建立一种用尿酶免疫方法监测尿生殖激素促卵泡素 (FSH β)、雌酮结合物 (E1C)、孕二醇 3 葡糖苷酸 (PdG)在正常月经周期和人工受精 (IVF)周期中的动态变化。方法 :对 11例正常生育年龄妇女用尿酶免疫法测定月经周期中尿FSH β、E1C、PdG水平 ,10例同时抽血用放射免疫法测定血FSH、雌二醇 (E2 )、孕激素 (P)水平。用尿酶免疫法测定 18例IVF周期治疗的患者尿FSH β、E1C、PdG水平的变化。结果 :10例正常生育年龄妇女 2 8天月经周期中血FSH、E2 、P与尿FSH β、E1C、PdG周期变化的一致性非常好 ,19个正常月经周期中尿生殖激素水平变化曲线也说明该点。 18例IVF周期由于持续大量促性腺激素释放激素对垂体的降调节作用 ,在排卵期无FSH和LH峰。结论 :酶免疫法测定尿生殖激素在IVF周期中。

骨髓间充质干细胞培养及向神经细胞诱导分化的实验研究

目的:体外培养骨髓间充质干细胞(BM-MSC),诱导BM-MSC向神经细胞分化。方法:采用DMEM培养液加胎牛血清(DMEM/FBS)或无血清培养基体外培养人BM-MSC,测定细胞倍增时间;免疫组织化学法分析BM-MSC的表面标记;纤维母细胞集落形成(CFU-F)试验检测BM-MSC增殖能力;应用二甲基亚砜/羟丁苯甲酯(DMSO/BHA)化学因子诱导BM-MSC向神经细胞分化。结果:BM-MSC为单层贴壁生长,呈现规则的集束辐射状排列。在对数生长期,细胞倍增时间约为46 h。CFU-F试验表明,体外培养的MSC的集落形成能力为正常骨髓单个核细胞(MNC)的15 000倍以上。免疫组化分析表明,BM-MSC为CD13和CD105阳性,CD34阴性。DMSO/BHA化学因子能诱导BM-MSC分化为神经细胞,但是分化后即失去增殖能力,并于48 h后逐渐死亡。结论:通过体外培养可以获得大量高度均一的BM-MSC。BM-MSC可向神经细胞诱导分化,但尚缺乏实际应用的可能性。

华东地区ALOX5AP基因单核苷酸多态性与缺血性脑卒中的相关性研究

目的 探讨5-脂氧合酶激活蛋白（ALOX5AP）基因多态性位点与中国华东地区汉族人群缺血性脑卒中的相关性.方法 本研究共纳入658例缺血性脑卒中患者,704例健康者做对照研究,并进一步将病例组进行TOAST分型,采用Taqman探针技术检测基因多态性.运用统计软件进行基因型、等位基因等关联分析,以及基因多态性与缺血性脑卒中及其亚型之间患病风险的独立相关性分析.结果 rs17222919位点突变与华东地区缺血性脑卒中的发生成正相关.rs17222919 TG型能显著升高缺血性脑卒中的发病风险（OR=1.34,95%CI=1.02～1.75）,尤其与小动脉闭塞型（SAO）脑卒中发病密切相关（OR=1.40,95%CI=1.02～1.93）.TG和TG/GG型能显著增加女性脑卒中的发病风险,并经传统危险因素高血压分层后,同样能够显著增加高血压人群患脑卒中风险.而rs9579646位点经过性别分层后,AG和AG/GG型能降低男性缺血性脑卒中的发病风险,并且按照传统危险因素分层后,AG型能降低非高血压人群脑卒中的发病风险.结论 ALOX5AP多态性与中国华东地区汉族人群缺血性脑卒中患者密切相关,提示该基因多态性可能参与了中国华东地区汉族人群缺血性脑卒中的发生.

结直肠手术后认知功能障碍患者血清细胞因子的差异表达

目的应用高通量细胞因子抗体芯片筛查结直肠手术后认知功能障碍(POCD)患者血清差异表达的细胞因子并进行验证。方法 80例择期行结直肠手术患者,根据认知功能测试量表判定POCD,于手术前1 d、术后4 h取血分离血清,高通量细胞因子芯片筛查120个血清细胞因子,差异5倍以上因子经ELISA验证。结果 77例患者完成认知量表和血样采集,术后第7天,19例发生POCD。POCD患者在年龄、麻醉风险ASA分级、糖尿病发病率、受教育程度与非POCD患者有明显差异。高通量筛查出的5倍以上差异表达血清细胞因子9个,经ELISA验证结果显示:POCD患者术前白细胞介素17(IL-17)、Fas、巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α)水平明显高于非POCD患者,瘦素(leptin)明显低于非POCD患者;术后4 h血清IL-6、IL-11、IL-17、甲基受体趋化蛋白3(MCP3)、骨髓造血祖细胞抑制因子(MPIF-1)、MIP-3α明显高于非POCD患者,脑源性神经营养因子(BDNF)明显低于非POCD患者。POCD患者术后4 h的IL-6、IL-17、MCP3、MPIF-1明显高于术前;非POCD患者术后4 h IL-6、IL-17明显高于术前,Fas、BDNF明显低于术前。结论结直肠手术POCD的发生伴随的血清细胞因子IL-6、IL-11、IL-17、Fas、MPIF-1、MIP-3α、MCP3、leptin、BDNF的差异表达。

4-HPR联合DDP对HeLa细胞的增殖和凋亡作用

背景与目的：4-羟苯基维胺脂（N-4-hydroxyphenyl retinode，4-HPR）是一种全反式维甲酸的衍生物，它对多种肿瘤细胞有化学预防和治疗的双重作用且毒副作用小；还对放疗和化疗方法有不同程度的增敏作用。顺铂（cis-platinμm，DDP）是宫颈癌常用的化疗药物，但因其毒副作用及耐药等问题，临床应用受到限制。本研究旨在探讨4-HPR联合DDP对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能的机制，最终为临床上应用4-HPR治疗宫颈癌提供实验依据。材料与方法：采用MTF法检测单用4-HPR、DDP及两药联合时对HeLa细胞增殖的影响，分析4-HPR与DDP在抑制HeLa细胞增殖中的相互作用。用流式细胞仪测定细胞周期变化和细胞凋亡；用Hoeehst染色法检测细胞核的改变。结果：4-HPR对HeLa细胞的增殖抑制的浓度在（2-40）μmol／L范围内，并呈现较好的浓度和时间依赖性，在两药合用时上述作用更加明显；4-HPR可诱导细胞凋亡并将细胞阻滞于G2-M期和S期，当4-HPR浓度为10、20、40μmol／L时细胞的凋亡率分别为2．55％，16．55％，22．91％，而G2-M期和S期的细胞比率也随4-HPR的浓度升高而增加。当以上3种浓度的4-HPR与1μmol／L DDP联合作用时，两药呈现协同作用。结论：4-HPR（浓度在2-40μmol／L范围内）对HeLa细胞有显著的增殖抑制作用，且随4-HPR的浓度升高而增加，与DDP联合使用能增强HeLa细胞的敏感性，当以上3种浓度的4-HPR与1 μmol／L DDP联合作用时，两药呈现协同作用。4-HPR（浓度在2-40 μmol／L范围内）对HeLa细胞有显著的增殖抑制作用，与DDP联合使用能增强HeLa细胞的敏感性，这一作用可能与DDP和4-HPR协同诱导细胞凋亡及G2-M期和S期阻滞有关。

JWA基因在HL-60细胞定向分化中的表达及意义

为了研究JWA基因在HL60细胞定向分化中的表达规律,探讨其在白血病细胞分化和凋亡中的意义及可能的作用机制,应用FCM检测HL60细胞经ATRA(10-6mol/L)、AraC(10ng/ml)、TPA(10-8mol/L)作用后2、4、6、8天CD13、CD14、CD15、CD11b改变及细胞周期变化;应用半定量RT-PCR及蛋白印迹技术检测JWA基因在HL60细胞定向分化中的表达趋势以及相关凋亡因子Bcl2、HSP27和HSP70的表达。结果表明:经上述药物分别处理HL60细胞后,不同时段FCM相关指标检测结果证明其分别向粒、单核、巨噬细胞样分化。JWA基因表达呈时间依赖性升高;Bcl2则呈时间依赖性下降;HSP70在ATRA及TPA组与JWA表达呈正相关,与Bcl2呈负相关,而各组HSP27并无表达。ATRA处理HL60细胞后JWA基因表达趋势与原代细胞相反,且不需要ATRA诱导分化作为前提。分别以AraC10ng/ml和AraC20ng/ml处理HL60细胞后,JWA基因的表达呈反向变化,即前者呈时间依赖性增加,而后者则下降。结论:JWA基因在实现ATRA及TPA诱导白血病细胞分化和凋亡中可能具有双重调节作用;JWA基因表达的高低与AraC诱导分化作用及细胞毒作用有关;HL60细胞与原代白血病细胞在诱导分化机制方面可能不尽相同。

氰戊菊酯对小鼠精子体外获能的影响及机制探讨

[目的 ]观察氰戊菊酯 (fenvalerate ,Fen)对小鼠精子体外获能的影响并探讨其作用机制。 [方法 ] 2 0 0 μl小鼠精子细胞悬液加入不同终浓度Fen染毒后 ,CO2 孵箱 3 7℃培育 2h ,以金霉素 (chlortetracycline ,CTC)荧光染色后涂片观察小鼠精子体外获能培养后B型精子的发生率。[结果 ]以终浓度为 0、0 .62 5、1.2 5、2 .5、5 .0、10 .0、2 0 .0 μmol·L-1的Fen处理小鼠精子 ,其B型精子发生率分别为 ( 5 5 .0 5± 0 .43 ) %、( 5 2 .0 2± 1.2 9) %、( 4 7.13± 0 .87) %、( 4 0 .0 8± 0 .3 2 ) %、( 3 5 .79± 0 .88) %、( 2 8.66± 0 .96) %、( 2 7.89± 1.5 6) % ,半数有效剂量 (ED50 )为 5 μmol·L-1,其作用呈剂量 反应关系。同时Fen以时间依赖方式抑制B型精子发生率。进一步观察到 2 .5、5 .0、10 .0、2 0 .0 μmol·L-1的Fen组小鼠精子 ,与对照组相比 ,其精子细胞膜脂质流动性下降 [以 1,6 二苯已三烯 ( 1,6 diphenyl 1,3 ,5 hexatriene ,DPH )为荧光探针 ] ,作用呈剂量 反应关系。 [结论 ]氰戊菊酯抑制小鼠精子体外获能 ,其作用机制主要是氰戊菊酯降低了精子细胞膜脂质流动性。

川芎嗪对人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)氯化钴诱导缺氧后纤溶功能的影响

目的:建立人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)缺氧细胞模型,探讨川芎嗪在缺氧条件下对血管内皮细胞纤溶功能的影响。方法:细胞分为对照组、缺氧组和川芎嗪(TMP)干预组,利用氯化钴(1.6mmol/L)模拟Eahy926细胞缺氧环境,建立缺氧模型,TMP干预组分别用0.08和0.16g/L的TMP干预。Hoechst法、CCK-8法检测各组细胞活力,RT-PCR观察各组细胞组织型纤溶酶原激活物(tissue-type plasminogen activator,t-PA)、尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,u-PA)、纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibit ortype-1,PAI-1)mRNA表达,双抗体夹心ELISA法检测各组细胞培养上清液中t-PA、u-PA、PAI-1含量。结果:与对照组相比,缺氧组及TMP干预组均出现细胞活力下降(P<0.01),但与缺氧组相比,TMP干预组细胞活力上升(P<0.01),且高浓度组较低浓度组上升明显(P<0.01);RT-PCR和ELISA结果显示:与对照组相比,缺氧组t-PAmRNA表达量降低(P<0.01),细胞培养上清液t-PA含量减少(P<0.01);与缺氧组比,高低浓度TMP处理组t-PAmRNA表达量及细胞培养上清液t-PA含量均增高,具有统计学差异(P<0.01);而高浓度较低浓度TMP干预组t-PAmRNA表达量升高(P<0.05),细胞培养上清液t-PA含量增加(P<0.01)。结论:川芎嗪能够浓度依赖性减轻Eahy926细胞的缺氧损伤,并通过调节其t-PAmRNA表达及上清液t-PA的分泌,影响内皮细胞的纤溶功能。

促发精子获能的分子机制

获能是精子在雌性生殖道中转运期间获得受精能力的过程。获能的分子机制相当复杂 ,目前尚未明确 ,但促发获能的起始分子事件已初步确定 ,包括精子细胞膜表面胆固醇外流、膜电位的改变、蛋白磷酸化等。本文综述了促发精子获能的分子机制及其研究前景。

慢性髓系白血病首发血小板显著增多

本研究探讨以血小板显著增多首发的慢性髓系白血病(CML)临床、细胞遗传学及分子生物学特征。应用骨髓细胞涂片、骨髓活检观察细胞形态学改变;RT-PCR检测bcr/abl融合基因;常规染色体核型分析及FISH检测细胞遗传学变化。结果发现:以血小板显著增多为首发表现的CML是一组具有独特临床和生物学特点的疾病,骨髓细胞涂片和骨髓活检表明,骨髓增生活跃,以巨核系异常增生为主,血小板大片成堆,可见圆形核小巨核细胞,中等度白细胞增多,经细胞遗传学和分子生物学检测均证实存在有Ph染色体和(或)表达bcr/abl融合基因,对此类患者应该早期进行积极治疗,甚至进行分子生物学水平的干预;而原发性血小板增多症(ET)患者则不宜过多地使用化疗药物,否则反而诱致白血病的发生。结论:对血小板明显增多的患者应及时进行Ph染色体及bcr/abl融合基因表达水平的检测,这对于ET及CML的诊断和鉴别诊断极为重要,以避免误诊、误治。

液相色谱串联质谱法同时检测饮用水中8种氨基甲酸酯类农药的方法学研究

目的：建立自来水中8种氨基甲酸酯农药（仲丁威，异丙威，速灭威，甲萘威，灭多威，残杀威，苯氧威，猛杀威）的液相色谱-串联质谱分析方法。方法：水样在离心或液液萃取后通过C18色谱柱，以含0．2％的甲酸的甲醇和0．2％的甲酸溶液进行梯度洗脱，采用电离喷雾电离方式（ESI＋），通过多反应监测（MRM）定量。结果：在20min完成分析，离心处理后8种农药在0．05～5μg/ml浓度范围内线性相关系数〉0．9973。加标回收率为96．67％～111．52％（添加水平分别为0．1，1和5μg/ml），相对标准偏差5．4％～14．2％，最低检出限介于0．02～0．03μg／ml。对0．1μg／L的加标样在液液萃取后回收率在75．5％～128．3％，相对标准差4．7％～31．5％。结论：本法灵敏度高，选择性强，分析时间短，适合于对水中该8种氨基甲酸酯类的分析。

代森锰锌对PC-12细胞凋亡的影响

目的探讨代森锰锌对PC-12细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用体外细胞培养方法,PC-12细胞加入代森锰锌0,1,10,30,60和120μmol.L-1,培养24h后,应用WST-8法检测PC-12细胞增殖;PC-12细胞中加入代森锰锌0,1,30和120μmol.L-1,培养24h后,流式细胞术FITC-AnnexinⅤ/PI双染检测细胞凋亡率;Hoechst33258染色及倒置荧光显微镜观察细胞形态学改变;Western印迹法检测Bcl-2和Bax的表达以及ERK蛋白磷酸化水平。结果与正常对照组相比,随着代森锰锌浓度增加,代森锰锌组晚期凋亡率升高,呈浓度依赖关系,IC50为49.95μmol.L-1。代森锰锌120μmol.L-1组细胞晚期凋亡率为(90±4)%(P<0.05);Hoechst33258染色可见细胞核膨大、染色质边集浓染等凋亡特征;与正常对照组相比,Bcl-2逐渐降低,Bax和p-ERK1/2表达增高(P<0.05),代森锰锌120μmol.L-1组p-ERK1/2积分吸光度分别为128.0±2.5和178.4±4.0。结论代森锰锌能够诱导PC-12细胞凋亡,ERK信号通路可能在此过程中发挥作用。

吸烟与精子密度

目的 :研究吸烟与精子密度之间的关系。 方法 :选择 2 5 7例无任何生殖系统疾患的新婚男性列入本次研究 ,对每位研究对象都进行了精液分析、流行病学问卷调查 (包括吸烟、职业暴露和生活习惯等 )。 结果 :吸烟状况、总吸烟年包和吸烟深度均与精子密度的下降有关 ;虽然吸烟与精子动力学、精子总数之间存在关联 ,但无统计显著性。 结论

SIRT1在胃癌组织中表达及对患者预后的影响

目的:探讨胃癌和癌旁组织中SIRT1的表达及其对患者预后的影响。方法:收集1990年1月至1995年12月142例胃癌单纯手术治疗患者的临床病理资料,术后生存随访资料,将癌组织与相对应癌旁组织制作组织芯片,通过免疫组化的方法,分别获得SIRT1在其中的表达评分。分析SIRT1表达与患者临床病理指标及预后之间的关系。结果:本研究最终获得113例患者的有效信息,SIRT1在113例胃癌组织中的表达显著低于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05),癌组织中SIRT1低表达患者癌体浸润深度、淋巴结转移比例、远处转移比例均显著高于高表达患者(P<0.05),pTNM分期晚期比例也高于高表达患者(P<0.05)。胃癌组织中SIRT1表达越高患者预后越好(HR=0.211,95%CI:0.124～0.360,P<0.001)。结论:胃癌组织中SIRT1表达水平与恶性表型呈负性关系,可作为预测手术治疗患者预后的生物标志物。